细菌外囊泡在疾病发生发展中的作用机制及应用前景

细菌外囊泡(bacterial extracellular vesicles, BEVs)是细菌衍生的细胞外囊泡。作为细菌间或细菌-宿主间相互作用的关键新媒介,BEVs是一把“双刃剑”:一方面在宿主多种病理过程,包括肠道炎性疾病、中枢神经系统相关疾病、肝脏疾病、代谢性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤中发挥“致病”作用;另一方面作为潜在生物标志物、疫苗、抗肿瘤制剂等发挥“治病”作用,为疾病的诊治打开了新思路。但关于BEVs的研究目前尚处于起步阶段,在囊泡分离技术、疾病诊断特异性、囊泡储运优化等方面仍面临挑战,未来需设计严谨的临床研究以证实其诊断和治疗价值。

临床公共实验室平台信息化管理建设探索

结合南方医科大学珠江医院检验医学部医学实验中心的实际情况,总结了临床公共实验室信息化管理中安防管理系统、仪器预约管理系统以及临床样本库管理系统的设计理念和建设情况,强调了信息化管理对临床公共实验室平台发展的重要意义和作用。

登革病毒重组包膜蛋白表达及其应用的研究进展

登革病毒（dengue virus,DV）是当前严重影响人类健康的虫媒传播病毒,无特效的疫苗和药物。目前在DV的诊断、疫苗的研发以及对抗体依赖性增强效应（ADE效应）机制的研究上,DV包膜蛋白越来越受到人们的关注。研究人员通过不同的载体表达不同形式的DV包膜蛋白,对研究目的以及研究结果的应用有着巨大的影响。本文主要就DV包膜蛋白在不同表达系统中的表达方式进行综述,

轻度认知功能障碍患者的肠道菌群特征

目的探究轻度认知功能障碍患者的肠道菌群特征和危险因素。方法纳入28例轻度认知功能障碍患者,年龄、性别和教育水平相当的65例认知功能正常者作为对照组。对所有受试者进行颈动脉彩超检查,采集空腹抗凝血和新鲜粪样,提取受试者粪便样本中的细菌DNA并进行16S rRNA测序,分析轻度认知功能障碍的危险因素。结果和对照组相比,轻度认知功能障碍组肠道菌群显著改变(P<0.05),主要表现为肠道内变形菌门、互养菌门、乳酸杆菌等细菌富集和费氏刺骨鱼菌的减少。多元逻辑回归分析提示,高回声斑块数量(OR=11.511, 95%CI:1.406～94.226, P=0.023)和乳酸杆菌高丰度(OR=4.894, 95%CI:1.090～21.966, P=0.038)与轻度认知功能障碍显著相关。结论肠道内乳酸杆菌高丰度可能是轻度认知功能障碍潜在的危险因素。

脑梗死患者肠道菌群紊乱与恢复研究

目的探索脑梗死患者肠道菌群的紊乱特征和恢复情况。方法收集28例脑梗死患者和28例健康对照人群的粪便样本,提取粪便中细菌DNA并进行16S rRNA测序分析。结果和对照组相比,脑梗死患者肠道菌群显著改变(P<0.001),肠道中机会致病菌肠杆菌科、韦荣球菌科和链球菌科等显著增加而常驻菌如普氏菌属和拟杆菌属等显著减少。4周后其肠道菌群结构开始趋向于对照组但伴随菌群多样性的显著下降(P<0.05)。结论本研究发现了脑梗死患者肠道菌群紊乱与恢复的特征,但其菌群变迁的意义需要进一步研究。

基于肠道菌群结构预测摄入益生元后双歧杆菌的变化趋势

目的研究益生元干预对肠道菌群的影响,基于肠道菌群数据建立模型预测摄入益生元后双歧杆菌的变化。方法将35名健康志愿者随机分为2组,分别接受16 g/d低聚果糖(FOS)或低聚半乳糖(GOS)干预,干预时间9 d,采集第0、5、9天粪便标本进行16s r RNA基因高通量测序分析,分析两种益生元干预对肠道菌群结构、多样性与功能的影响。用随机森林方法区分益生元干预5 d后双歧杆菌变化,并用初始的菌群构建一个连续型指数(index),实现指数与双歧杆菌实际变化量相关联,而后,对模型进行验证。结果 FOS干预5 d后降低肠道菌群α多样性,9 d时回升,GOS在干预5、9 d时α多样性均下降。两种益生元对β多样性影响均无统计学意义(P>0.05)。通过随机森林方法建立的预测模型,ROC曲线下面积为89.6%;建立的指数与双歧杆菌变化量关联r值为0.45(P<0.01),验证模型r值为0.62(P<0.01)。结论益生元干预可迅速降低肠道菌群α多样性。根据干预前的肠道菌群预测服用益生元后双歧杆菌的变化,预测效果良好,此方法为精准膳食的实现奠定基础。

基孔肯雅病毒实验诊断进展

基孔肯雅病毒属于披膜病毒科甲病毒属,主要通过携带病毒的蚊媒叮咬感染人类引起基孔肯雅热,表现为自限性发热、皮疹、肌痛、关节痛,其中关节疼痛可延续数月至数年,甚至导致关节畸形。由于基孔肯雅病毒与登革病毒、寨卡病毒等虫媒病毒具有相同的传播媒介,且急性期临床症状相似,但治疗原则与疾病结局完全不同,因此,实验室的确切诊断是基孔肯雅热防治的关键。本文就近几年基孔肯雅病毒在实验室诊断方面的进展作一综述。

MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的实验条件优化

目的构建用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定马尔尼菲篮状菌的数据库,并探索用于MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的最佳培养条件和前处理方法。方法利用8株马尔尼菲篮状菌构建自建数据库,比较不同培养基[沙保弱葡萄糖琼脂培养基(SDA)、沙氏葡萄糖肉汤培养基(SDB)]、培养温度(28、35℃)、培养天数、前处理方法(甲酸乙腈法、直涂法)对质谱谱图质量及鉴定正确率的影响。结果在VITEK MS科研模式(RUO模式)中成功构建马尔尼菲篮状菌质谱自建数据库。SDA较SDB更适合MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌,后者采集的质谱谱图中干扰峰较多。两种温度培养采集的质谱谱图的特征峰相似,但35℃菌落的鉴定正确率略高。培养3~5 d时的菌落鉴定正确率均高于71.4%,其中培养5 d时鉴定正确率最高,可达100.0%。甲酸乙腈法的提取效果优于直涂法。结论马尔尼菲篮状菌在SDA上35℃培养3~5 d,并使用甲酸乙腈法进行前处理可得到最佳的鉴定正确率。这对于形态不典型的马尔尼菲篮状菌同样适用。

以产品注册为目标的实验室自建检测管理模式探讨与分析

目前,国内实验室自建检测(LDT)管理正处于探索阶段,亟需探讨适应国情发展的新方案和新思路。该文通过剖析遇到的问题,结合政府、医改和患者三方的实际需要,提出"促进LDT项目的良性发展,关注患者利益保护与创新支持的有机结合"是LDT管理的重要方向,并围绕这一方向提出了LDT项目管理的新思路,即以产品注册为目标的LDT管理模式。该管理模式的核心是以产品注册为目标,以低廉的患者服务费用和持续实时的数据监控为保障。利益和风险分析表明,该管理模式可较大程度兼顾患者、医疗机构、体外诊断企业和政府管理部门的现实诉求,有利于促进我国LDT项目的完善与发展。

细胞外囊泡分离与检测技术专家共识

细胞外囊泡是细胞间传递信息的重要载体,在人体病理生理过程中发挥着重要作用,在液体活检领域也有巨大潜力。然而,目前细胞外囊泡分离与检测技术多样,各有优缺点。因此,建立细胞外囊泡分离与检测技术专家共识,对于推动EV的研究转化与临床应用具有重要价值。本共识由中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会和中华医学会检验医学分会分子诊断学组共同编写,汇聚了来自检验医学、基础医学、临床医学、分析化学、生物学和材料科学等多个相关领域专家的观点和经验,详细阐述了常用细胞外囊泡分离与检测技术及其不同应用场景,并进一步指明了细胞外囊泡临床应用转化的关键技术要点。

登革病毒包膜蛋白Ⅲ区IgG抗体捕获酶联免疫吸附试验的建立及应用

【摘要】目的建立一种高度敏感和特异的登革病毒（denguevirus，DENV）包膜蛋白Ⅲ区（envelopeproteindomain1]I，EDm）IgG抗体的检测方法，并探索这种方法在登革热诊断和血清流行病学调查中的应用价值。方法以毕赤酵母表达系统制备的重组全长DENVEDm作为抗原，建立DENVEDmIgG抗体捕获ELISA。用这种方法检测来自同一组35例DENV一1初次感染患者在2006年发病期和2010年随访期的血清标本，并将其检测的敏感性与商品化的PanbioDENVIgG抗体捕获ELISA试剂盒进行对比。结果DENVEDHIIgGELISA试剂盒对发病期和随访期血清标本检测的灵敏度分别是87％（20／23）和94％（33／35），而Panbio DENV IgGELISA试剂盒对这两个时期血清标本检测的灵敏度分别是71％（25／35）和0。DENV EDⅢ IgG ELISA试剂盒对两个时期血清检测灵敏度差异无统计学意义（X^2=0．946，P=0．331）。对于发病期血清标本，DENVEDⅢIgG ELISA试剂盒与Panbio DENV IgG ELISA试剂盒检测的灵敏度比较，差异无统计学意义（X^2=1．924，P=0．165）；而对随访期血清标本，DENV EDⅢ IgG ELISA试剂盒检测灵敏度高于Panbio DENV IgG ELISA试剂盒，差异有统计学意义（X^2=62．432，P=0．000）。结论DENVEDⅢIgG抗体捕获ELISA试剂盒对登革热患者发病期血清及随访期血清中IgG抗体的检测均具有高度的敏感性，有可能成为DF诊断和血清流行病学调查的有效工具。

探究黄热病毒NS1蛋白在感染早期的诊断价值

为了探讨黄热病毒（Yellow fever virus,YFV）非结构蛋白1（Nonstructural protein 1,NS1）在感染早期的诊断价值。颅内注射YFV-17D感染乳鼠,每日处死1窝,收集抗凝血。Vero细胞和C6/36细胞感染YFV-17D病毒后,每隔12h收集培养上清。分别采用荧光定量PCR和基于YFV NS1多克隆抗体的双抗体夹心酶联免疫（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测感染后乳鼠血液、C6/36和Vero细胞上清中YFV的扩增情况和NS1蛋白的分泌规律。乳鼠感染YFV-17D后第2d在血清中即可检测到YFV NS1,第3d血液中检测到YFV核酸。敏感细胞株在感染YFV-17D后第36h培养上清中可检测到YFV NS1,而48h后才能检测到YFV核酸。YFV NS1蛋白具有作为YFV感染早期的诊断靶标的潜在价值。

1型登革病毒包膜蛋白功能区在293T细胞中的表达与鉴定

目的在293T细胞中获得可溶性表达的1型登革病毒（DENV1）包膜（E）蛋白。方法PCR扩增DENV1-E蛋白功能区（1～394aa）基因并克隆到Psectag2B-Fc真核表达载体中构建表达质粒，脂质体法转染293T细胞，经2mg／ml Zeocin筛选，免疫荧光法鉴定所获细胞克隆：Protein-G亲和层析纯化DENV1-E-Fc重组融合蛋白，间接免疫荧光和蛋白免疫印迹法鉴定蛋白的完整性和抗原性。结果获得稳定可溶性表达重组融合蛋白的细胞克隆，蛋白产量约为25μg／1×107个细胞，纯化得到的DENV1-E-Fc蛋白相对分子质量约90×103，该蛋白可与识别天然构象E蛋白的单克隆抗体结合，并与免疫动物血清有良好的反应性。结论在真核细胞中成功获得可溶性表达的DENV1-E-Fc重组融合蛋白，E蛋白功能区保持完整且具备天然的构象表位和良好的抗原性，为包膜蛋白的保护性抗原表位和功能研究奠定了基础。

肠道病毒5’-非翻译区测序分型的应用评估

目的评估5’-非翻译区（5’-untranslated region，5’-UTR）扩增测序法对临床标本直接进行肠道病毒（enterovirus，EV）血清型分型的价值。方法收集实时荧光聚合酶链反应（real-time PCR）检测EV通用型核酸为阳性的肛拭518份、鼻拭148份，采用5’-UTR区逆转录PCR（reverse transcription PCR，RT—PCR）对标本中的EV进行扩增、测序、比对及血清型分型，与VP1（viral protein1）区简并引物巢式PCR测序分型方法比较，两者不一致的标本经EV血清型特异性RT-PCR验证。结果666份EV通用型核酸为阳性的标本，5’-UTR和VP1区各分型成功553例（83．0％）和318例（47．7％），P〈0．001；以VP1法为参考，对肛拭中主要检出的血清型CoxA6（217例）、CoxA16（88例）、EVA71（40例）、CoxA10（28例）和CoxA4（27例），5’-UTR法敏感度（57．1％～100％）、特异度（67．4％～98．1％）以及方法一致性（kappa值0．188～0．847），均因血清型而异；对鼻拭中主要检出的血清型EVD68（15例），5’-UTR法敏感度100％，特异度91．1％，一致性差（kappa值0．217）。分型不一致标本，经CoxA6、CoxA16、EVA71、CoxA10和EVD68型特异性RT—PCR验证，大部分得以确认。以VP1法联合型特异性RT—PCR法为参考，5’-UTR法的敏感度和特异性以及与参考方法的一致性均提高。结论5’-UTR对肠道病毒的分型的敏感度和特异度因血清型而异，应用时应根据研究目的综合考虑。