探讨临床药理学教学方法的改进

通过教育鄙的网络培训,笔者对自身所从事的教学工作有了一个全新的认识和体会,并把平时教学工作提升到一个理论高度,认识到激发学生的学习兴趣在课堂教学中起着重要作用;在课堂讲解过程中,应及时加入学科最新进展,不断更新纯计资料;还要注意掌控课堂气氛,课堂上教师的表情也要亲切自然;教学过程要通过不同的手段增加趣味性。最终才能获得良好的教学效果。

一种病毒性哮喘模型制作方法的建立及评价

目的评价用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏,建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果。方法BALB/c小鼠100只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS/PBS)对照组、PBS/RSV组、RSV/RSV组、OVA/PBS组和OVA/RSV组5组。应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型。观察小鼠哮喘急性发作症状;动物体描箱法测定乙酰胆碱(Ach)激发条件下气道反应性(以肺阻力RL表示);支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数;HE染色观察肺组织病理变化。结果①以45、135、405μg/mL Ach激发时,与其他各组比较,OVA/RSV组RL均显著升高(P均<0.01);②BALF中炎性细胞分类计数,与其他各组比较,OVA/RSV组的细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均显著升高(P均<0.01);③OVA/RSV组的肺组织病变程度重于其他各组(P均<0.01)。结论RSV诱导OVA致敏的方法建立小鼠急性病毒性哮喘模型是成功的。

姜黄素通过影响自噬调控肝细胞上皮间质转化及肝纤维化进程的作用与机制研究

目的明确自噬在姜黄素调控肝细胞上皮间质转化进程及向肌成纤维细胞转变中的作用,阐明其中的调控机制。方法小鼠胚胎肝细胞BNLCL.2,与构建的BECN1基因干扰BNLCL.2细胞,以TGF-β1(2μg·L^-1)处理细胞,给予姜黄素(10、20、30μmol·L^-1)干预,real-time PCR与Western blot检测BNLCL.2细胞Beclin-1、LC3、Vimentin及α-SMA基因与蛋白的表达情况,光学显微镜下观察细胞形态变化,GFP-LC3质粒转染监测细胞自噬水平变化。结果TGF-β1处理后,自噬水平下降,BNLCL.2细胞Vimentin及α-SMA表达增加,细胞形态发生间质型转变。姜黄素能抑制TGF-β1诱导后肝细胞Vimentin及α-SMA的表达,增加肝细胞自噬相关基因与蛋白BECN1、LC3的表达,升高细胞自噬水平,抑制肝细胞的上皮间质转化进程。干扰自噬相关基因BECN1后,姜黄素抑制肝细胞上皮间质转化的效应被部分阻断。结论姜黄素通过提高肝细胞自噬水平,抑制肝细胞上皮间质转化进程,进而抑制肝纤维化的发生与发展。

Liguzinediol的正性肌力作用机制及心脏安全性

目的探索Liguzinediol(LZDO)对正常大鼠离体心脏正性肌力作用的机制,并评价其心脏安全性。方法①大鼠离体心脏实验:按照灌流液(空白对照)→LZDO 100μmol.L-1→洗脱的顺序灌流,持续5 min并于灌流5 min末记录大鼠离体心脏左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升/降速率(±dp/dtmax)及心率(HR)。②豚鼠在体和离体实验:在体实验按照生理盐水→LZDO 1.7 g.kg-1的顺序经颈外静脉缓慢推注,持续5 min,于每次处理后5 min记录5只豚鼠心电图。离体实验按照灌流液(空白对照)→LZDO 300μmol.L-1的顺序灌流,持续5 min,于灌流5 min末记录豚鼠离体心脏心电图。分析P-R间期和心率校正QT间期(QTc间期)。③膜片钳全细胞法记录细胞膜离子通道电流:按照灌流液(空白对照)→尼莫地平2μmol.L-1顺序灌流左心室肌细胞,记录电流。灌流液(空白对照)→LZDO100μmol.L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录其5个细胞的L型钙电流。另两组实验按照灌流液(空白对照)→LZDO 1→10→100→300μmol.L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录hNav1.5和hERG电流。④激光共聚焦方法测定左心室心肌细胞的钙释放量:按照灌流液(空白对照))→LZDO 100μmol.L-1的顺序灌流,于灌流2 min和30 min末记录心肌细胞钙释放量。结果①大鼠离体心脏实验:尼莫地平1μmol.L-1和rethenium red 5μmol.L-1均能完全阻断LZDO 100μmol.L-1的正性肌力作用。②豚鼠在体和离体心电图实验:豚鼠在体给予LZDO 1.7 g.kg-1或豚鼠离体心脏灌流LZDO 300μmol.L-1后,P-R及QTc间期并没有显著性改变。③细胞膜离子通道电流实验:LZDO 100μmol.L-1未能显著地增加大鼠左心室肌细胞的L型钙电流;LZDO 1,10,100和300μmol.L-1未能显著地改变hNav1.5和hERG电流。④激光共聚焦测定左心室心肌细胞钙释放实验:LZDO 100μmol.L-1显著增加左心室心肌细胞钙释放,于2 min末钙释放量达到最大值,并能维持到30 min(P<0.05)。结论 LZDO对L型钙通道无直接作用,LZDO是通过作用肌浆网钙释放来起到正性肌力作用的;LZDO在体1.7 g.kg-1或离体300μmol.L-1无致心律失常的作用。

川芎嗪衍生物影响肝星状细胞增殖的作用机制研究

目的研究川芎嗪衍生物H168抑制肝星状细胞(HSC-T6)增殖的机制。方法 MTS比色法观察H168对HSC-T6细胞增殖的影响;流式细胞仪检测H168对细胞周期的影响;应用Western blot和Real time PCR方法观察H168对p21/p27蛋白及mRNA表达的影响。结果 MTS结果显示H168具有明显的抑制HSC-T6增殖的作用,随着药物浓度的增大,对HSC-T6增殖的抑制作用逐渐增强,呈现量效关系。流式细胞周期检测发现H168作用24 h后,G0/G1期细胞增多,S期及G2/M期细胞减少;Western blot结果显示H168通过促进p21/p27蛋白表达抑制细胞的增殖;进一步采用Real timePCR研究发现,H168能够从mRNA水平促进p21/p27表达。结论 H168能抑制HSC-T6细胞的增殖,这主要是通过促进p21/p27蛋白和mRNA的表达而抑制HSC-T6细胞增殖。

异丙嗪加重清开灵注射液导致的心律失常

目的研究异丙嗪(PMZ)对清开灵注射液(QKL)所致心律失常的影响。方法①豚鼠在体心脏实验:按照QKL 3.1→15.5→31→93 m.lkg-1的顺序累加静脉推注,每组持续5 min,于处理后5 min记录心电图;按照QKL 31 m.l kg-1→PMZ 7.67 mg.kg-1→PMZ 38.35 mg.kg-1的顺序累加静脉推注,每组持续5 min,于处理后5 min记录心电图。②豚鼠离体心电图实验:按照QKL 3.3→33→66→99 m.lL-1的顺序灌流,每一组灌流持续5 min,分别记录各浓度组给药5 min后的心电图;按照QKL 33 m.lL-1→QKL33 m.l L-1+PMZ 1μmo.l L-1→QKL 33 m.l L-1+PMZ 10μmo.l L-1→QKL 33 m.l L-1+PMZ 30μmo.l L-1→QKL 33 m.l L-1+PMZ 50μmol.L-1→QKL 33 ml.L-1,每一组灌流持续5 min,分别记录各浓度组给药5 min后的心电图。③记录左心室乳头肌动作电位实验:按照QKL 3.3→33→66→99→165 ml.L-1→洗脱的顺序灌流,分别记录每个浓度组的动作电位图形。按照QKL 99 ml.L-1→QKL 99 m.l L-1+PMZ1μmo.lL-1→QKL 99 ml.L-1+PMZ 10μmol.L-1→洗脱顺序,分别记录每个浓度组的动作电位图形。结果①QKL 31 m.lkg-1明显延长豚鼠在体心电图QRS及QTc间期。合用PMZ 38.35 mg.kg-1进一步延长P-R,QRS间期及QTc间期,并能显著减慢心率(P<0.05)。②QKL 33 m.lL-1延长豚鼠离体心电图QRS间期。合用PMZ 1,10,30或50μmo.lL-1呈浓度依赖性延长P-R,QRS间期及QTc间期,并能显著减慢心率(P<0.05)。③QKL 99 ml.L-1合用PMZ 10μmol.L-1使豚鼠左心室乳头肌动作电位部分消失。结论 PMZ能加重QKL诱发的豚鼠心律失常,临床上应该谨慎使用PMZ抢救QKL导致的严重不良反应的患者。

环维黄杨星D对Na_2S_2O_4诱导EVC304细胞损伤的保护作用

目的:研究环维黄杨星D(CVB-D)对Na2S2O4诱导EVC304细胞损伤的保护作用。方法:采用体外培养人脐静脉内皮细胞EVC304,Na2S2O4作为耗氧剂建立细胞缺氧损伤模型。用MTT法测定细胞存活率与细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力反映细胞损伤的程度,培养液一氧化氮合酶(NOS)活力与内皮素(ET)含量分析EVC304细胞的功能。结果:CVB-D能显著抑制Na2S2O4诱导EVC304细胞OD570的降低和细胞培养液中LDH活力的增加,提高培养液中NOS活性,降低ET的含量(与模型组比较,P<0.05或P<0.01)。结论:CVB-D对Na2S2O4诱导EVC304细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与改善NOS和ET失调有关。

消痔洗剂的安全性实验

目的评价消痔洗剂的安全性。方法 (1)用脱毛膏脱去SD大鼠背部毛发后,用消毒过的12号针头刮擦皮肤,作"#"字形破损("#"字笔画的宽度在3 mm左右),以轻度渗血为度,制作破损皮肤组,将消痔洗剂涂敷于实验动物的完整和破损皮肤上,在不同的时间点后分别观察SD大鼠急性皮肤毒性、局部刺激作用。(2)将豚鼠分为DNFB组和消痔洗剂组,观察2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)和消痔洗剂致豚鼠过敏反应。结果 (1)在大鼠的皮肤急性毒性实验中,8倍临床浓度的消痔洗剂未见皮肤红斑及水肿等常规的急性毒性。但在超高浓度(16.8倍临床浓度,含生药3.36g/ml)的使用中,发现动物毛发生长有稀少的现象,但未见其他异常。(2)局部应用消痔洗剂(8倍临床浓度,含生药1.6 g/ml)后,在1、24、48、72小时观察期内,刺激强度的积分值均为0,提示消痔洗剂对大鼠完整皮肤和破损皮肤无刺激性。(3)过敏反应在致敏后6小时、24小时、48小时、72小时观察,DNFB组积分值分别为1.8±0.6、2.4±0.7、2.1±0.7、1.6±0.7,消痔洗剂组均为0(P<0.01),提示消痔洗剂对豚鼠也未见过敏反应。结论在医师的指导下,避免超高浓度的使用,消痔洗剂是一种安全的外用制剂。

六味地黄丸对围绝经期综合征细胞模型的影响

目的探讨六味地黄丸治疗围绝经期综合征的依据。方法利用围绝经期综合征的细胞模型,观察六味地黄丸对卵巢颗粒细胞生长的影响。结果六味地黄丸对颗粒细胞的生长呈现抑制作用。结论六味地黄丸对颗粒细胞生长的抑制作用与其在临床治疗围绝经期综合征的关系较为复杂,该方用于围绝经期综合征可能与其改善症状有关。

消痔洗剂的药效学试验

目的观察消痔洗剂的抗炎、镇痛、止血作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、醋酸致小鼠扭体反应法、小鼠尾尖止血法,分别观察消痔洗剂的抗炎、镇痛、止血作用。结果消痔洗剂可显著降低二甲苯致小鼠耳肿胀,其最高的肿胀抑制率超过40%;显著降低小鼠的扭体反应数,其中以8.4 g生药/kg剂量组最为显著,该剂量组各时间段的镇痛百分率均在40%以上,最高为50.6%;显著缩短小鼠尾尖的出血时间,以消痔洗剂的1.68,3.36 g生药/mL剂量组作用最为明显。结论消痔洗剂具有显著的抗炎、镇痛、止血作用。

法尼酯衍生物X受体在慢性肝病中的作用及机制研究进展

法尼酯衍生物X受体(farnesoid X receptor,FXR)在胆汁酸代谢、脂代谢、糖代谢等物质代谢过程中发挥关键作用。慢性肝脏疾病的发生发展与机体代谢功能紊乱密切相关。近期研究显示,作为代谢调控关键因子,FXR在慢性肝脏疾病中,如病毒性肝炎、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、肝纤维化、肝癌等扮演着重要角色。该文就近年来FXR在慢性肝脏疾病的发生发展过程中的作用及机制作一综述,旨在为抗纤维化研究及药物研发提供新的视角和治疗靶标。

Hedgehog信号通路与肝损伤:可能的药物作用靶点

刺猬(hedgehog,Hh)信号通路是一条与成骨相关的信号通路。在胚胎发育期间,它调控祖细胞的生长和分化及各组织的形成。当肝脏受到损伤后,这条信号通路被激活。活化的Hh信号通路参与肝损伤修复反应的多个方面,包括肝祖细胞的增殖,肌成纤维细胞的转化与生成,肝脏多种细胞的凋亡,与肝损伤引起的炎症反应以及血管重塑过程等。该文将对近年来Hh信号通路参与肝损伤修复机制的研究及可能的药物作用靶点作一综述,旨在为抗肝纤维化的研究提供新的视角和治疗靶标。

大黄附子汤含药血清对重症急性胰腺炎小鼠腹腔巨噬细胞JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨大黄附子汤含药血清对重症急性胰腺炎小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响及其机制。方法制备小鼠重症急性胰腺炎模型,取其腹腔巨噬细胞分成模型组、大黄附子汤含药血清(2.5%、5.0%、10.0%)组、酪氨酸磷酸化抑制剂AG490(10μmol/L)阳性对照组,细胞继续培养2 h后,各给药组给予相应含药血清、对照组给予空白血清0.5 mL,培养24 h,收集上清液。ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blotting法检测pJAK2、pSTAT3基因和蛋白表达水平。结果大黄附子汤能显著减少大鼠腹腔巨噬细胞分泌的IL-6、TNF-α,抑制pJAK2、pSTAT3基因及蛋白的表达。结论大黄附子汤含药血清可能通过降低pJAK2、pSTAT3基因和蛋白的表达,阻断JAK2/STAT3信号转导通路,抑制腹腔巨噬细胞分泌IL-6、TNF-α,从而减轻机体过度的炎症反应和重症急性胰腺炎的病情。