Sema3A在风湿免疫性疾病中的研究进展

风湿免疫性疾病是机体免疫系统对自身抗原成分发生异常免疫反应,导致自身组织器官损伤或功能异常的一类疾病,其发病机制尚未完全阐明,但发病率和患病率在逐年升高。信号素(Sema)家族蛋白被称为轴突导向分子,在多个生物过程中发挥重要作用,其分泌成员Sema3A作为负向调节因子参与调控风湿免疫性疾病免疫反应。就Sema3A的结构、受体、功能及Sema3A在风湿免疫性疾病中的作用进行综述,为风湿免疫性疾病的新型靶向治疗药物提供依据。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

基于重症支气管哮喘差异表达基因及其治疗中药筛选的生物信息学分析

目的:通过生物信息学方法探讨重症支气管哮喘[简称重症哮喘(SA)]的差异表达基因,分析其作用机制,并筛选潜在具有治疗作用的中药及活性成分。方法:在高通量基因表达(GEO)数据库中选取GSE136587和GSE158752数据集,利用R软件对数据集进行差异分析获得差异表达基因,并进行蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络分析,筛选核心基因,寻找关键通路和枢纽基因。最后将核心基因提交至Coremine数据库筛选具有潜在治疗作用的中药,并通过《中华医典》检索相关中药方剂。结果:共筛选出466个差异表达基因。通过STRING平台构建PPI网络共筛选包括25 kDa突触关联蛋白(SNAP25)、谷氨酸离子型受体2(GRIA2)、轴突蛋白1(NRXN1)、钾电压门控通道亚家族A成员1(KCNA1)、突触囊泡蛋白1(SYT1)和嗜铬蛋白A(CHGA)等核心靶点25个。基因本体(GO)功能富集显示SA的生物学过程与细胞趋化性和白细胞迁移等有重要关系,京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集的通路主要涉及骨髓白细胞迁移、白细胞趋化性、细胞趋化性、白细胞迁移、对外部刺激反应的正向调节和骨髓白细胞活化等信号通路。采用网络药理学方法基于核心靶点筛选得到具有潜在治疗SA作用的中药367种,其中人参、水牛角、全蝎和黄芪等中药涉及多个核心靶点,与SA具有高度相关性,在《中华医典》中检索具有高度相关性的中药,共得到17个潜在具有治疗效果的中药方剂。结论:通过生物信息学筛选SA的潜在标志物和具有治疗作用的中药,为SA早期诊断和发病机制研究提供新的靶点,为其治疗的中药方剂研发提供思路。

基于无机元素指纹分析的桔梗产地溯源

为比较四川梓潼(SCZT)、云南玉龙(YNYL)、安徽太和(AHTH)、湖北英山(HBYS)、河南桐柏(HNTB)无机元素含量差异,结合计量学方法,探讨桔梗产地溯源应用的可行性,为桔梗产地溯源提供新方法。利用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测定四川、云南、安徽、湖北、河南5个主产区共75份桔梗样品中K、P、Fe、Mn、B等37种元素的含量,通过主成分分析对5大产区桔梗进行聚类,运用KNN、Bayes、SVM-ga、BP-NN、LS-SVM、SVM-grid算法,建立桔梗产地溯源模型。结果表明:五大产区桔梗中无机元素含量差异显著(P<0.05),其中Sb、Sn、Ge、Nb、Ag 5种元素,在不同产区间差异最为明显;由主成分分析发现不同产地桔梗样品分布集中且相对独立,SVM-grid桔梗溯源模型能够100%将五大产区桔梗进行区分;Sb、Sn、Ge、Nb、Ag 5种元素含量分布具有明显的地域特征。以无机元素结合计量学方法可以对桔梗进行有效的产区判别,且准确率高,是产地溯源的有效方法。

无机元素与计量学模型结合的半夏产地溯源研究

为建立不同产地半夏无机元素的分析方法和溯源体系,为半夏药材的质量控制和道地性评价提供技术支持。采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)对我国6个主产区72份半夏样品中K、Ca、Na、Mg、Al等37种无机元素的含量进行测定,并采用方差分析、主成分分析、因子分析等计量学方法进行统计与评价。通过对比BP-神经网络算法、K-最近邻算法、最小二乘支持向量机等多种模式识别方法,探索适合半夏产地溯源的最佳模型。结果表明:不同产地半夏中无机元素的构成各具特征,各无机元素含量在产地间差异显著(P<0.05),其中La、Pb、As、Na、Bi、Hg、Sn、Cd、Ag 9种元素在不同产区间的差异最为明显;3D-plots图显示不同产地半夏样品分布相对集中,具备产地分类的可行性;KNN分类模型(曼哈顿距离)是半夏产地溯源的最佳方法,测试集的正确率达到100%。无机元素分析技术结合适当的计量学模型可以实现半夏的产地溯源。

海拔对大别山区野生宽叶山蒿叶片性状和品质的影响

目的:探究海拔对大别山区野生宽叶山蒿叶片性状和品质的影响。方法:对宽叶山蒿的叶片性状、出绒率、叶绒燃烧热解质量和叶片成分含量进行测定,利用相关性分析筛选与海拔有关联的指标,并通过主成分分析对不同海拔叶片成分进行综合评价。结果:随着海拔升高,宽叶山蒿叶长和叶宽呈先减小后增加的趋势,出绒率呈逐渐升高的趋势;除海拔1720 m宽叶山蒿叶绒的综合燃烧特性较差、燃烧放热量较少外,各海拔叶绒的点燃性能、燃烧后的速度和稳定性、燃烧持久性、燃尽性能和燃烧过程的放热量均相似。叶片成分比较发现,海拔≤1084 m,桉油精、α-古巴烯、石竹烯和氧化石竹烯相对含量较高;海拔≥1550 m,乙酸龙脑酯、大根香叶烯D相对含量较高;海拔≥1084 m,绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C质量分数较高。相关性分析发现,宽叶山蒿叶片性状与海拔不相关,出绒率、大根香叶烯D相对含量、绿原酸质量分数、隐绿原酸质量分数与海拔呈正相关(P<0.01),异绿原酸C质量分数与海拔呈正相关(P<0.05),氧化石竹烯相对含量与海拔呈负相关(P<0.01)。主成分分析显示,高海拔宽叶山蒿叶片成分综合得分较高。结论:不同海拔造成的环境差异可能是导致野生宽叶山蒿叶片性状、出绒率、叶绒燃烧热解质量和叶片成分差异的重要因素,高海拔更利于野生宽叶山蒿的生长。

基于IL-17A/TNF-a信号通路的桔梗汤有效部位群干预COPD模型大鼠的实验研究

目的研究桔梗汤不同部位基于IL-17A/TNF-a信号通路对COPD模型大鼠的影响,初步筛选桔梗汤治疗COPD的有效部位。方法建立COPD大鼠模型,将40只SD大鼠分为生理盐水组、模型组、桔梗汤总皂苷组、桔梗汤总多糖组和桔梗汤总黄酮组,经过28天的治疗后,观察分析大鼠一般情况及体重变化、大鼠肺组织病理学改变及气管壁厚度变化、大鼠血清中IL-17A、TNF-a、IFN-α和IFN-β的表达。结果桔梗汤总皂苷和总黄酮对大鼠体重变化、大鼠气管壁厚度变化、大鼠血清中IL-17A、TNF-a、IFN-α和IFN-β的表达和模型组比较有显著性差异(P<0.05),桔梗汤总多糖对上述指标和模型组比较无显著性差异(P>0.05)。结论桔梗汤总皂苷和总黄酮可通过IL-17A/TNF-a信号通路显著改善COPD大鼠肺功能,并初步确定桔梗汤防治COPD的有效部位为总皂苷和总黄酮。

基于对NOD小鼠颌下腺RORγt、Foxp3及其mRNA调节探讨白芍总苷治疗干燥综合征的作用机制

为了探讨白芍总苷治疗干燥综合征的作用机制,本实验以BALB/c小鼠为正常对照组,将8周龄雌性NOD小鼠24只随机分为模型组、羟氯喹组、白芍总苷组、联合组,每组各6只,白芍总苷组每日灌胃白芍总苷稀释液0.4 mL,羟氯喹组每日灌胃羟氯喹稀释液0.4 mL,联合组每日灌胃白芍总苷+羟氯喹稀释液0.4 mL,模型组和正常组灌胃等体积的生理盐水0.4 mL。8周后摘取颌下腺组织,观察各组小鼠颌下腺病理变化,并用RT-PCR法检测颌下腺组织RORγt mRNA、FoxP3 mRNA的表达。结果显示:小鼠颌下腺病理损害模型组明显较正常组严重,其他组经药物干预后得到不同程度的改善,且联合组明显优于羟氯喹组和白芍总苷组。模型组NOD小鼠颌下腺RORγt mRNA的表达明显高于正常组,而Foxp3 mRNA的表达明显低于正常组,各给药组颌下腺RORγt mRNA的表达高于模型组,且联合组的表达明显低于羟氯喹组和白芍总苷组。联合组颌下腺Foxp3 mRNA的表达低于模型组、羟氯喹组和白芍总苷组,且与模型组相比有显著性差异。研究表明白芍总苷能改善干燥综合征NOD小鼠颌下腺的病理损害,可能通过RORγt/FoxP3介导的Thl7/Treg之间的免疫平衡而起到治疗SS的作用。

基于硬皮病线粒体相关基因的人工神经网络模型的构建

目的建立基于GEO数据库硬皮病线粒体相关基因的机器学习和人工神经网络联合诊断模型并评价其效果。方法通过GEO数据库获取3份硬皮病芯片。其中GSE95065及GSE59785合并作为实验数据集并提取线粒体相关基因表达量,使用随机森林、LASSO回归和SVM算法筛选硬皮病线粒体相关特征基因,并用特征基因构建人工神经网络模型,用10折交叉验证模型准确性。来用验证数据集GSE76807对模型进一步验证,利用ROC曲线下面积值评估模型准确性。用RT-qPCR实验验证关键基因mRNA相对表达量。最后用CIBERSORT算法预估硬皮病与筛选出的潜在生物标志物的生物信息学关联。结果共获取差异基因24个,其中上调基因11个,下调基因13个。通过3种机器学习算法筛选到最相关的7个线粒体相关特征基因(POLB、GSR、KRAS、NT5DC2、NOX4、IGF1、TGM2),并构建人工神经网络诊断模型。使用该模型绘制了实验组和验证组诊断的ROC曲线,AUC值为0.984。验证组AUC为0.740。10折交叉验证AUC平均值大于0.980。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,硬皮病中POLB(P=0.004)、GSR(P=0.029)、KRAS(P=0.007)、NOX4(P=0.019)、IGF1(P=0.008)、TGM2(P<0.0001)表达量明显上调,而NT5DC2(P=0.001)表达量在硬皮病组中明显下调。免疫细胞浸润显示,特征基因与滤泡辅助T细胞、幼稚B细胞、静息树突状细胞、记忆激活CD4+T细胞、巨噬细胞M0、单核细胞、记忆静息CD4+T细胞和肥大细胞激活等相关。结论构建了硬皮病特征基因的人工神经网络诊断模型,为探索硬皮病发病机制提供了一个新视角。

气相色谱结合化学计量在核桃油、菜籽油掺伪混合物含量判别分析中的应用

目的:识别核桃油中同时掺入多种其他植物油的多元掺伪。方法:采用气相色谱技术分析核桃油、菜籽油掺伪混合物中脂肪酸含量,结合化学计量方法对气相色谱数据进行建模,并对不同比例核桃油、菜籽油混合物进行判别分析。结果:主成分分析法(PCA)能快速鉴别出纯核桃油和掺伪核桃油,并在一定程度上反映样本的掺伪比例;Bayes判别分析将83.33%的样品归入正确的分类;偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)的判别准确率达87.50%;基于BP神经网络模型的判别分析,其训练集的正确率为84.21%,测试集的正确率为80.00%;基于遗传算法优化支持向量机(SVM-ga)的判别分析,其训练集和测试集的正确率均为100%。结论:多种分析模型均能不同程度地识别核桃油、菜籽油掺伪比例,其中SVM-ga模型的预测精度最佳。

11批次白芷药材的HPLC和GC指纹图谱实验研究

建立白芷GC及HPLC指纹图谱,为白芷药材的质量评价提供参考。运用HPLC及GC法对白芷药材水提液及挥发油进行指纹图谱研究。HPLC采用Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,A相:乙腈,B相:0.2%冰醋酸溶液(三乙胺调p H 5.0);柱温30℃,进样量10μL,波长245 nm;流速:1 m L/min。乙腈比例为0~35 min;10~25;35~55 min:25~58;55~70 min:58~80;70~75 min:80~100。GC采用HP—5毛细管气相色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)。采用程序升温模式,升温程序为55℃(10 min)以4℃/min的速度线性升温至250℃(8 min)。通过建立11批白芷药材HPLC及GC指纹图谱,对白芷药材的质量进行控制。HPLC实验各批次之间相似度0.9以上,GC实验中各批次之间相似度高于0.8,各批次相似度较佳。首次建立了11批白芷药材HPLC及GC指纹图谱分析方法;该法稳定可靠、重复性好,对白芷药材的质量控制提供了全面可靠的科学依据。

哈茨木霉对半夏根际微生物群落及茎腐病发生的影响

研究哈茨木霉对半夏茎腐病的防治效果,进一步运用高通量测序的方法检测了哈茨木霉对半夏根际微生物群落的影响,以期揭示哈茨木霉防治半夏茎腐病的微生态机制。设置2个浓度的哈茨木霉菌液对半夏进行灌根,处理3个月后检测不同处理下半夏茎腐病的发病率,利用高通量测序技术研究不同处理下半夏根际微生物的群落多样性、结构和组成差异。经哈茨木霉处理后的半夏茎腐病发病率明显降低,其中HC-200处理的半夏茎腐病发病率较CK显著降低54.55%(P<0.05)。成功分离并通过形态学和序列比对鉴定半夏茎腐病的病原菌为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。施加哈茨木霉后极显著降低了细菌ACE、Chao1、Shannon和Simpson指数(P<0.01),说明半夏根际细菌群落的多样性极显著降低。同时,施加哈茨木霉也降低了镰刀菌属(Fusarium)、被孢霉属(Mortierella)、小不整球壳菌属(Plectosphaerella)和锥盖伞菌属(Conocybe)的相对丰度。镰刀菌属和木霉菌属(Trichoderma)的相对丰度呈显著负相关关系。以上结果在一定程度上揭示了哈茨木霉防治半夏茎腐病的机制是通过抑制半夏根际土壤中镰刀菌属真菌的增殖来实现的。结果可为哈茨木霉运用到半夏茎腐病的田间防治上提供重要参考依据。

基于网络药理学探讨益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的作用机制

目的:通过网络药理学技术探究益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的分子机制。方法:通过TCMSP数据库获取益气养阴化浊通络方相关药物靶点,GeneCard、OMIM及PharmGkb数据库获取糖尿病肾病相关靶点。Venny R软件获取益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的潜在靶点,Cytoscape 3.8.0软件构建药物-有效成分-靶点-疾病网络图。对潜在靶点进行PPI互作网络分析、GO功能及KEGG通路富集分析。结果:共获取益气养阴化浊通络方有效成分66个,有效靶点254个,糖尿病肾病相关靶点4755个,取交集后获取潜在靶点179个。PPI分析获取核心靶点MAPK3、TP53、MAPK1、HSP90AA1、JUN、AKT1、RELA、MAPK14等;GO功能富集分析体现在对氧化应激的反应、细胞对化学压力的反应、对外来刺激的反应、对活性氧的反应等;细胞组分多在膜筏、膜微域、转录调节因子、复合囊泡腔等;分子功能多在DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶II特异性DNA结合转录因子结合、核受体活性、配体激活的转录因子活性等;KEGG通路富集分析多在糖尿病并发症中的脂质与动脉粥样硬化、年龄-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、前列腺癌、乙肝、人巨细胞病毒感染、化学致癌-受体激活及流体切应力与动脉粥样硬化等通路。结论:通过网络药理学技术探究益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的作用机制,为后续相关研究提供理论依据和数据支撑。

不同产地半夏主要药理作用分析

[目的]比较不同产地半夏主要药理作用,为半夏的质量评价和临床用药提供试验依据。[方法]分别对国内6个主产区(湖北天门、江苏南通、河南唐河、四川蓬溪、河北安国、贵州赫章)半夏进行主要药效研究,采用气管酚红排泌法、浓氨水引咳法、冰醋酸致小鼠扭体、二甲苯致小鼠耳肿胀试验方法建立痰液分泌模型、咳嗽模型、镇痛模型及炎症模型,探讨不同产地半夏的祛痰、镇咳、镇痛及抗炎作用的差异。[结果]在止咳祛痰作用方面,贵州赫章、江苏南通、四川蓬溪3个产区半夏能够明显增加小鼠气管酚红排泌量,显著减少小鼠咳嗽次数及延长咳嗽潜伏期(P<0.01);在镇痛抗炎作用方面,四川蓬溪、湖北天门、河南唐河3个产区半夏均能够明显延长疼痛潜伏期及减少扭体次数,显著降低小鼠耳肿胀度(P<0.01);贵州赫章、河北安国产半夏镇痛抗炎作用次之,江苏南通产半夏镇痛抗炎作用弱于其他产地。[结论]6个产区半夏均有不同程度的祛痰、镇咳、镇痛、抗炎作用,其中贵州赫章、江苏南通、四川蓬溪3个产区半夏在止咳祛痰作用明显优于湖北天门、河南唐河、河北安国;在镇痛抗炎作用方面,四川蓬溪、湖北天门所产半夏强于其他产地。

裕丹参对实验性心肌梗死大鼠心肌组织的保护作用

目的探讨裕丹参对实验性心肌梗死大鼠的保护作用及其机制。方法随机将Wistar大鼠50只分为假手术组、模型组和低、中、高剂量裕丹参组。后三组分别以15、30、60 mg/kg/d的剂量灌胃给药,前两组相同量的生理盐水灌胃。4周后检测各组大鼠的血液动力学参数,取颈动脉血液,测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、前列环素(PGI2)和血栓素A2(TXA2)的含量。处死大鼠,取心尖部心肌组织,一半做石蜡切片,HE染色检测心肌组织的病理变化,TUNEL免疫荧光染色检测心肌细胞的凋亡数量变化,免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达水平;另一半制作成组织匀浆,检测心肌组织中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量及Caspase-3蛋白、B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl-2关联蛋白(Bax)的表达水平。结果血流动力学检测结果证实,各剂量裕丹参治疗组均可明显升高大鼠心脏的左室收缩压、左室内压曲线最大上升和下降速率,降低左心室舒张末期压力。血清酶学结果表明,各剂量裕丹参治疗组均可明显升高血清中的PGI2浓度,降低血清中的LDH、CK-MB、TXA2浓度。HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色结果证实,各剂量裕丹参治疗组均可明显改善心肌组织的紊乱形态,显著减少凋亡的心肌细胞数量,下调心肌组织中的Caspase-3蛋白表达。心肌组织检测结果表明,各剂量裕丹参治疗组均可明显上调心肌组织中的SOD含量和Bcl-2蛋白的表达,下调组织中的MDA含量、Caspase-3和Bax蛋白的表达。结论裕丹参对实验性心肌梗死大鼠的心肌具有明显的保护作用,其作用可能与裕丹参具有抗氧化、抗凋亡的作用密切相关。

桂枝茯苓胶囊通过调控NF-κB通路抑制卵巢癌细胞的迁移和诱导卵巢癌细胞的凋亡

目的研究桂枝茯苓胶囊(GFC)抑制人卵巢癌转移的作用和潜在机制。方法60只Wistar大鼠随机分为4组,15只/组:给药组分别灌胃给予4、8、16 g·kg^(-1)·d^(-1)剂量的GFC悬液5 d,分别制备GFC低、中、高剂量含药血清,空白组给予相同体积的生理盐水制备空白血清;卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞分为空白血清组、不同剂量GFC含药血清组和NF-κB抑制剂SN50阳性对照组。采用划痕实验检测含药血清对迁移的影响,采用流式细胞术检测含药血清对凋亡的影响,采用RT-qPCR和Westernblot检测含药血清对细胞中上皮表型E-钙粘蛋白(CDH1)、间质表型N-钙黏蛋白(CDH2)、caspase 3和NF-κB mRNA和蛋白表达的影响。采用ATAC-seq检测染色质开放区域CDH1、CDH2、caspase 3和NF-κB基因表达差异。结果GFC含药血清可剂量依赖性地抑制SKOV3/DDP细胞迁移,增加细胞凋亡(P<0.05,P<0.01)。随着含药血清剂量增加,其对CDH2和NF-κB的抑制作用,及其对CDH1和caspase 3的诱导作用均逐渐增强(P<0.05,P<0.01)。高剂量含药血清抑制SKOV3/DDP细胞迁移,诱导凋亡、caspase 3 mRNA和蛋白以及CDH1 mRNA表达,抑制CDH2和NF-κB mRNA和蛋白表达的作用与SN50相当(P>0.05),但诱导CDH1蛋白表达的作用弱于SN50(P<0.01)。含药血清可减弱染色质开放区域NF-κB、CDH2基因表达,增强CDH1表达,但对caspase 3无影响。结论GFC含药血清抑制SKOV3/DDP迁移作用可能与其诱导凋亡、caspase 3和CDH1表达,抑制CDH2和NF-κB表达,调控染色质开放区域NF-κB、CDH2和CDH1表达有关。

芍药内酯苷对人卵巢癌多药耐药的逆转作用

目的研究芍药内酯苷(albiflorin,AL)逆转人卵巢癌多药耐药的作用和潜在机制。方法采用CCK-8试剂盒检测AL对SKOV3/DDP细胞的耐药逆转作用,采用流式细胞术检测AL对P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)功能的影响,采用RT-qPCR和Western blot检测AL对SKOV3/DDP细胞中MYC、WWP1和ABCB1/P-gp的影响。采用RNA干扰技术构建MYC敲低的SKOV3/DDP细胞株,观察其耐药性、P-gp功能及相关基因和蛋白表达变化。结果AL对SKOV3/DDP细胞有耐药逆转作用,对P-gp功能抑制作用具有浓度依赖性。AL 25、50、100μmol·L^(-1)对ABCB1/P-gp、MYC和WWP1的抑制作用均逐渐增强。MYC抑制剂MYCi975对ABCB1/P-gp、MYC和WWP1的抑制作用均强于或相当于AL 100μmol·L^(-1)组。SKOV3/DDP细胞敲低MYC后,细胞耐药性、P-gp功能以及相关基因和蛋白表达均受到抑制。结论AL对SKOV3/DDP细胞的耐药逆转作用可能与抑制P-gp功能和ABCB1/P-gp、MYC、WWP1表达有关,为AL作为耐药逆转剂用于卵巢癌的临床治疗提供了实验基础。

温阳化浊通络方抑制系统性硬化病EndoMT的机制研究

目的:研究温阳化浊通络方抑制系统性硬化病(Systemic sclerosis,SSc)肺血管内皮细胞内皮-间充质转化(Endothelium-mesenchymal transformation,EndoMT)的效应和潜在分子机制。方法:利用博来霉素构建SSc小鼠模型,然后分别利用温阳化浊通络方或HIF-1α抑制剂KC7F2处理。采用masson染色观察小鼠肺组织纤维化程度。采用免疫组化检测小鼠肺组织和细胞中HIF-1α、Foxm1、smad3、VE-Cadherin、vimentin的蛋白表达水平。结果:在SSc小鼠模型中,温阳化浊通络方和KC7F2能够显著抑制小鼠肺组织的纤维化,并且下调肺组织中HIF-1α、Foxm1、smad3、vimentin的蛋白表达水平(P<0.05),同时上调VE-cadherin的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:温阳化浊通络方能够抑制SSc肺血管内皮细胞EndoMT,其分子机制与其抑制HIF-1α/Foxm1/Smad3信号通路有关。

黄芪甲苷通过调控PKD1-HDAC5-VEGF通路促进心肌梗死大鼠血管新生

目的:观察黄芪甲苷(AS-IV)通过调控蛋白激酶D1(PKD1)-组蛋白脱乙酰酶5(HDAC5)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路促心肌梗死大鼠血管新生的作用并分析其可能的作用机制。方法:采用经典的左冠状动脉前降支结扎术复制心肌梗死模型后,将大鼠分成模型组、AS-IV治疗组和AS-IV+CID755673(PKD1阻断剂)组,另设假手术对照组和二甲基亚砜(DMSO)对照组,均采用尾静脉注射的给药方式。4周后处死大鼠,应用HE染色和Masson染色分析左心室心肌组织病理学变化;应用RT-PCR分析心肌组织中PKD1、HDAC5和VEGF m RNA的表达;免疫组化及Western blot法分析心肌组织中PKD1、VEGF及HDAC5蛋白的表达。结果:组织病理学分析表明,假手术组和DMSO组大鼠心肌组织形态正常,而模型组大鼠心肌组织形态紊乱,心肌细胞坏死和纤维化明显;AS-IV治疗后,心肌组织形态改善明显,且新生的血管数量明显增多;AS-IV+CID755673处理后大鼠心肌组织形态再次趋向紊乱,坏死细胞增多,部分血管闭合。模型组心肌组织中PKD1、HDAC5和VEGF的m RNA和蛋白表达明显低于假手术组和DMSO组(P<0.05),而AS-IV组显著高于模型组(P<0.01),AS-IV+CID755673组明显低于AS-IV组(P<0.05)。结论:AS-IV可部分通过调控PKD1-HDAC5-VEGF信号通路发挥促大鼠心肌梗死后心肌组织血管新生的作用。

HPLC法测定不同产地西红花中西红花苷-Ⅰ和西红苷-Ⅱ的含量

利用高效液相色谱法,同时测定不同产地西红花中的西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量;采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水(45∶55,V/V)洗脱,流速为1.0 m L·min-1,检测波长为440 nm,柱温为25℃。方法学考察表明:在上述色谱条件下,西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ能与杂质完全分离;标准曲线线性关系良好(R2>0.999 0),精密度和稳定性符合分析要求,平均加样回收率分别为99.42%、99.36%,RSD分别为1.48%、1.28%,表明所建立的方法重复性、耐用性、准确度良好。对10批不同产地的西红花药材进行分析,结果显示产自河南南阳、河南许昌、浙江湖州和河北定州的西红花的总苷含量高于其他产地,为西红花药材的质量评价和控制提供了一定的科学依据。