组织学与胚胎学教学的探讨

组织学与胚胎学是医学教育中的基础学科，是学习其他医学理论知识的基石。但在长期的教学活动中，学生普遍反映组织学与胚胎学的学习枯燥，难懂，难记忆。因此，如何使课堂教学更生动更富有吸引力，更能激发学生的兴趣和学习热情，是组织学与胚胎学教学中应该解决的重要问题。

组织学与胚胎学课堂教学中教学幽默艺术的应用

组织学是一门微观形态学为主的重要医学基础课程，课堂讲授的内容往往看不见、摸不着，且名词繁多，学生容易产生厌学情绪。因此如何提高组织学与胚胎学课堂教学效果，培养学生的学习兴趣，是摆在每一位教师面前的首要任务。

对留学生组织学实验教学的几点思考

在留学生组织学实验教学实践中,通过观察留学生学习的特点,总结适合留学生组织学教学的方法,严抓纪律,灵活教学方式,将中国传统教学模式与PBL教学、自我讲评法教学融合,提出急需教师和校方来完成的工作,加强师资培训,编写适合留学生使用的实验教材,以提高留学生组织学实验教学效果。

慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为学及海马Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ的变化

目的探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化。方法成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组(30只)和慢性强迫游泳应激组(30只)。慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备慢性强迫游泳应激模型;糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;荧光探针标记法测定海马神经元内Ca2+浓度;胶体金免疫电镜、免疫印迹和RT-PCR检测CaMKⅡ的表达变化。结果慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为4.114±0.644和86.610±4.450,对照组为8.157±1.105和94.930±2.893,差异有统计学意义(P<0.01);开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96和6.00±0.82,差异有统计学意义(P<0.05);水迷宫实验逃避潜伏期分别为(20.762±3.236)s和(5.632±1.065)s,差异有统计学意义(P<0.01);海马神经元内游离Ca2+浓度分别为(498.94±40.45)nmol/L和(288.91±32.42)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);CaMKⅡ蛋白和mRNA相对表达水平均高于对照组(P<0.01)。结论海马Ca2+及CaMKⅡ的表达上调,可能是抑郁模型大鼠情感行为异常的病理生理基础之一。

抑郁模型大鼠杏仁核神经元凋亡及Bax/Bcl-2的变化

目的:探讨抑郁模型大鼠杏仁核神经元凋亡现象。方法:将成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(15只)和模型组(15只)。采用慢性强迫游泳(4周)制备慢性强迫游泳应激抑郁模型。采用TUNEL和流式细胞术检测杏仁核神经元凋亡和凋亡率,WesternBlot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达变化。结果:模型组和对照组凋亡细胞阳性率分别为24.08±4.30和3.08±0.91,凋亡率分别为17.14±2.71和3.34±0.80,Bax/Bcl-2比值分别为1.73±0.15和0.92±0.07,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:抑郁模型大鼠杏仁核存在明显的神经元凋亡,这可能是抑郁患者杏仁核体积异常的原因之一。

慢性强迫游泳应激大鼠内侧前额皮质磷酸化细胞外信号转导激酶1/2的变化

目的探讨慢性强迫游泳应激模型大鼠内侧前额皮质(mPFC)磷酸化细胞外信号转导激酶1/2(pERK1/2)的表达变化。方法将30只成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(15只)和慢性强迫游泳应激组(15只)。慢性强迫游泳组连续给予28d的强迫游泳,制备慢性强迫游泳应激模型;通过糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠抑郁行为学的改变;采用免疫组织化学、免疫印迹法检测mPFC中pERK1/2的表达变化。结果慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为(4.114±0.644)%、(86.610±4.450)%,对照组为(8.157±1.105)%、(94.930±2.893)%,差异有统计学意义(P<0.01);开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96、6.00±0.82,差异有统计学意义(P<0.05);水迷宫实验逃避潜伏期分别为(20.762±3.236)s、(5.632±1.065)s,差异有统计学意义(P<0.01);免疫组织化学分析显示,对照组和模型组pERK1/2阳性细胞阳性信号吸光度值分别为47.594±5.355和110.810±10.643,差异有统计学意义(P<0.01);免疫印迹法分析结果显示,对照组和模型组pERK/2分别占总ERK1/2的0.216±0.029和0.870±0.066,差异有统计学意义(P<0.01)。结论慢性强迫游泳应激能诱发大鼠抑郁症状,促进mPFCpERK1/2表达。

矽尘致肺泡巨噬细胞氧化损伤的超微结构和细胞化学研究

目的：探讨矽尘致肺泡巨噬细胞损伤过程中是否存在着氧化损伤机制。方法：对矽尘作用于肺泡巨噬细胞产生的 Ｏ２和 Ｈ２Ｏ２进行原位显示、定量测定并做相关分析；以 ＡＴＰａｓｅ作为膜功能酶改变的反映；在亚细胞水平观察细胞形态结构。结果：细胞形态结构受损程度、膜ＡＴＰａｓｅ的活性与矽生致肺泡巨噬细胞早期产生的氧自由基活性直接相关。结论：（ｌ）首次将原位显示氧自由基技术应用于矽尘致肺泡巨噬细胞损伤机制研究，发现氧自由基的产生及其介导的进一步的自由基连锁反应是砂尘损伤肺泡巨噬细胞的机制之一，提示应用抗氧化剂减弱矽生所致的损伤，以预防肺成纤维细胞增殖，给临床用药提供了理论参考；（２）形态学方法定位显示氧自由基比自由基总体测定技术更能直观具体地阐明细胞损伤状况。为矽肺发病机制的研究提供了又一项实验技术。

载脂蛋白E拟肽在脑血管痉挛中的保护机制

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）-细胞外信号调节激酶（ERK）信号转导通路在脑血管痉挛后早期脑损伤中的作用,探讨载脂蛋白E（apoE）拟肽通过此途径发挥的保护机制.方法：采用非开颅血管内穿线法制备小鼠蛛网膜下腔出血（SAH）和脑血管痉挛模型,给予apoE-1410肽,术后脑血管铸型检测大脑中动脉（MCA）直径变化,分别在术后12、 24、 48h 3个时相点取右侧大脑动脉标本,应用免疫印迹法检测各组VEGF、 p-ERK1/2蛋白表达,TUNEL法检测MCA内皮细胞凋亡.结果：模型组MCA出现严重的血管痉挛,管腔直径减小,随脑血管痉挛时间延长,各组小鼠VEGF、 p-ERK1/2蛋白均有不同程度上调,凋亡细胞增多.与模型组比较,治疗组MCA管腔直径增加,各时相点3项指标的表达均不同程度下调.蛛网膜下腔出血12～48h VEGF表达与p-ERK1/2呈正相关;p-ERK1/2与TUNEL呈正相关.结论：脑血管痉挛后VEGF表达增强可通过激活ERK信号途径诱导大脑动脉内皮细胞凋亡;拟apoE-1410肽对脑血管痉挛具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过部分阻抑VEGF/ERK通路活化减少凋亡实现的.

锌对SiO_2致大鼠肺泡巨噬细胞氧化损伤的保护作用

目的 观察锌对SiO2 致肺泡巨噬细胞 (alveolarmacrophages ,AMs)产生氧自由基的动态变化和超微结构、膜酶的影响。方法 对AMs产生的O 2 和H2 O2 进行原位显示、定量测定并做相关趋势分析 ;以ATPase作为膜功能酶改变的反映 ;在亚细胞水平观察细胞形态结构。结果 与单纯SiO2 组比较 ,锌保护组AMsO 2 和H2 O2 反应强度降低 ,超微结构及膜酶损伤减弱。结论 锌能减弱SiO2 致AMs氧自由基的反应强度 ,降低超微结构和膜酶的损伤 ,保护AMs。其作用机制可能与锌增强AMs抗氧化作用有关 ,给临床用药提供了理论指导。

血管内皮生长因子在蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤中的作用机制

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中的分子机制。方法采用非开颅血管内穿线法制备大鼠SAH模型,108只大鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=36)、假手术组(n=36)、模型组(n=36),术后行神经功能评分,分别在伤后12、24、48h3个时相点取脑组织标本,HE染色及电镜观察右侧海马CA1区组织学变化,采用免疫组织化学法、免疫印迹法检测VEGF的表达,TUNEL法检测凋亡细胞表达。结果与对照组比较,模型组大鼠神经功能评分均显著降低(P<0.05),神经细胞内细胞器、轴索及毛细血管等超微结构明显受损,存活数目明显降低。模型组(12、24、48h)大鼠VEGF阳性反应均有不同程度增强(P<0.05),随出血时间延长(12、24、48h),凋亡细胞增多(P<0.05),并于48h达高峰。SAH12～48h海马区VEGF与TUNEL表达呈正相关(r=0.847,P<0.01)。结论 SAH后VEGF高表达可促进神经细胞凋亡,参与SAH后早期脑损伤的病理进程。

煤尘致肺泡巨噬细胞氧化损伤的细胞化学研究

目的 探讨煤尘致肺泡巨噬细胞 (alveolar macrophages,AM) ,损伤过程中是否存在着氧化损伤机制。 方法 应用细胞化学法显示煤尘作用于 AM产生的 O·2 和 H2 O2 、并做定量测定及相关分析 ,以 Mg2 + - AT-Pase组织化学染色作为检测膜变化的指标。 结果 煤尘致 AM产生的氧自由基较矽尘的少 ,同时细胞的形态结构和膜酶的损伤程度也较低。 结论 (1)应用抗氧化剂可减弱煤尘对 AM所致的损伤 ,进而预防肺成纤维细胞增殖 ;(2 )与矽尘相比 ,煤尘致 AM氧化损伤的程度较弱 ;(3)形态学方法定位显示自由基较之自由基总体测定技术更能直观、具体地阐明细胞损伤的实际状况。

大鼠两型肺泡巨噬细胞吞噬煤粒的图像分析和扫描电镜研究

用微分干涉差显微镜、扫描电镜和图像分析技术,对大鼠两型肺泡巨噬细胞体外吞噬煤粒能力及吞噬方式做进一步研究。结果显示,球型细胞吞噬煤粒能力较扁平型细胞强。两型细胞均可伸出细长突起,捕捉细胞周围的煤粒,煤粒逐渐陷入,被细胞以内吞方式摄入胞体。还对单位时间内巨噬细胞摄入的煤粒,进行了定量测定,为细胞吞噬无机粉尘物质提供了一种新的研究方法和测量手段,也为尘肺发病机理研究提供一些形态学依据。

煤尘超微结构特征与其毒性的关系

为探讨煤尘超微结构特征与其毒性的关系 ,借助透射电镜和生物化学技术 ,对不同矿区煤尘致肺泡巨噬细胞的损伤及其与煤尘超微结构特征的关系进行比较。结果显示煤尘对肺泡巨噬细胞不但造成胞质酶、溶酶体酶外漏 ,而且可致超微结构损伤。外形棱角锐利 ,结构排列有序 ,硬而脆的煤质 ,对细胞的损伤更重。提示煤尘毒性大小与煤尘颗粒的超微结构特征有关 ;煤尘可致肺泡巨噬细胞形态结构损伤 。

大鼠肺泡巨噬细胞NOS表达的细胞化学和免疫细胞化学研究

用 NADPH-黄递酶细胞化学和 i NOS免疫细胞化学方法 ,结合图像定量分析 ,动态研究了 1μg/ml脂多糖诱导培养的大鼠肺泡巨噬细胞 i NOS的表达情况。结果发现 :脂多糖刺激 1小时染色反应强度与对照组相比无显著差异 ,6小时后明显高于对照组 ,随刺激时间延长 ,染色反应强度呈增高趋势 ,18小时后则趋于相对平稳 ;两种染色法显示的阳性细胞均以核周区染色反应为著。实验从形态学角度表明 :(1) NADPH-黄递酶细胞化学染色能够反映培养的大鼠肺泡巨噬细胞 NOS表达状况 ;(2 )脂多糖可诱导肺泡巨噬细胞 i NOS表达 ,其主要存在于核周区胞浆中。

MMP-9基因启动子单核苷酸多态性与子宫内膜异位症遗传易感性的关系

目的：探讨MMP-9基因启动子区的单核苷酸多态性与子宫内膜异位症遗传易感性的关系.方法：采用蛋白酶K消化-饱和酚氯仿法提取外周血白细胞DNA、聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析（PCR-RFLP）分别对120例子宫内膜异位症和240例对照组进行基因分型和序列测定.结果：病例组MMP-9-1562 CC、CT和TT基因型频率分别为81.7%、17.5%和0.8%,对照组分别为75.8%、23.3%和0.8%,两组无统计学差异（P=0.44）.两组CC及CT＋TT基因型频率差异也无统计学差异.非条件Logistic回归分析结果显示,携带T等位基因者发生子宫内膜异位症风险是对照组的0.70倍（95%CI=0.40～1.22）.结论：MMP-9-1562C＞T遗传变异可能与子宫内膜异位症的发病无关.

高半乳糖血症大鼠晶状体的病理改变

目的 :应用光学显微镜和电子显微镜研究高半乳糖血症幼鼠发病早期晶状体的病理改变 ,探讨高半乳糖血症发病过程中晶状体结构的改变过程 .方法 :应用Wistar大鼠幼鼠采用腹腔注射半乳糖的方法诱发高半乳糖血症 ,在发病早期阶段取晶状体 ,分别应用光学显微镜和电子显微镜观察晶状体结构的改变 .结果 :Wistar大鼠幼鼠在诱发高半乳糖血症后的 3d光镜即可见晶状体上皮细胞出现细胞内空泡 ,纤维肿胀 .电镜下可见细胞膜上的缝管连接异常 ,胞质内可见许多空泡样结构出现 .结论 :高半乳糖血症在发病早期即可导致晶体浑浊 。

慢性低氧大鼠肾上腺皮质球状带的变化

将Ｗｉｓｔａｒ大鼠喂养在逐渐降低的常压低氧条件下，用氮气和空气的混合气体调节氧含量。氧浓度由正常含量逐步降低为１５％、１２％、１０％、８％，最后降至７％，实验共进行１１２ｄ。结果显示低氧动物体重下降，肾上腺重量减少，肾上腺皮质球状带萎缩，脂质丢失，球状带细胞线粒体肿胀和空泡变性，溶酶体增多。表明在慢性常压低氧中，当吸入气氧含量降至７％时，可导致肾上腺皮质球状带细胞超微结构改变，从而影响醛固酮的合成与分泌。

ApoE肽段预处理通过调节c-jun氨基端激酶阻抑小鼠脑缺血再灌后神经细胞的凋亡

目的:为探讨外源性载脂蛋白E(apoE)肽段对局灶性脑缺血再灌(I/R)的保护机制,观察apoE-1410拟肽对I/R小鼠脑组织磷酸化c-jun氨基端激酶(JNK)表达变化的影响。方法:实验选用160只雄性ICR小鼠,随机分为3组:假手术对照组(sham组),模型组(I/R组),apoE治疗组(apoE组),采用可逆性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,术后行神经功能评分。I/R3、6、12、24、48h行HE染色观察皮质区神经细胞的形态变化,并计算存活神经元的数目。利用WesternBlot法、免疫组织化学法检测p-c-jun的表达,行TUNEL法检测凋亡细胞数。结果:与对照组比较,模型组小鼠神经功能评分均降低,I/R12h后存活神经元数目明显减少;p-c-jun阳性反应术后3、6、12、24h显著增高(P<0.05);随缺血时间延长,凋亡细胞增多,并于48h达高峰(P<0.05)。与模型组比较,治疗组小鼠神经功能评分增加,各时相点p-c-jun和TUNEL表达均不同程度下调(P<0.05)。I/R3h至48h皮质区p-c-jun表达与TUNEL呈正相关(r=0.716,P<0.01)。结论:缺血侧皮质区p-c-jun表达的增强可诱导I/R后神经细胞凋亡;拟apoE-1410肽对I/R具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过抑制JNK活化实现的。