Sema4D介导的IRS-1信号通路在抑制成骨细胞分化中的作用机制研究

目的通过siRNA干扰技术沉默轴突导向因子4D(Sema4D)基因,探讨Sema4D基因对成骨细胞分化的影响。方法采用RT-PCR、细胞免疫荧光法和Western blot测定Sema4D基因表达情况,分析沉默效率;采用ALP染色、VonKossa染色及ALP活性观测成骨细胞分化。结果 siRNA干扰技术下调了Sema4D的表达,成功构建了Sema4D基因沉默体系;Sema4DsiRNA中成骨细胞的分化明显增强,出现了一定程度的钙化。结论沉默Sema4D基因与成骨细胞的分化有关。

Noggin基因过表达重组腺病毒载体的构建及其对骨肿瘤细胞MG63迁移侵袭能力的影响

目的:研究Noggin基因对骨肿瘤细胞MG63中Noggin,BMP-2,血管内皮生长因子(VEGF)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达及细胞迁移侵袭的影响,探讨Noggin基因在骨肿瘤的发生和发展过程中的作用机制。方法:通过构建Noggin基因过表达重组腺病毒载体,并将其转染到骨肿瘤细胞MG63中,采用RT-PCR和Western blot分别检测空白对照组、过表达重组腺病毒组中Noggin,BMP-2,VEGF和CTGF的mRNA水平和蛋白水平,Transwell细胞迁移和侵袭能力实验考察两组细胞的迁移和侵袭能力。结果:成功构建Noggin基因过表达重组腺病毒载体,将其转染到骨肿瘤细胞MG63后,Noggin的mRNA及蛋白表达水平显著升高,BMP-2,VEGF及CTGF的mRNA及蛋白表达水平显著降低,转染Noggin基因过表达重组腺病毒的骨肿瘤细胞MG63迁移和侵袭的能力明显下降。结论:过表达Noggin基因能成功抑制骨肿瘤细胞MG63的侵袭和转移,有望成为骨肿瘤基因治疗的新方法。