PTP-Shp2抑制剂flavoglaucin的发现与研究

目的以蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2(PTP-Shp2)为靶点发现其小分子抑制剂。方法高通量筛选小分子PTP-Shp2抑制剂并进行动力学分析,利用计算机分子对接分析抑制剂在PTP-Shp2上的结合位点。结果从本实验室微生物代谢产物化合物库中发现了PTP-Shp2蛋白抑制剂flavoglaucin,其IC_(50)值为5.08μmol/L。米氏方程的双倒数分析证明flavoglaucin是非竞争的PTP-Shp2蛋白抑制剂。计算机分子对接结果显示flavoglaucin结合在PTP-Shp2蛋白的WDP loop上并形成3个氢键。结论 Flavoglaucin是微生物来源的新型小分子PTP-Shp2抑制剂。

以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用

目的发现新的FKBP52抑制剂类药物,建立以人FKBP52为靶点的高通量药物筛选模型。方法通过大肠埃希菌表达系统重组表达FKBP52蛋白,并进行纯化。基于FKBP52的肽基-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)的活性特性,建立FKBP52高通量药物筛选体系。对本公司化合物库中的31558个放线菌及真菌次级代谢产物粗提物进行筛选。结果成功构建重组表达菌株BL21(rosetta)/pET-30a/FKBP52。纯化后的重组表达人FKBP52蛋白纯度大于90%,并具有很好的PPIase活性。阳性药FK506能剂量依赖地抑制FKBP52活性,IC50为12.035ng/m L。筛选得到121个抑制率大于80%的样品,其中11株放线菌的次级代谢产物中含FK506,6株放线菌的次级代谢产物中含FK520,7株放线菌的次级代谢产物中含雷帕霉素。对随机抽取的100块96孔板筛选数据进行统计,模型的信号/本底比平均值为2.35±0.26,Z'因子平均值为0.78±0.1。结论本研究成功建立了人FKBP52抑制剂高通量药物筛选模型,该方法具有快捷、灵敏度高、稳定性好的特点,不仅可以快速进行新FKBP52抑制剂的筛选,还可以实现对FKBP52已知抑制剂如FK506、FK520和雷帕霉素等产生菌的定向筛选。