化疗药物对高表达SNCG的乳腺癌细胞株T47D的抑制作用的实验研究

目的:探讨各种化疗药物对高表达γ突触核蛋白(SNCG)的乳腺癌T47D细胞株的抑制作用。方法:常规培养不表达及高表达SNCG的乳腺癌MCF-7及T47D细胞株,采用MTT法观察顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(TAX)、依立替康(CPT-11)对细胞的抑制作用,并用流式细胞术分析药物作用后的细胞周期变化及细胞凋亡。结果:作用60 h后,ADM、VCR、TAX及CPT-11对T47D细胞的抑制作用显著低于MCF-7细胞(P<0.01),而DDP、5-FU对T47D细胞的抑制作用与MCF-7细胞相比差异无显著性(P>0.05),且显著高于其他4种抗肿瘤药物(P<0.01)。药物作用T47D细胞60 h后,DDP、5-FU组的细胞增殖指数(PI)及Caspase-3表达均较对照组及其他4组差异有极显著性(P<0.01)。结论:DDP及5-FU对高表达SNCG的T47D细胞的抑制作用显著高于ADM、VCR、TAX及CPT-11,此可为临床对乳腺癌患者个体化治疗方案的选择提供体外实验依据。

胃癌生长抑素受体mRNA表达的研究

目的:研究胃癌组织中生长抑素受体(SSTR)各亚型的分布与表达特性。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测24例胃癌肿瘤组织与癌旁正常组织中5种SSTR亚型mRNA的表达。结果:胃癌肿瘤组织及癌旁组织中SSTR1、2、5mRNA阳性表达率均为100%(24/24);SSTR3、4mRNA在肿瘤组织的阳性表达率分别为79%(19/24)和71%(17/24),在癌旁组织的阳性表达率分别为83%(20/24)和75%(18/24)。RT-PCR产物凝胶定量分析结果表明胃癌肿瘤组织各型生长抑素受体mRNA的表达量均较癌旁组织为低,但差异无统计学意义,P>0·05。胃癌肿瘤组织中以SSTR2mRNA表达量最高,其次为SSTR5、SSTR1、SSTR3mRNA,SSTR4mRNA表达量最低。结论:胃癌肿瘤组织中存在5种生长抑素受体亚型的表达,并以SSTR2的表达最为显著。

盐酸小檗硷对人肝Bel-7402细胞株LDLR表达的影响

目的:探讨盐酸小檗硷(BBR)在体外对人肝Bel-7402细胞株LDLR表达的影响。方法:采用不同浓度的BBR与人肝Bel-7402细胞株共同培养不同的时间后,通过RT-PCR、流式细胞术及Western-Blotting技术分别检测LDLRmRNA、LDLR及过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果:经BBR处理过的肝细胞的LDLRmRNA表达明显增加,且其表达强度与所加入的BBR浓度及及作用时间呈正相关;最小有效剂量是0.25μg/ml,最短起效时间是2h,24h仍保持较高的表达水平。而PPAR-γ的mRNA表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:BBR能通过增加LDLR的表达而有效调节细胞对脂蛋白的摄取和代谢,从而维持细胞外LDL-C水平的稳定。

淋巴化疗对胃癌淋巴转移灶的临床治疗研究

目的:研究淋巴化疗对胃癌淋巴转移灶的直接治疗作用。方法:实验组(淋巴化疗组):术前经内镜胃粘膜下注射,加手术时胃浆膜下及腹膜内注射化疗药与活性碳的混悬液;对照组(血液化疗组):术前经股动脉插管灌注化疗药的水溶液,用流式细胞术检测化疗前后的胃癌组织及化疗后的转移淋巴结。结果:淋巴化疗后,检测术后阳性淋巴结,其SPF(S期细胞比例)、APO(细胞凋亡)发生率及bcl-2表达与动脉灌注化疗组之间的差异有高度显著性(P<0.01)。结论:经血液途径给药的化疗对淋巴系统转移灶作用甚微,而淋巴化疗能促进淋巴系统肿瘤细胞凋亡的发生,对淋巴转移灶具有直接的治疗作用。

胃癌患者不同组织CD44v5+细胞表达率的比较

目的 探讨胃癌患者不同组织CD4 4v5的表达规律。方法 采用流式细胞术对于 39例胃癌患者的癌灶、癌旁组织、淋巴结转移灶和外周血细胞的CD4 4v5表达率进行了检测和对比分析。结果 胃癌患者不同组织的CD4 4v5 +细胞检出率均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。胃癌患者各种组织CD4 4v5 +细胞表达率大小顺序为癌灶 >癌旁组织 >淋巴结转移灶 >外周血细胞 ,前三者和外周血细胞之间有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,而前三者之间却无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在胃癌患者的各种组织中 ,伴肿瘤转移患者的CD4 4v5 +细胞检出率均显著高于未转移者 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 胃癌患者身体各种组织的CD4 4v5 +细胞表达率显著升高 ,且CD4 4v5 +细胞表达率与肿瘤转移密切相关。

阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其机制研究

背景:研究显示ERK信号通路激活可促进细胞生长,上调紧密连接蛋白occludin表达,而阿司匹林可抑制ERK的磷酸化激活。目的:探讨阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其可能机制。方法:建立人胃黏膜上皮细胞株GES-1单层细胞模型,MTT法检测阿司匹林(5～20 mmol/L)和MEK抑制剂U0126(10～40μmol/L)对GES-1细胞的生长抑制作用。将GES-1细胞分为阿司匹林(8.78 mmol/L)组、U0126(14.91μmol/L)组、联合组(U0126+阿司匹林)和阴性对照组,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测p-ERK1/2、occludin蛋白表达。结果:阿司匹林和U0126均能剂量依赖性地抑制GES-1细胞生长,联合组细胞凋亡较两药单用更为显著,贴壁细胞数量减少更为明显,细胞变圆、悬浮。阿司匹林组、U0126组和联合组p-ERK1/2、occludin蛋白表达量均显著低于阴性对照组,U0126组和联合组降低更为明显。结论:阿司匹林可抑制人胃黏膜上皮细胞生长,下调occludin蛋白表达,其机制至少部分与抑制ERK信号通路激活有关。

氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖作用的影响

目的:探讨氯吡格雷(Clopidogrel)对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响.方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1,将含不同浓度氯吡格雷(0.01、0.1、0.5和1mmol/L)的培养液与GES-1细胞共同培养24、48及72h,采用MTT比色法计算细胞生长抑制率.以药物不同浓度对GES-1细胞生长抑制率作图,得到剂量反应曲线.依据Bliss法,利用SPSS15.0软件求出氯吡格雷的半数抑制浓度IC50和安全浓度IC90(存活率≥90%的药物浓度).倒置相差显微镜观察各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后细胞形态学变化,用流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后对细胞凋亡的影响.结果:氯吡格雷对GES-1细胞的损伤呈浓度依赖性(F=11.546,P=0.002),无时间依赖性(F=13.455,P=0.003).氯吡格雷作用24h、48h和72h的IC50分别为0.36、0.51和0.35mmol/L,IC90分别为0.08、0.16和0.08mmol/L.光镜下可见药物作用后贴壁细胞数量减少,细胞变圆,悬浮,部分细胞核浓缩,细胞损害随药物浓度增加而增大.流式细胞术显示:空白对照组及0.01、0.1、0.5、1mmol/L氯吡格雷组凋亡率为4.7%、5.3%、14.7%、51.0%、60.5%.随着氯吡格雷药物浓度增加,GES-1细胞的凋亡率亦随之增加.结论:氯吡格雷可抑制人胃黏膜上皮细胞的增殖,具有剂量依赖性,诱导细胞发生凋亡.

白细胞介素10基因启动子区多态性与胃癌易感性的关系研究

目的:分析胃癌(gastric cancer,GC)患者白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)的启动子区域转录起始位点上游第1082位点、819位点及592位点多态性,探讨其与GC易感性之间的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测GC组患者129例和正常对照组98例健康人的IL-10的基因多态性,免疫印迹法检测GC组与对照组的幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染情况,SPSS11.0软件包统计分析各位点的基因型分布和等位基因频率。结果:IL-10-1082位点的多态性在GC组(AA:57.36%、GA:40.31%、GG:2.32%)与对照组(AA:75.51%、GA:24.49%)的基因频率有显著性差异(P=0.01)。GA基因型在GC组中的频率显著高于对照组(P=0.012),G等位基因在GC组中的频率显著高于对照组(P=0.007)。IL-10-819及IL-10-592的各基因型及其等位基因在GC组及对照组中分布均无显著性差异(P>0.05)。在H.pylori感染组中IL-10-1082GA基因型在GC组中的分布显著高于其在对照组中的分布(OR=2.65,95%CI1.16,6.08;P=0.031)。结论:IL-10-1082GA基因型携带者GC的发病风险增高,IL-10-1082位点的G等位基因发病风险增高,且IL-10-1082GA基因型与H.pylori感染对于GC的发生有协同作用。

内皮抑素治疗肿瘤的研究进展

内皮抑素(endostain,ES)是一种内源性肽段,可抑制内皮细胞生长进而抑制新血管的生成,具有广谱抗肿瘤活性。尽管ES具有较低的毒性、免疫原性和耐受性等优点,但其对于肿瘤治疗的临床试验效果具有争议。文中对ES的来源、结构、作用机制以及现有的治疗策略作一综述。

恶性肿瘤细胞DNA倍体分类方法的改进及其临床应用

采用流式细胞术建立一种改良的细胞DNA倍体分类方法,对100例恶性肿瘤患者瘤组织进行了DNA倍体分类,并对其倍体类型和瘤组织细胞生物学特性、患者临床生物学行为之间的关系进行了分析。结果表明瘤组织细胞的DNA倍体类型分为:二倍体、近二倍体、四倍体、非整倍体和多异倍体细胞,后4种倍体类型统称为DNA异倍体。患者瘤组织细胞DNA倍体分类不同,其细胞生物学特性明显不同,患者临床生物学行为也明显不同。改良后的DNA倍体分类方法,不仅能客观地反映肿瘤细胞的生物学特性,而且还能准确地反映患者肿瘤的恶性程度和不同的临床生物学行为特征,可在临床推广应用。

阿司匹林、氯吡格雷联用对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响

目的探讨阿司匹林、氯吡格雷及二者联用对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1,分别将不同浓度阿司匹林(2.5、5、10和20mmol/L)及氯吡格雷(0.01、0.1、0.5和1mmol/L)与GES-1细胞共同培养24、48、72h,采用MTT比色法计算细胞生长抑制率。分别以药物的不同浓度对GES-1细胞生长抑制率作图,得到剂量反应曲线。根据Bliss法,分别求出阿司匹林和氯吡格雷的半数抑制浓度(IC50),倒置相差显微镜下观察IC50剂量阿司匹林和IC50剂量氯吡格雷单独和联合与GES-1细胞共同培养24h后,细胞形态学变化。MTT比色法检测药物联合作用对GES-1细胞增殖率的影响。结果阿司匹林对GES-1细胞的损害呈剂量和时间依赖性。阿司匹林作用24h的IC50为18.32mmol/L(95%CI=2.66～26.98)。氯吡格雷对GES-1细胞的损害呈剂量依赖性,但无时间依赖性。氯吡格雷作用24h的IC50为0.36mmol/L(95%CI=0.26～0.46)。光镜下可见药物作用后贴壁细胞数量减少,细胞变圆,悬浮,部分细胞核浓缩;药物联合作用组悬浮细胞数明显增多,细胞损害明显增大。氯吡格雷和阿司匹林联合使用对GES-1细胞的生长抑制率明显高于单独使用阿司匹林或氯吡格雷(P<0.01)。结论阿司匹林和氯吡格雷均可抑制人胃黏膜上皮细胞的增殖,二者联合使用对细胞的损害具有协同作用。

肺癌组织p53V、p16基因表达与DNA倍体的相关性及其临床意义

目的:探讨肺癌组织细胞肿瘤相关基因p53V、p16基因的表达与DNA倍体类型的相关性及其临床意义。方法:采用流式细胞术对63例非小细胞肺癌患者瘤组织p53V+、p16+细胞表达率和DNA含量进行了检测,并分析了p53V、p16基因表达与肿瘤细胞DNA倍体类型、S期细胞比例(SPF)、凋亡指数(AI)及肿瘤是否转移的关系。结果:肺癌组织细胞的p53V+细胞检出率、DNA指数(DI)及SPF均显著高于正常对照组(P<0.01),肿瘤转移者也显著高于未转移者(P<0.01),而AI分别显著低于正常对照组及未转移者(P<0.01);随着DNA倍体从D→ND→T→AN→M,p53V+细胞检出率逐渐增高。肺癌患者瘤组织p16+细胞检出率的变化规律与p53V的变化恰好相反。二者相关性分析显示,p53V+细胞与p16+细胞表达率呈显著负相关(r=-0.712,P<0.05)。结论:肺癌患者瘤组织细胞p53V和p16基因编码蛋白的表达水平与肿瘤细胞生物学特性关系密切,不仅可用于肺癌发生的分子机制研究,而且还可以为肺癌恶性度、转移、预后判断提供可靠的客观依据。

男性不育病人精液中磷脂酶A2的测定及其临床意义

目的 :探讨人精液中磷脂酶A2 (PLA2 )含量测定在男性不育症中的临床意义。 方法 :以自制的 2株PLA2单克隆抗体建立酶联免疫吸附试验 (ELISA)、免疫细胞化学法 (ICC)和流式细胞术 (FCM)等 3种方法 ,分别检测男性不育病人精浆及精子头部PLA2的含量 ,并与生育组进行比较。精液常规分析采用计算机辅助精液分析系统 (CASA)进行。 结果 :男性不育病人精浆中PLA2含量分别为 :无精子症组 (31.13± 14 .4 9)ng ml,少精子症组 (17.71±12 .4 5 )ng ml,精子数目正常组 (16 .4 6± 11.31)ng ml;与生育组 [(8.0 9± 3.15 )ng ml]相比差异均有极显著性 (P <0 .0 1) ;精浆中PLA2含量与精子密度呈显著负相关 (r=- 0 .6 0 2 ,P <0 .0 5 ) ,而与精子活动力及活率无显著相关性 (r=0 .2 6 6和r=- 0 .2 0 0 ,P均 >0 .0 5 ) ;ICC和FCM试验均提示 ,生育组精子头部PLA2含量显著高于各不育组病人 ,且FCM试验显示差异有极显著性 (P <0 .0 1)。 结论 :精浆中PLA2与男性生育密切相关 ,精子头部PLA2含量缺乏可能是引起男性不育的病因之一。精液中PLA2含量测定方法的建立可为探讨男性不育的发病机制提供有力的依据。

HBV感染肝病的细胞免疫功能观察

为探讨ＨＢＶ感染所致的急性肝炎（ＡＨ）、慢性肝炎［慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）和慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）］、肝硬化和肝癌中机体免疫能力的改变，以期从调理免疫角度防止该病的进一步恶化。测定了经临床确诊的无症状的ＨＢｓＡｇ携带者２５例，急性病毒性肝炎２０例，慢性活动性肝炎１８例，慢性迁延性肝炎１６例，肝硬化５２例（代偿期２２例，失代偿期３０例），原发性肝癌晚期３２例和正常对照２０例的白细胞介素－２（ＩＬ－２），Ｔ淋巴细胞亚群，可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）和自然杀伤（ＮＫ）细胞活性。结果：无症状ＨＢｓＡｇ患者以上指标与正常对照相比无统计学差异，急性肝炎患者ＣＤ４／ＣＤ８、ＩＬ－２、ＮＫ细胞活性、ｓＩＬ－２Ｒ均明显增高，ＣＡＨ、ＣＰＨ、肝硬化和肝癌患者ｓＩＬ－２Ｒ明显增高，增高趋势为ＣＡＨ＞ＣＰＨ＞肝硬化＞肝癌；ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８、ＩＬ－２及ＮＫ细胞活性明显降低。在所有患者中，ＩＬ－２与ＣＤ４／ＣＤ８、ＮＫ细胞活性呈正相关，而与ｓＩＬ－２Ｒ除肝硬化和肝癌患者外均呈负相关。认为感染所致的免疫功能破坏，特别是ＩＬ－２产生的降低可能与ＨＢＶ所致的慢性化及肝癌有一定联系。

急性心肌梗死患者早期组织纤维化指标的变化与心室重构的关系

目的 :通过观察急性心肌梗死 (AMI)患者组织纤维化血清学指标的变化 ,探讨其反映心梗早期心室重构和心肌纤维化的临床价值。方法 :测定AMI患者再通组 42例 ,未通组 2 2例及正常对照组 37例血清中Ⅲ型前胶原 (PCⅢ )、透明质酸 (HA)和层粘连蛋白 (LN )的含量 ;并将左室舒张末期内径 (LVDd)和射血分数 (EF)与上述各参数作相关分析。结果 :AMI患者未通组血清PCⅢ、HA、LN的含量较其他两组水平增高显著 ,并且与LVDd呈正相关 ;其他两组的参数及其与EF的关系无统计学意义。结论 :血清PCⅢ、HA、LN值可作为AMI患者心肌组织纤维化的血清学指标 ,为临床上判断AMI早期心室重构和心肌纤维化提供了间接依据。

胃癌中Autotaxin基因、CD44v6分子、DNA含量的相关性研究

Autotaxin (ATX)是一种肿瘤细胞自分泌运动因子,与肿瘤浸润转移关系密切[1].CD44v6是粘附分子家族成员之一,也与肿瘤浸润转移复发有关[2-7].细胞核DNA含量是反映细胞增殖状态的一个良好指标,而细胞无限增殖与肿瘤的发生、发展及预后密切相关[8-10].胃癌在我国常见[11-19],我们拟检测胃癌组织中ATX,CD44v6的表达特征及细胞核DNA含量分析,对三者之间进行相关性分析,探讨以ATX,CD44v6,DNA含量分析联合来判断胃癌浸润、转移能力的可能性和方法.

单核苷酸多态性与前列腺癌关系的研究进展

单核苷酸多态性(SNP)是第3代遗传标记,有许多显著的特性。近年来出现了许多新的检测SNP的研究方法,如TaqM an探针技术、基因芯片技术、变性高效液相色谱、基质辅助激光解吸附-电离飞行时间质谱和微测序技术等。SNP作为遗传标记在人类多种肿瘤的研究中取得了一定的进展,本文综述了与前列腺癌(PCa)相关的前列腺特异性抗原的应答元件、酶类、激素及其受体、细胞周期调节蛋白、细胞因子、粘附分子及维生素等基因的SNP与前列腺癌发生发展的关系,以探讨前列腺癌的发病机制。

胃癌组织细胞核DNA含量分析及其临床意义

目的 :分别检测胃癌、癌旁、正常胃组织中DNA含量并分析DNA含量与胃癌临床病理特征的关系。方法 :采用流式细胞术检测 36例胃癌组织、30例相应癌旁组织、2 5例正常胃组织细胞核DNA含量。结果 :在胃癌、癌旁、正常胃组织中 ,细胞核DNA含量分别为 ( 1.39± 0 .2 3)、( 1.0 0± 0 .0 5 )、( 0 .99± 0 .0 5 ) ,胃癌组织的DNA含量明显高于癌旁及正常胃组织 (P <0 .0 1) ,而癌旁组织与正常胃组织的DNA含量相似 (P >0 .0 5 )。分化程度差 ,深度浸润 ,伴淋巴结转移及Ⅲ、Ⅳ期的胃癌组织 ,其DNA含量明显高于分化程度较好 ,浸润较浅 ,不伴淋巴结转移及Ⅰ、Ⅱ期的胃癌组织。结论 :DNA含量可作为判断胃癌浸润、转移及预后的一个理想指标。

子宫内膜癌患者瘤组织某些肿瘤相关基因的表达及其临床意义

目的:探讨子宫内膜癌患者肿瘤组织相关基因编码蛋白表达与肿瘤转移的关系。方法:采用流式细胞术对32例子宫内膜癌患者肿瘤组织的p53V+、CD44v5+、CD44v6+、cerbB-2+、nm23+表达百分率和DNA含量进行了检测和分析。结果:子宫内膜癌患者p53V+、CD44v5+、CD44v6+、cerbB-2+的百分率较正常对照组显著升高(P<0.01或P<0.05),肿瘤转移时升高更加明显;nm23+细胞表达率却显著降低(P<0.05),肿瘤转移时进一步降低(P<0.05)。随着临床分期的增加,患者p53V+、CD44v5+、CD44v6+、cerbB-2+细胞表达水平均逐渐增高,而nm23+细胞却逐渐降低。肿瘤组织DNA倍体类型不同,p53V+、CD44v5+、CD44v6+、cerbB-2+、nm23+细胞表达率明显不同。结论:这些结果提示,肿瘤组织DNA倍性和肿瘤相关基因表达水平与子宫内膜癌患者病情发展和肿瘤恶性度有关,可用于患者预后判断。