口腔扁平苔藓组织中CD3^+、CD8^+T细胞浸润与不典型增生的关系

目的 :探讨口腔扁平苔藓(OLP)中CD3^+T细胞和CD8^+T细胞浸润与OLP伴上皮不典型增生的相关性,为OLP的临床诊断和免疫治疗提供新的方向。方法:采用免疫组化半定量法检测CD3^+、CD8^+T细胞在79例OLP患者组织中的表达,取10例口腔正常黏膜组织作为对照,分析口腔扁平苔藓组织中CD3^+、CD8^+T细胞浸润与不典型增生的关系。结果 :CD3^+、CD8^+T细胞在正常口腔黏膜组织中呈阴性表达,在79例OLP中均呈阳性表达。CD3^+、CD8^+T细胞浸润与患者性别、年龄、发生部位无明显统计学意义,但是与OLP伴上皮不典型增生密切相关,具有统计学意义(P<0.001,P=0.002),CD3^+T细胞浸润和CD8^+T细胞浸润之间具有显著相关性(r=0.498,P<0.001)。结论:口腔扁平苔藓患者组织中CD3^+、CD8^+T细胞浸润与上皮不典型增生密切相关,影响OLP的发生发展。

肿瘤相关巨噬细胞在口腔癌中作用的研究进展

肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)是肿瘤微环境中重要的免疫细胞和炎症细胞,在肿瘤的发生、增殖、侵袭和转移中发挥重要作用.该文从口腔癌中TAMs的来源及分化、促口腔癌前病损进展、致口腔癌侵袭转移等方面对TAMs在口腔癌发生发展中的作用进行综述,以期为针对TAMs的口腔癌研究及靶向治疗提供新思路.

CD3^+、CD8^+ T细胞与口腔扁平苔藓糜烂的关系

目的:探讨CD3^+、CD8^+ T细胞与口腔扁平苔藓(OLP)临床病理特征的相关性。方法:选取79例OLP患者作为研究对象,10例正常口腔黏膜组织作为对照,采用免疫组化半定量法检测CD3^+、CD8^+ T细胞在组织中的表达,统计分析CD3^+、CD8^+ T细胞浸润与OLP临床病理特征的关系。结果:CD3^+、CD8^+ T细胞在OLP中阳性表达,在正常口腔黏膜组织中呈阴性表达。CD3^+ T细胞浸润与患者性别、年龄、部位无明显相关性,但是与OLP发生糜烂密切相关(P<0.05);CD8^+ T细胞浸润与OLP患者性别、年龄、部位及有无糜烂均无明显相关性。结论:CD3^+ T细胞浸润对OLP发生糜烂有影响。

人口腔癌相关成纤维细胞的分离培养及鉴定

目的:分离培养及鉴定口腔癌相关成纤维细胞(CAFs),为探究CAFs可能在肿瘤微环境促进口腔癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用奠定基础。方法:用组织块培养法和酶消化法分离培养、纯化原代口腔癌相关成纤维细胞CAFs和口腔黏膜正常成纤维细胞(NFs);细胞免疫荧光技术及免疫蛋白印迹法对口腔CAFs和NFs进行鉴定。结果:口腔CAFs和NFs分离培养成功,口腔CAFs呈长梭形,达到一定密度时呈多层生长,排列紊乱;NFs呈多胞质突的扁平星状,无重叠生长现象,排列有一定方向性。上皮标志物细胞角蛋白18(CK18)免疫荧光染色在口腔CAFs和NFs均呈阴性,间质标志物波形蛋白(Vimentin)染色均呈阳性。α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1),成纤维细胞激活蛋白(FAP)、血小板衍生生长因子受体α(PDGFR-α)在CAFs染色呈阳性,而在NFs中染色呈阴性。结蛋白(Desmin)在CAFs和NFs中染色均呈阳性。蛋白表达水平上,相对于NFs,CAFs中α-SMA、PDGFR-α蛋白表达呈升高趋势,FSP-1呈下降趋势,而FAP、Desmin在NFs和CAFs中表达无明显差异。结论:CAFs与NFs相比,在形态结构、生长方式、蛋白表达等方面均有明显差异。

肿瘤相关巨噬细胞调控基质金属蛋白酶促口腔鳞癌细胞侵袭转移的实验研究

目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)对口腔鳞癌细胞基质金属蛋白酶(matrix metallproteinases,MMPs)表达以及其对口腔鳞癌细胞侵袭转移的影响。方法:用佛波脂(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)刺激人单核/巨噬细胞株THP-1促其形成TAMs,收集其上清液作为TAMs条件培养基培养口腔鳞癌细胞,应用实时定量RT-PCR、Western blot方法检测TAMs条件培养基作用前后口腔鳞癌细胞MMPs表达的差异,应用Transwell侵袭实验检测口腔鳞癌细胞侵袭转移能力的差异。结果:THP-1细胞在PMA和MCSF作用后贴壁生长,分化成TAMs。口腔癌细胞在TAMs条件培养基作用48 h后,MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA的表达水平显著增高,相同条件下蛋白质的表达水平也明显增高。TAMs条件培养基作用24 h后的口腔鳞癌细胞侵袭转移能力显著增强。结论:TAMs可以上调口腔鳞癌中MMPs的表达并促进其侵袭转移。

一种釉质特异性生物矿化模板的构建

目的构建一种自组装类釉原蛋白两亲性寡肽,作为釉质仿生矿化的有机模板。方法依据釉原蛋白分子在釉质形成中自组装成"纳米球"超分子结构的机制,参照目前"自组装多肽类生物材料"的设计特点,通过对釉原蛋白分子功能性残基进行改性,构建"类釉原蛋白两亲性寡肽"生物矿化模板,采用固相合成法合成并纯化,经质谱仪、高效液相色谱仪等鉴定。在寡肽溶液中加入1 mol/L的CaCl2溶液观察其能否自组装;将组装后的寡肽涂于透射电镜的铜网上,用2.5%的戊二醛固定1 h后先置于常温或40℃下10 mmol/L的CaCl2溶液中1 h,去离子水漂洗后再置于5 mmol/L的Na2HPO4溶液中1 h,5个循环后取出自然干燥,通过扫描电镜(SEM),透射电镜(TEM)及选区电子衍射(SAEDS)观察表征。结果类釉原蛋白两亲性寡肽序列为C18H35O-Thr-Lys-Arg-Glu-Glu-Val-Asp,高效液相色谱仪(HPLC)示多肽纯度为98.29%,质谱仪(MS)示肽的分子质量为1 142.41 u。通过Ca2+可使其自组装为纳米纤维超微结构的凝胶态。通过交替矿化发现组装后的类釉原蛋白两亲性寡肽能摄取溶液中的钙磷离子,在寡肽纳米纤维表面成核矿化,形成磷灰石晶体。结论成功构建了一种类釉原蛋白两亲性寡肽,可以作为釉质仿生的特异性生物矿化模板,用于诱导釉质再矿化研究。

低浓度尼古丁胶原膜缓释微粒系统促进大鼠硬腭黏膜创伤愈合的研究

目的低浓度尼古丁可促进新生血管的形成,进而促进创伤愈合,文中旨在观察低浓度尼古丁胶原膜缓释微粒系统对大鼠硬腭黏膜创伤愈合的影响。方法以聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)共聚物为载体材料,用复乳挥发法(w/o/w)制备低浓度尼古丁缓释微粒,以胶原膜为支架,制备低浓度尼古丁胶原膜缓释微粒系统。将Wistar大鼠48只分为实验组和空白组,每组24只,在硬腭前部造直径3 mm的圆形创口,用6-0可吸收线分别将低浓度尼古丁胶原膜缓释微粒系统和空白胶原膜缝合于创口上,观察1、3、7、10 d大鼠上腭组织创口愈合变化情况,并比较不同时间点愈合差异。结果电镜下尼古丁缓释微粒大体观呈现球形,大小均匀,球体表面粗糙,平均粒径(3.0±0.2)μm,其包封率和载药率分别为50.2%和4.12%。尼古丁缓释微粒第1天体外释放量较大,第2天释放量较小,从第3天尼古丁的释放量趋于稳定,且在一定的范围内波动,约在10 d后急剧下降,在第3-10天尼古丁浓度为10-5-10-4mol/L波动。大体观术后3 d时,2组创面愈合差异无统计学意义(P>0.05);术后7 d时实验组的创口愈合面积大于空白组(P=0.015,);术后10 d时,2组创面已基本愈合,差异无统计学意义(P>0.05)。术后7 d时,实验组上皮增生较空白组明显,且可见较多的成纤维细胞、炎症细胞及新生的毛细血管,上皮钉突较短,黏膜下层较疏松且新生大量的胶原纤维,固有层与骨膜紧密连接,创口基本愈合。空白组可见大量的炎性细胞,创口未完全愈合;术后10 d时,2组创口上皮细胞增殖基本已完全完成,创口愈合。结论低浓度尼古丁胶原膜缓释微粒系统可能具有促进大鼠硬腭黏膜创伤愈合的作用。

pEGFP-N1-Snail真核表达质粒的构建与表达

目的:构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,并进行鉴定,转染SCC25肿瘤上皮细胞,检测其表达。方法:利用RT-PCR方法从SCC9肿瘤上皮细胞中提取Snail基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-Snail重组质粒,挑选阳性克隆,PCR鉴定后送测序。重组质粒双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。分别抽提pEGFP-N1及pEGFP-N1-Snail质粒,用脂质体2000转染SCC25肿瘤上皮细胞,RT-PCR检测Snail在该细胞中表达。结果:本实验成功构建了pEGFP-N1-Snail真核表达质粒,并在SCC25肿瘤上皮细胞中表达。结论:本实验结果为进一步研究Snail作为转录抑制因子诱导上皮间质转化提供实验基础。

牙源性角化囊肿中Survivin的表达及其与Caspase-3和p53的关系

目的:初步探讨凋亡相关蛋白Survivin、Caspase-3和p53在牙源性角化囊肿(odontogenic keratocyst,OKC)中的表达及关系。方法:TUNEL法检测40例OKC(原发20例,复发20例)中凋亡细胞的分布;免疫组织化学方法检测OKC中Survivin、Caspase-3和p53蛋白的表达。结果:OKC中凋亡细胞见于衬里上皮表层细胞;Survivin蛋白阳性染色见于26例(65%)OKC上皮基底层及基底上层细胞中,Caspase-3蛋白阳性染色见于18例(45%)OKC上皮表层细胞中,p53蛋白在OKC中不表达。结论:凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3在OKC形成和发展中发挥一定作用。

低浓度尼古丁对大鼠硬腭软组织缺损愈合的影响

背景:最新系列研究发现低浓度尼古丁具有促进血管生成,加速皮肤伤口愈合的作用,但低浓度尼古丁能否在颌面部软组织创伤修复中尤其是口腔黏膜创伤修复中发挥作用目前还不清楚。目的:观察低浓度尼古丁对大鼠硬腭黏膜缺损修复的影响。方法:Wistar大鼠65只,于硬腭第一磨牙近中至第三磨牙远中的黏膜作一直径为3 mm的圆形切创缺损。造模后局部给药,大鼠随机分成低浓度尼古丁+凝胶组、凝胶组、空白对照组,每组动物分别在3,7,10,14 d处死,苏木精-伊红染色观察组织愈合过程,并通过大体标本结合图像测量分析比较各组间伤口愈合差异。结果与结论:修复后3 d各组间愈合情况差异无显著性意义;修复后7,10 d组低浓度尼古丁+凝胶组愈合快于凝胶组和空白对照组(P<0.05);修复后14 d各组创面已基本愈合,各组间差异无显著性意义。提示低浓度尼古丁可能具有促进大鼠硬腭膜缺损修复的作用。

上皮间质转化在大鼠舌黏膜创口愈合中的作用

目的：越来越多的研究阐明EMT与癌症转移，组织器官纤维化及皮肤创伤愈合的情况关系密切，但在口腔黏膜创伤愈合方面的作用却依然需要进一步探索。文中通过对大鼠舌背部黏膜创口愈合过程的观察探讨上皮间质转化（ epithe-lial-to-mesenchymal transition ， EMT）在大鼠舌黏膜创口愈合过程中的作用及其意义。方法取8周龄Wistar 大鼠，于舌背部黏膜处作一直径为3 mm的圆形缺损模型，分别于术后0、1、2、3、4、8 d处死，HE染色观察组织愈合过程，同时采用免疫组织荧光法检测 EMT相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin， E-cad），波形蛋白（Vimentin）和成纤维细胞特异性蛋白-1（fibroblast specif-ic proteins， FSP1）在舌黏膜创口愈合过程中的表达。结果大鼠舌黏膜创口边缘E-cad表达术后2～4 d较0、1d减少，间质细胞特异蛋白Vimentin、FSP1在上皮基底层表达。术后8 d舌黏膜创口完全愈合，E-cad表达量与0 d相近，上皮基地层仍可见少量Vimentin、FSP1表达。结论 E-cad、Vimentin、FSP1参与舌黏膜创口愈合过程，部分上皮细胞向创口中心迁徙过程中具备了间质细胞特性。

4-NQQ诱导小鼠舌癌形成过程中的血清差异蛋白筛选

目的通过蛋白组学i BT技术,筛选舌癌形成过程中血清的差异表达蛋白,以期筛选出舌癌早期诊断的肿瘤标志物。方法使用4-硝基喹啉-1-氧化物(4-NQQ)诱导小鼠舌黏膜癌变,收取小鼠舌癌形成过程中特定时间点血清行蛋白组学分析。结果在24周时成功诱导小鼠舌黏膜癌变并有部分小鼠出现了浸润癌,血清蛋白组学分析结果显示,在8周和16周对比组中显示癌相关蛋白胶原蛋白α-1高表达,纤连蛋白(FN)低表达;在16周和24周的对比组中显示癌相关蛋白FHL1、FN、热休克蛋白84b(HSP 84b)、Serine/threonine-protein(PP2A)、(14-3-3)低表达。通路分析结果显示在舌癌形成过程中,RAS通路(RAS)、NF-κB通路(NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、JAK-STAT通路(JAKSTAT)癌相关通路异常。结论在蛋白组学的结果中发现的差异蛋白FHL1、FN、HSP、PP2A、14-3-3等在舌癌形成的过程中异常表达,有可能成为舌癌诊断的标志物,异常表达的通路如:NF-κB、PI3K、JAK-STAT等则有可能成为舌癌免疫治疗重要的靶点。

TNF-α对大鼠舌黏膜创伤愈合过程中上皮间质转化的影响

取60只8周龄Wistar大鼠,随机分为TNF-α+凝胶实验组和空白凝胶对照组,于其舌背部黏膜处作一圆形缺损模型;每组大鼠分别于0、24、48、72、96 h处死,取标本冰冻切片。通过免疫组织荧光法检测与上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP1)和波形蛋白(Vimentin)在大鼠舌黏膜创伤愈合过程中的表达。结果显示两组大鼠创伤部位上皮细胞均有表达FSP1和Vimentin,实验组发生改变的细胞数目明显较对照组多,差异有统计学意义(P<0.05)。

基于翻转课堂的CPC教学模式在口腔病理学实验教学中的应用研究

目的:探讨基于翻转课堂的CPC教学模式在口腔病理学实验教学中的可行性并探索具体的实践方法。方法:选取南京医科大学口腔医学院2019级学生为实验组,2018级学生为对照组,采用不同教学模式及评价指标,总结分析基于“翻转课堂的CPC教学模式”的应用效果。结果:期末考试部分及实验读片考试中实验组的成绩均高于对照组的成绩,且差异有统计学意义(P<0.05)。问卷调查中,60%以上的学生认为CPC可以激发学习兴趣、提高自主学习能力和逻辑思维能力,更可以加强团队协作、培养临床诊疗思维。但也有近40%的学生认为这样的授课模式占用了大量的课余时间,增加了学习负担。结论:基于翻转课堂的CPC教学模式在增加学生学习兴趣的同时,可以促进教师专业素养及教学质量的提高,教学相长。

上皮钙黏蛋白与β-连环素在舌鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系

目的 研究舌鳞状细胞癌（舌癌）中上皮钙黏蛋白（E—cadherin，E—cad）、β-连环素（β-catenin）的表达，探讨其在舌癌复发及预后中的意义。方法采用免疫组化半定量方法检测30例舌癌患者肿瘤组织中E-cad与β-连环素的表达，同时通过随访资料分析其表达水平与临床病理及预后之间的关系。结果63％（19／30）的癌组织中E—cad呈低表达；60％（18／30）癌组织中β-连环素高表达。E—cad、β-连环素表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、大小、临床分期、淋巴结转移比较，差异无统计学意义；E—cad表达与肿瘤复发比较，差异有统计学意义（P=0．007），而β-连环素表达与肿瘤复发比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。单因素Cox回归预后分析显示E—cad的表达与生存率比较，差异有统计学意义（P=0．018）。结论E—cad表达降低与肿瘤复发及术后生存率之间密切相关，可作为舌癌患者预后的预测指标。