雷莫拉宁的提取精制工艺研究

研究了雷莫拉宁的提取精制工艺。雷莫拉宁发酵液经预处理、树脂HZ801富集纯化、乙醇-1%磷酸二氢钠水溶液(酒精度80%)解吸、500D有机纳滤膜浓缩和丙酮结晶,得到雷莫拉宁粗粉;再通过轴向压缩技术(洗脱剂为乙腈-3‰乙酸水溶液,体积比50∶50)分离、浓缩、2.0%活性炭脱色和丙酮重结晶,得到雷莫拉宁精粉。该工艺绿色环保、易操作,适合工业化放大生产。

诺如病毒疫苗研究概况

诺如病毒(norovirus,NoV)是引发急性胃肠炎疾病的主要病原体之一。NoV易发生突变产生多种毒株,对人类健康造成严重威胁。由于缺乏成功的动物模型,抗NoV药物和疫苗的后续评价受到了限制,目前尚没有上市的疫苗用于NoV的预防。对NoV疫苗的研究进展进行了综述,重点阐述了病毒样颗粒(virus like particles,VLP)疫苗、病毒载体疫苗和基于P颗粒疫苗的研究现状和发展前景,以期为NoV疫苗的研发提供新思路。

他克莫司的分离提纯研究

目的 开发一种他克莫司的分离提纯工艺。方法 采用离子交换树脂脱色除杂、纳滤、结晶等手段得到高质量的他克莫司粗粉,再经反相色谱硅胶层析、复合溶液结晶,得到符合USP标准的他克莫司精粉。结果 优选的脱色树脂为D002,所得他克莫司粗粉效价大于800μg/mg,二氢他克莫司含量小于4%;该粗粉经UniSil C8Ultra Plus层析纯化,精粉含量大于99.5%,最大单杂小于0.1%。结论 该工艺操作简单、能耗低、收率高,适于他克莫司的产业化应用。

健康与患根腐病三七根际和根内微生物群落结构与多样性研究

[目的]研究三七健康植株和根腐病植株根内及根际土的微生物群落结构,探究其与三七根腐病发生的相关性。[方法]利用Illumina高通量测序技术对云南文山连作3年的健康植株根内及其根际土壤、根腐病植株根内及其根际土壤中的微生物群落结构及多样性进行分析。[结果]健康植株及其根际土壤与根腐病植株及其根际土壤中微生物群落的丰富度存在显著差异。黄腐植株根际土中的优势微生物为节杆菌属(Arthrobacter)、毛壳菌属(Chaetomium)和周刺座霉属(Volutella),绿腐植株根际土中的优势微生物为节杆菌属(Arthrobacter)和短梗蠕孢属(Trichocladium)。黄腐植株根内优势微生物为被孢霉属(Mortierella)和木霉属(Trichoderma),绿腐植株根内优势微生物为假单胞菌属(Pseudomonas)、土赤壳菌属(Ilyonectria)和小不整球壳属(Plectosphaerella)。[结论]三七根腐病的发生与植株根际及根内微生物多样性和群落结构密切相关。

离子色谱法测定肝素钠总己糖胺中半乳糖胺含量的方法研究

目的:建立肝素钠总己糖胺中半乳糖胺含量的检测方法。方法:将标准品及供试品在100℃下水解6 h,使用戴安ICS5000型离子色谱仪,以14 mm氢氧化钠溶液为淋洗液在0.5 m L/min流速下,经戴安氨基酸捕集柱(50 mm×4 mm)、PA20型色谱柱(150 mm×3 mm)分离,进入配备Au工作电极、pH-Ag-AgCl参比电极的安培检测器中进行检测。结果:经不低于6 h水解,供试品充分水解,空白溶液无干扰峰,水解标准溶液色谱图中,理论板数、分离度、拖尾因子等均符合USP〈831〉的规定,半乳糖胺的检测限和定量限分别达到2 ng/mL、4 ng/mL,半乳糖胺在4~160 ng/mL浓度范围内线性良好,平均加样回收率达到101.2%,RSD为2.64%,水解标准溶液和水解供试品溶液放置24 h,检测结果的RSD为1.53%。结论:方法专属性、系统适用性、线性、灵敏度、回收率良好,适用于肝素钠总己糖胺中半乳糖胺含量的检测。

大环内酯类抗生素的研究与开发

大环内酯类抗生素因疗效好、安全性高,是临床应用广泛的一类抗菌药物。随着耐药菌的日趋常见,医药研究人员加快了对各类新抗微生物药物的研发。着重介绍了大环内酯类抗生素耐药机制的新发现,第三代大环内酯类抗生素酮内酯类抗生素、酰内酯类抗生素、氮内酯类抗生素及其在感染性疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病中的临床应用,指出今后应尽量避开国外专利,开发国内尚缺、技术含量高、附加值高的新品种,进而推进国内大环内酯类抗生素进入新的快速发展时期。

制药废水活性污泥中高效异养硝化-好氧反硝化菌分离及特性研究

目的从制药废水活性污泥中筛选高效异养硝化好氧反硝化菌株。方法通过富集培养,BTB平板培养基快速筛选,纯化株通过形态生理生化鉴定和16S rRNA分析确定分类地位。在好氧条件下,对筛选株进行脱氮性能研究以及pH、碳源及含量和基础氨氮耐受进行考察。结果获取PWAS17,PWAS21和PWAS343株异氧硝化好氧反硝化菌株。初步鉴定PWAS17为水生产碱杆菌(Alcaligenes aquatilis)、PWAS21为蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus),PWAS34为斯惠假单胞菌(Pseudomonas sihuiensis)。其中Alcaligenes aquatilis和Pseudomonas sihuiensis少有报道。针对3株菌脱氮性能进行研究,结果表明三株菌均能在去除氨氮同时降解COD,并且在去除氨氮过程中几乎无硝基氮和亚硝基氮的积累,均具有异养硝化好氧反硝化特性。通过对菌株脱氮条件优化,得出当pH为9.0,以0.8%柠檬酸钠为碳源,摇床转速220 r/min,接种量5%,温度30℃时最高氨氮去除率,PWAS17最高达92.1%,PWAS21最高达88.7%,PWAS34最高达92.1%。且基础氨氮浓度在50~500 mg/L范围内对3株菌的去除氨氮能力没有明显的抑制。

蛋白核小球藻高密度高蛋白发酵工艺研究

试验旨在提高蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)的生物量和蛋白含量,对发酵配方和发酵工艺进行优化。采用Design-Expert 12 Perfect软件对复合碳源、氮源和维生素等13种因子进行Plackett-Burman筛选,得到显著效应因子为复合碳源(葡萄糖+淀粉,按2.5∶1.0的比例添加能够增加核蛋白小球藻发酵产量)、有机氮源(尿素)、维生素B_(12)(VB_(12))。对上述3个显著效应因子进行Box-Behnken试验设计,通过响应面分析获得最优添加量为复合碳源7.4 g/L、尿素8.8 g/L、VB_(12) 0.4 g/L。经250 mL和1 000 mL三角摇瓶培养基试验验证以及50 L发酵罐补料工艺验证,得出3个不同水平发酵的效果均高于对照组,藻体密度分别提高38.9%、31.1%、42.5%,蛋白浓度分别提高29.8%、31.0%、31.4%。研究表明,优化补料条件下,蛋白核小球藻50 L发酵罐OD_(680 nm)值为0.929,干重91.64 g/L,蛋白含量达43%。

激光散射法测定非达霉素粒度的方法开发与验证

目的 建立激光散射法测定非达霉素原料药粒度的方法。方法 采用Mastersizer 2000激光粒度仪,干法测定,标准文丘里管,样品折射率1.50,颗粒吸收率0.01,分散气压0.20 MPa,振动进样速度80%,背景和测定扫描时间10 s,遮光度范围0.5%~5.0%,每个试样重复测定2次。结果 所建立方法的重复性、中间精密度、耐用性考察结果的RSD均小于10%。结论 该方法准确度高、重复性好,可用于非达霉素原料药的粒度测定。

生物制药的研究进展

生物制药技术是未来医药领域发展的重点方向,合理使用生物技术进行制药研究可显著提高整体效果。据此,文章简要论述现阶段国内生物制药工程的现状,论述现阶段生物制药的主流研发方向,并就我国生物制药发展提出对应改革方案,同时针对创新生物制药的基本思路进行讨论。

激光散射法测定那他霉素粒度研究

为了减少那他霉素原料药各批次之间的粒度差异,提高其制剂产品质量和疗效稳定性,建立了一种激光散射法测定那他霉素粒度的方法。采用Mastersizer 2000激光粒度仪干法测定那他霉素粒度,分别对分散气压、振动进样速度及测量时间等关键测定参数进行了优选,并对本方法的重复性、中间精密度和耐用性进行了验证。结果表明:在分散气压为0.30 MPa、振动进样速度为45%、背景和测量扫描时间为10 s、样品折射率为1.50、颗粒吸收率为0.1、遮光度范围为0.5%~5%等条件下,所测样品的RSD均小于2.5%。方法学各项验证指标相对标准偏差均符合要求。所建立的测定那他霉素粒度的激光散射法精密度较高、重复性好,能够有效控制原料药的批间差异,可为生产出安全、有效、均一、稳定的制剂产品提供保障和参考。

两性霉素B菌种选育及发酵工艺研究

为了提高两性霉素B(amphotericin B,AmB)的产量,降低生产成本,满足市场需求,采用紫外诱变和常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变的复合诱变方法进行菌株选育。首先,对结节链霉菌出发菌株A318-10进行复合诱变;然后,筛选高产菌株,并利用软件Design-Expert 12对显著效应因子进行Box-Behnken Design试验设计,得到最优发酵配方;最后,在1 L摇瓶及50 L发酵罐中进行发酵优化配方验证。结果表明,在紫外诱变60 s并ARTP诱变35 s后,筛选得到了高产菌株20-2-15,其最优发酵配方为葡萄糖94.6 g/L、中温豆粉27.7 g/L、淀粉24.1 g/L;在最优配方下,结节链霉菌1 L摇瓶和50 L发酵罐的发酵最高水平分别为18968μg/mL和21257μg/mL,比原始配方分别提高了32.6%和29.4%。研究结果应用于规模化生产后,有利于降低成本、提高企业竞争力。

反相聚合物填料层析纯化万古霉素工艺研究

研究了反相聚合物填料层析纯化万古霉素工艺。得到了较佳工艺条件为:载样量3.5%,洗杂、洗脱流速2.25 BV·h^(-1),先用3.5 BV的6%甲醇-水溶液洗杂,再用12%甲醇-水溶液洗脱。层析纯化后的万古霉素纯度由原来的93.20%提高到98.22%以上,收率达81%以上。该层析工艺降低杂质效果明显,可在较高的效率下获得高纯度万古霉素,有较高的应用价值。

香加皮乙酸乙酯提取物诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的:研究香加皮乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract from Cortex Periplocae,CPEAE)诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡作用及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度CPEAE对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的抑制作用;应用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法和透射电镜观察凋亡细胞形态;应用流式细胞术分析CPEAE对细胞凋亡率的影响;RT-PCR法检测用药前后细胞凋亡相关基因survivin和bax的mRNA表达情况。结果:CPEAE呈浓度及时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为(0.943±0.005)μg/mL。CPEAE作用48 h后MCF-7细胞发生了特征性的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测可见典型的凋亡峰,2.0μg/mL CPEAE作用72 h时细胞的凋亡率达(30.24±1.26)%。CPEAE作用后MCF-7细胞的survivin mRNA表达降低,而bax mRNA表达增加。结论:香加皮乙酸乙酯提取物(CPEAE)可诱导乳腺癌细胞系MCF-7发生凋亡,可能通过下调survivin基因、上调bax基因的mRNA水平而发挥诱导细胞凋亡作用。

香加皮提取物杠柳苷抑制SMMC-7721细胞Stat3信号通路诱导细胞凋亡的研究

目的研究香加皮提取物杠柳苷对Stat3信号通路的影响,及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法MTT比色法检测人肝癌细胞SMMC-7721增殖活性,流式细胞术分析肿瘤细胞的周期变化和凋亡,Western blot检测细胞内Stat3蛋白表达,RT-PCR检测细胞Mcl-1、Survivin和XIAP mRNA的表达。结果杠柳苷可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,并使细胞周期停滞在G2/M期。杠柳苷作用后,细胞核内Stat3量降低,而细胞质中的量未见明显改变,细胞内Mcl-1、Survivin和XIAP基因的表达明显降低,并呈时间依赖性。结论香加皮提取物杠柳苷通过抑制Stat3信号转导通路和Mcl-1、Survivin和XIAP mRNA的表达,进而抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡。

产生芳香环聚酮类天然产物放线菌的分子筛选研究

目的建立一套简便、快速、高效的芳香环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系,为聚酮类药物筛选搭建一个新的技术平台;认识PKS-II基因在不同环境放线菌群中的分布规律,为新药筛选中微生物资源的定向分离提供依据。方法通过对芳香环聚酮类化合物生物合成途径所用的II型聚酮合酶氨基酸和核苷酸序列的同源性比较分析,设计一对简并引物且以微波炉法提取的基因组DNA为模板扩增KS/CLF功能域约0.8kb目的基因片段,依据放线菌基因组中II型PKS合酶基因的存在与否标定可能的芳香环聚酮类天然产物产生菌。结果利用建立的芳香环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系对99株嗜碱放线菌、100株链霉菌、47株嗜盐放线菌和776株一般放线菌进行了筛选,研究表明链霉菌、嗜碱放线菌、嗜盐放线菌和一般放线菌II型聚酮合酶基因的阳性率分别为54%、29.3%、25.5%和24.1%。结论组合放线菌基因组DNA快速提取技术和PKSII基因简并引物PCR扩增技术建立了快速、简便、高效的芳香环聚酮类化合物产生菌基因筛选体系并对不同环境条件的放线菌菌群的PKSII基因分布进行了研究。结果表明放线菌PKSII聚酮合酶分布具有广泛性;而且同时表明链霉菌是芳香环聚酮类化合物的最丰富来源;在极端环境放线菌中,嗜盐放线菌的PKSII基因在中度嗜盐放线菌分布的频率远高?

顶空进样-气相色谱法检测达托霉素中残留溶剂

目的建立测定达托霉素中3种有机溶剂残留量的顶空进样-气相色谱法。方法色谱柱为Agilent DB-624毛细管柱(60 m×0.53 mm,3.0µm),载气为氮气(流速为5.0 mL/min),程序升温,氢火焰离子化检测器(FID)检测,进样口温度为200℃,检测器温度为230℃,分流比为5∶1(V/V),顶空瓶平衡温度为85℃,平衡时间为30 min,进样量为1µL。结果乙醇、异丙醇和正丁醇质量浓度均在10~200µg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=1.0000);检测限分别为0.75,0.30,0.75µg/mL,定量限分别为2.50,1.01,2.50µg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均回收率分别为101.85%,101.65%,102.33%,RSD分别为0.59%,0.77%,0.78%(n=9)。结论该方法专属性强,灵敏度高,精密度好,可用于达托霉素中前述3种有机溶剂残留量的测定。3批样品中检出的有机溶剂残留量远低于国家标准限度。

香加皮提取物抗肿瘤活性的研究

背景与目的研究中药香加皮提取物的抗肿瘤活性,探讨其抗肿瘤机制。材料与方法采用噻唑蓝(3-[4,5-di methylthiazol-2-yl]-2,5diphenyltetrazoliumbromide,MTT)法观察香加皮醇提物和水提物对MCF-7、TE-13、QG56、SMMC7721、T24、Hela、K562等肿瘤细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术检测肿瘤细胞的周期变化和对凋亡的影响。结果香加皮醇提物和水提物均能明显抑制多种肿瘤细胞的增殖,呈浓度依赖性;醇提物的抑瘤作用(IC50<10μg/ml)强于水提物(IC50<40μg/ml),并且差异具有统计学意义(P<0.05)。香加皮醇提物可将MCF-7细胞阻滞于G0/G1期,并呈时间依赖性地诱导MCF-7细胞发生凋亡。10μg/ml香加皮醇提物作用MCF-7细胞24h,与对照组相比,G0/G1期细胞显著增多,作用48h,凋亡率从对照组的0.70%±0.13%升高到13.54%±2.12%,两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论香加皮提取物对体外肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用,醇提物强于水提物,其抗瘤机制可能与阻滞肿瘤细胞周期和诱导凋亡有关。

三孢布拉霉菌提取番茄红素方法研究

目的:确定从三孢布拉霉菌提取番茄红素的最佳工艺条件。方法:研究了从三孢布拉霉菌中提取番茄红素的方法,通过正交实验确定了最佳工艺条件。结果:丙酮作为溶剂时提取效果最好,其最佳工艺条件为:物料比(菌丝和丙酮的质量体积比,g·mL-1)1∶3,温度35℃,时间为2h。结论:本方法简便、提取率高,适用于工业化生产。