杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的初步研究

Microscopic examination of Spodoptera litura(SL-1)cell infected with AcMNPV or SfaMNPV revealed progressive cell blebbing starting at 8h～12h postinfection and culminating in total cell destruction at 24h postinfection.The fragmentation of the infected cell nuclei was observed by stained with the specific fluorescent dye DAPI.Agarose gel electrophoresis analysis of the DNA extracted from infected cells show typical DNA ladder. All these supported that both viruses infected SL-1 cells undergo apoptosis.Through lipofectin transinfection,we observed that only the DNA of AcMNPV or SfaMNPV can also induce apopotosis of SL-1 cell.Virus titer analysis revealed that neither viruses can duplicate in SL-1 cells.

昆虫差异蛋白质组:进展和展望

黑腹果蝇Drosophilamelanogaster、家蚕Bombyxmori、意大利蜜蜂Apismellifera和冈比亚按蚊Anophelesgambiae等昆虫的基因组测序已经基本完成,蛋白质组学技术将是阐明这些基因组功能的重要工具。本文综述了应用差异蛋白质组学技术在昆虫诱导性免疫、抗性机制和分子病理研究方面取得的一些成果:(1)细菌、真菌、脂多糖或机械损伤诱导的昆虫血淋巴或血细胞来源细胞系的蛋白质表达的改变;(2)Bt抗性昆虫中肠刷状缘膜和抗锥虫采采蝇Glossinamorsitans唾液腺多种蛋白质表达的改变;(3)化学农药处理和姬蜂Chelonusinanitus携带的多分DNA病毒引起的昆虫蛋白质组的变化。最后讨论了昆虫差异蛋白质组学研究的瓶颈与对策。

昆虫中肠Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N的研究进展

鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其中部分APNs为Cry1A家族毒素的功能性受体。不同种类昆虫的APNs受体 ,甚至同一种昆虫的不同类型APNs,其所结合的毒素种类可能不同。APNs决定该昆虫对Cry1A类毒素的敏感程度差异。有些抗性昆虫的APNs基因编码区发生了多个点突变。

杆状病毒反式激活蛋白IE-1诱导昆虫细胞凋亡及几种抑制剂对AcNPV诱导细胞凋亡的影响

为了探讨杆状病毒诱导细胞凋亡的机制 ,用含AcNPV - ie- 1基因的重组质粒 pGAM -ie- 1转染斜纹夜蛾细胞SL - 1和粉纹夜蛾细胞Tn - 5B1。转染后 2 4h通过光镜观察、DAPI荧光染料染色、DNA琼脂糖凝胶电泳等发现 ,SL - 1发生了典型的凋亡 ,而同样的现象并没有在Tn - 5B1细胞中出现。利用放线菌酮 (cycloheximide,CHX)、莫能菌素 (Monensin)及蚜栖菌素 (aphidicolin)处理AcNPV感染的SL - 1细胞 ,发现细胞凋亡被莫能菌素及蚜栖菌素抑制 ,被放线菌酮推迟。此结果为进一步研究杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的机制等奠定了基础。

八种昆虫离体细胞系对灭多威农药的敏感性研究

采用MTT法 ,研究了灭多威农药对八种昆虫离体细胞系敏感性的差异。结果显示 ,同一浓度处理下 ,不同细胞系细胞病变的程度不同 ,敏感性差异很大。LC50 值在 10 2 ～ 10 5μg/ml范围内变化 ,其中 ,白纹伊蚊细胞系是最敏感的 。

与宿主昆虫液化相关的杆状病毒基因及其蛋白

昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾多角体病毒(AcMNPV)中能特异性降解昆虫细胞内的肌动蛋白。几丁质酶不仅参与了虫体体表面几丁质的降解,同时还参与V-CATH蛋白前体的加工过程,起分子伴侣的作用。对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的研究表明其FP25K基因表达产物通过影响组织蛋白酶的释放与分泌而参与虫体液化。简要综述了此3种基因及其表达产物的结构、功能与特性,并讨论了它们在生产上的应用前景。

昆虫病毒增强蛋白的研究新进展

本文综述近年来对颗粒体病毒增强蛋白基因克隆、生化特性、增效机理的研究，还述及核型多角体病毒基因组中增强蛋白的同源基因以及痘病毒增强蛋白的研究新进展。

昆虫离体细胞对Bt．晶体毒素的抗性选择及抗性测定

用粉纹夜蛾（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉ）建立的一株细胞系ＢＴＩ－ＴＮ－ＳＢ１对苏云金杆菌库斯塔克变种（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒｋｕｒｓｔａｋｉ，Ｈ３血清型）和蜡螟变种（Ｂｔ．ｖａｒ．ｇａｌｌｅｒｉａｅ，Ｈ５血清型）的晶体毒素进行了抗性选择。实验结果表明：ＢＴＩ－ＴＮ－５Ｂｌ细胞系对蜡螟变种的敏感性更高．进一步用Ｂｔ．－Ｈ５型晶体毒素对该细胞系进行抗性选择，经ＭＴＴ法测得连续处理细胞至第１５代时，抗性达到２．

苏云金杆菌δ-内毒素对离体昆虫细胞作用机制的研究

利用ＢａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｉｓｉｓＨＤ－１δ－内毒素作用离体培养的昆虫细胞（Ｐｘ），并测定其对Ｐｘ细胞葡萄糖、Ｎａ＋、Ｋ＋离子吸收的影响．实验表明，δ－内毒素作用Ｐｘ细胞后０．５ｍｉｎ内，细胞对葡萄糖的吸收大量增加，１０ｍｉｎ后，葡萄糖的吸收基本停止，细胞内Ｎａ＋含量的快速增加发生在δ－内毒素作用５ｍｉｎ后，Ｋ＋离子的含量在１ｍｉｎ后开始增加，但增加缓慢．

斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA诱导同源昆虫细胞的凋亡

发现野生型斜纹夜蛾核型多角体病毒 (Spodopteralituranuclearpolyhedrosisvirus ,SpltNPV)DNA转染SL 1细胞能诱导细胞凋亡 .SpltNPV DNA转染其同源细胞系斜纹夜蛾核SL 1细胞 6h后 ,光镜下即可见细胞膜表面突出或形成小泡 ,细胞碎裂成凋亡小体 ,18h后 ,细胞 10 0 %碎裂成凋亡小体 .DAPI荧光染色显示感染细胞核渐呈半月形 ,直至碎裂被凋亡小体包裹 .被转染的SL 1细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型梯形谱带 .野生型SpltNPV病毒粒子感染的SL 1细胞既无多角体的出现 ,也无凋亡现象的发生 .

苏云金芽孢杆菌晶体毒素感染敏感昆虫离体与活体细胞的病理学比较研究

用苏云金芽孢杆菌蜡螟变种81—6菌株的晶体毒素感染菜青虫幼虫和家蚕离体细胞 感染早期两类细胞的线粒体都发生内脊膨大鼓起,随后细胞质内出现较大的空泡,感染后期线粒体膜和细胞质膜都发生溶解和破裂,细胞解体死亡。研究结果表明:离体细胞和活体细胞在感染苏云金芽孢杆菌晶体毒素后,细胞的病变过程相同。

昆虫对苏云金杆菌的抗性研究进展

本文综述了昆虫对苏云金杆菌抗性的产生、抗性稳定性和遗传学基础以及抗性作用机制等方面的研究近况。

两种昆虫细胞的微载体培养

斜纹夜蛾细胞系(SL-1)和家蚕细胞系(BmN)均能在国产微载体上正常生长增殖。以3mg/ml微载体培养细胞,两种昆虫细胞生长最高密度分别为8.2×10~5细胞/ml和7.6×10~5细胞/ml。扫描电镜观察显示一个微载体可贴附几十个,有的多达上百个细胞。两性昆虫细胞的微载体培养特征与常规静止培养无甚差异。

昆虫细胞无血清培养基的研究进展

昆虫细胞无血清培养基的研究进展余泽华，刘冬连，陈曲侯（华中师范大学昆虫学研究所）自Ｇｒａｃｅ（１９６）首次建立天蚕蛾（Ａｎｔｈｅｒ－ａｅａｅｕｃａｌｙｐｔｉ）的四个细胞系以来［１］，昆虫组织培养技术获得了极大的发展。离体培养的细胞为研究昆虫病原物，病...

利用杆状病毒在昆虫细胞内表达

苏云金杆菌以色列亚种（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）的分子量为２７ｋＤ的δ－内毒素蛋白基因，与一个拷贝杆状病毒ｇｐ６７信号肽基因连接后，被插入苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）基因组。在筛选出的３种不同的重组病毒株ＡｃＢＴＩ５－１、ＡｃＢＴＩ５－３和ＡｃＢＴＩ６－３中，前两种表现为多角体阳性，后者为多角体阴性，ＡｃＢＴＩ５－１和ＡｃＢＴＩ６－３在Ｓｆ细胞中表达产生分子量为２６～３０．５ｋＤ的４种与２７ｋＤδ－内毒素蛋白有关的多肽。在ＡｃＢＴＩ５－３感染的细胞中未检测出类似的多肽。粉纹夜蛾在吃了涂有ＡｃＢＴＩ５－１感染的细胞收集物的饲料后，表现典型的苏云金杆菌δ－内毒素中毒症状。被ＡｃＢＴＩ５－１感染的粉纹夜蛾幼虫血淋巴与２７ｋＤδ－内毒素蛋白抗血清呈阳性反应。

一些化学物质对苏云金芽孢杆菌Cry1Ac毒素与昆虫离体细胞相互作用的影响

为探讨苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis(Bt)杀虫晶体蛋白与昆虫细胞的相互作用,以BtCry1Ac毒素和对该毒素敏感的粉纹夜蛾Trichoplusiani离体细胞BTITN5B14为材料,研究了一些化学物质对Cry1Ac毒素与昆虫离体细胞相互作用的影响。结果表明:N-糖基化抑制剂衣霉素、蛋白质合成抑制剂放线菌酮、胞吞作用抑制剂莫能菌素和胰蛋白酶预处理,都能不同程度地提高BTITN5B14细胞对Cry1Ac毒素的敏感性,其中胰蛋白酶预处理的作用最明显;而N-乙酰半乳糖胺不能抑制Cry1Ac毒素对这种离体细胞的毒力。

口服感染昆虫纯化重组杆状病毒

构建可使重组杆状病毒产生多角体的重组转移载体质粒，并将共转染产物喂昆虫幼虫，收集典型病变幼虫血淋巴进行空斑分析，发现子代病毒中约９０％为重组病毒．再进行一轮空斑纯化即可获得纯净的重组病毒，较之传统的空斑纯化方法，节省了人力、物力和时间．

昆虫离体细胞总膜蛋白的提取及双向电泳分析

探讨适用于双向电泳的昆虫离体细胞总膜蛋白提取技术及适于双向电泳染色的高灵敏度蛋白质银染技术。以粉纹夜蛾细胞系BT1-TN - 5B1- 4为材料 ,比较了传统的Kwa法和Sigma公司的ProteoPropTM MEMBRANEEXTRACTIONKIT提取BT1-TN - 5B1离体细胞总膜蛋白 ,SDS -PAGE及双向电泳结果表明Sigma公司试剂盒提取的总膜蛋白效果较好 ,并且适用于双向电泳分析 ;比较了两种蛋白银染方法 ,确定并优化了一种灵敏度较高适于双向电泳的银染方法 ,得到了理想的膜蛋白 2 -DE图谱。