口腔多菌种生物膜对防龋中药敏感性的实验研究

目的采用MBECTM-Device研究防龋中药五倍子多酚性化合物(GCE)、五倍子B(GCE-B)、蜂房95%组分(NVE1)对多菌种生物膜细菌的生长抑制作用,建立防龋中药药效学的药物敏感实验方法,为临床实验提供客观的药物作用的浓度范围。方法选择与龋病发生密切相关的4种口腔细菌形成多菌种生物膜,药物为GCE、GCE-B、NVE1,扫描电镜观察口腔细菌在MBECTM-Device上形成细菌生物膜的能力和形成情况;采用MBECTM-HTP-Assay测定药物对口腔细菌的最小抑菌浓度(MIC)和对细菌生物膜的最小生物膜清除浓度(MBEC)。结果在MBECTM-Device提供的桩钉表面上口腔细菌能形成良好的生物膜结构,从不同时段取出的样本可以观察到细菌从定植粘附到生物膜形成以及生物膜成熟结构。GCE、GCE-B、NVE1对口腔细菌均有良好的抑制作用。GCE、GCE-B对口腔生物膜细菌有很好的抑制作用,但是NVE1对口腔生物膜细菌的抑制作用较差。药物对口腔生物膜细菌的MBEC是MIC的2～16倍。结论中药五倍子多酚性化合物和五倍子B对口腔生物膜细菌有很好的抑制和清除效应,MBEC比MIC能更客观地反映药物作用的浓度范围。

中药五倍子、蜂房提取物对早期釉质龋再矿化作用的实验研究

目的通过pH循环实验研究中药五倍子、蜂房提取物对人工早期釉质龋的再矿化作用。方法应用离体牛切牙制备人工釉质龋标本40例,随机分为4组:(a)去离子水组(阴性对照)、(b)五倍子组、(c)蜂房组、(d)NaF组(阳性对照),进行体外pH循环实验后,采用显微硬度计测定标本脱矿前后和pH循环后的硬度值,观察釉质表面显微硬度的变化。通过偏光显微镜观察早期釉质龋损再矿化后的病理学改变。结果NaF组(阳性对照)和五倍子组能明显的提高早期釉质龋的表面显微硬度(P<0.05),蜂房组虽然也能提高釉质龋的表面显微硬度,但与去离子水组(阴性对照)比较无统计学意义(P>0.05)。偏光显微镜下,pH循环后NaF组(阳性对照)和五倍子组表层明显增厚,密度增加,病损体部出现呈负性双折射的再矿化条带,病损深度也明显变浅。结论五倍子能有效促进早期釉质龋再矿化,因而具有防龋功效。

含银无机抗菌剂加入树脂中对口腔常见细菌黏附影响的研究

目的检测含银硅铝酸盐无机抗菌剂对口腔常见细菌的作用效果,以及加入该抗菌剂的基托树脂表面的口腔常见细菌的黏附情况。方法将一定量细菌、真菌接种到含有适当比例含银硅铝酸盐无机抗菌剂的培养基中,检测该抗菌剂的抑菌情况;应用体外菌斑模型观察含有抗菌剂的聚甲基丙烯酸基托树脂表面的微生物黏附状况。结果含银无机抗菌剂在8%的质量分数内可以完全抑制口腔常见细菌的生长,在质量分数为1.25%和2.50%的情况下能够有效地抑制牙龈卟啉单胞菌和白假丝酵母菌的生长;但是在16d的实验期内未能抑制细菌在材料表面的黏附。结论含银硅铝酸盐无机抗菌剂对口腔常见细菌有良好的抑菌效果,但是在聚甲基丙烯酸树脂材料中加入含银硅铝酸盐无机抗菌剂,没有表现出抑制细菌黏附的能力。

正畸力影响炎性牙周组织中肿瘤坏死因子α蛋白表达的实验研究

目的探讨正畸力及炎性刺激影响牙周组织改建的联合效应。方法选用96只雄性SD成年大鼠,分别建立实验性牙周炎大鼠和注射内毒素健康大鼠模型,近中移动两模型的上颌磨牙。结果在0h、2h、12h、2d、7d、14d时,磨牙近中压力侧牙周膜组织内肿瘤坏死因子α(TNF_α)的蛋白表达出现波动,2d时平均光密度(OD)值达到峰值。结论急、慢性牙周炎症均可阻碍正畸力效应下的牙周组织改建,研究提示对成年牙周炎患者,牙移动应谨慎进行。

塞克硝唑对口腔厌氧病原菌体外抗菌活性的测定

目的测定实验药物塞克硝唑对口腔厌氧病原菌的体外抗菌作用。方法本试验采用美国国立临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)推荐的厌氧菌药物敏感试验-琼脂稀释法,检测塞克硝唑对6株模式株和参考株及35株口腔临床分离株的体外抗菌活性,并与同类药物甲硝唑进行比较。结果塞克硝唑和甲硝唑对6株模式株和参考株的MIC值分别是0.062～0.5μg/ml、0.125～0.5μg/ml;对35株临床分离株的MIC值分别是0.031～0.5μg/ml、0.031～1.0μg/ml。结论塞克硝唑与甲硝唑相比体外抗厌氧菌活性相似或略强。

磁性附着体模拟静磁场对人牙周膜成纤维细胞的生物学效应研究

目的探讨磁性附着体静磁场对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)的生物学效应。方法对体外培养的HPDLF分别进行12.5、125和250mT静磁场持续加载4d,设无外加静磁场作用的对照组,分别测定各组细胞的碱性磷酸酶(ALP)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用流式细胞仪行细胞周期分析。结果高剂量静磁场(250mT)明显增强HPDLF的ALP活性(P<0.05)。各磁场剂量组的细胞SOD活性与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞G0/G1期、S期、G2/M期分布和增殖指数与对照组相比也无统计学差异(P>0.05)。结论在本实验条件下磁性附着体静磁场可促进HPDLF的ALP活性,而对SOD活性以及细胞周期分布无明显影响。

运用输送盘牵张成骨术重建猴下颌髁突的实验研究

目的研究在猴颞下颌关节(TMJ)缺损动物模型上运用输送盘牵张成骨术重建髁突的可行性及其整复效果。方法选取6只成年恒河猴,手术截除其双侧关节髁突与关节盘,在下颌升支部行“L”形骨切开术,形成骨输送盘,并安置自行研制的牵张器。按每次0.4 mm,每次间隔12 h的牵张速率向上牵引输送盘至关节窝。牵张结束后第4、12、24周各处死2只动物。通过影像学分析和组织学检查评价输送盘改建与牵张间隙内新骨生成情况。以术中切除的髁突作为正常对照组。结果术后所有动物都有不同程度的咬合错乱,牵张结束后咬合基本恢复正常。骨输送盘形态基本接近正常髁突,其下方可见大量软骨细胞;牵张间隙内新骨生成良好。结论输送盘牵张成骨术可以重建一个形态和功能都基本接近正常的髁突,这种技术可以作为一种整复TMJ缺损的新方法。

健康老年人口腔念珠菌与义齿修复的相关研究

目的研究健康老年人群口腔念珠菌的定植状况,分析义齿修复对老年人口腔念珠菌定植的影响。方法212例健康老年人分为4组:A1组(男性,有义齿),B1组(男性,无义齿),A2组(女性,有义齿)和B2组(女性,无义齿)。标准含潄法取样,样本接种于沙堡琼脂培养基培养念珠菌,CHROMagarCandidaTM鉴定培养基鉴定白色念珠菌,碳水化合物同化反应鉴定体系鉴定念珠菌菌种。培养基中念珠菌菌落计数为每个样本的念珠菌检出强度。比较4组健康老年人念珠菌检出率和检出强度有无统计学差异。结果212例老年人中116例检出念珠菌,检出率为54.72%。检出念珠菌包括白色念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌等10个菌种。A1、B1、A2和B2组念珠菌检出率分别为66.67%,36.07%,64.15%和56.00%;白色念珠菌检出率分别为56.25%,21.31%,56.60%和38.00%。A1组念珠菌、白色念珠菌检出率高于B1组(P<0.05)。高念珠菌强度者在A1、A2组所占比例分别较B1、B2组高(P<0.05)。结论健康老年人口腔总念珠菌及白色念珠菌检出率和检出强度增高与义齿修复相关。老年人口腔念珠菌检出率和检出强度的差异主要是白色念珠菌检出率和检出强度的差异所造成。

口腔黏膜癌变过程中中心体的扩增及其意义

目的 了解口腔黏膜癌变过程中中心体的状况 ,探讨中心体的异常在口腔鳞状细胞癌 (OSCC)发生发展中的作用及其在口腔黏膜癌变过程中的意义。方法 选取正常口腔黏膜 (12例 )、轻度上皮异常增生 (2例 )、中度上皮异常增生 (8例 )、重度上皮异常增生 (12例 ) ,口腔高分化鳞癌 (10例 )、中分化鳞癌 (15例 )、低分化鳞癌 (7例 )的石蜡包埋组织 ,采用间接免疫荧光双重染色 (γ_微管蛋白单克隆抗体及细胞角蛋白多克隆抗体 )显示上皮细胞中的中心体 ,分析其在口腔黏膜癌变过程中的变化趋势及在各组间的差异。结果 正常口腔黏膜上皮表现为大小数目正常的中心体 ,但在 72 73% (16 / 2 2 )的上皮异常增生及 84 38% (2 7/ 32 )OSCC组织中观察到部分上皮或肿瘤细胞中出现异常中心体 ,表现为中心体直径的增加或数目的增多。具有异常中心体的细胞数目随上皮异常增生程度的增加及肿瘤分化程度的降低而增加 ,二者存在明显的正相关关系 (P <0 0 1)。结论 中心体的扩增是口腔黏膜癌变过程中的早期事件并与口腔癌发生发展进程有关 ,口腔黏膜癌变过程中的细胞形态学改变与中心体扩增之间可能存在直接机制上的联系。从调控中心体循环入手治疗口腔癌前病损及OSCC ,有可能成为口腔癌预防和治疗的新途径。

牙槽突和硬腭全裂隙植骨修复对腭裂上颌骨模型的生物力学影响

目的研究牙槽突及牙槽突加硬腭全裂隙植骨对腭裂上颌骨模型的生物力学影响。方法采用15岁男性患者头颅CT扫描DICOM数据建立3种单侧腭裂上颌骨三维有限元模型,通过叠加不同的植骨块形成牙槽突植骨修复及牙槽突加硬腭全裂隙植骨修复后的腭裂上颌骨模型。在上颌骨前牙区及两侧前磨牙区以正常上唇压力加载负荷,观察各种应力沿上颌骨分布的特点。结果未植骨模型,上颌骨段以变形和移位为主,各种应力集中于上颌骨前壁、牙槽突和腭板等处。植骨模型表现为应力分布均匀化。牙槽突植骨可以显著降低由于上颌骨变形而产生的剪应力和牙槽突的向内移位。牙槽突加硬腭全裂隙植骨可以使得应力分布更加均匀,但是与牙槽突植骨差异不大。结论唇裂修复手术后产生的压力是使未作植骨修复的牙槽突产生变形移位的主要原因。牙槽突植骨修复可以使腭裂上颌骨表面应力分布趋向均匀,生物力学意义重大。牙槽突加硬腭全裂隙植骨可以使得应力分布更加均匀,但与单纯牙槽突植骨效果相比,无显著性差异。

白假丝酵母菌药物流出泵基因在生物膜中表达的动态研究

目的动态观察白假丝酵母菌生物膜形成过程中耐药性产生相关的药物流出泵基因的表达和耐药性的变化情况,并分析该类基因的表达与生物膜耐药性产生的相关性。方法利用人工口腔恒化器形成白假丝酵母菌生物膜结构,收集生物膜形成不同阶段的生物膜态菌细胞,半定量RT-PCR技术分析菌细胞mRNA在生物膜成熟过程中的动态变化;96孔板XTT减低法获得生物膜耐药性的变化情况。结果耐药性随着生物膜的成熟不断增强;与早期生物膜相比,成熟生物膜菌株的药物流出泵基因CDR1表达上调,而MDR1基因的表达在生物膜的整个成熟过程中基本维持不变。结论生物膜成熟程度与耐药性增强有明显正相关性;药物流出泵基因的表达上调与生物膜耐药性的产生有一定关系但改变不一致;在生物膜成熟过程中,CDR1表达水平改变活跃,而MDR1基因相对稳定。

下颌角骨折坚强内固定的生物力学分析

目的比较下颌角骨折后两种不同的内固定方法对其应力分布的影响。方法采用成人干燥无牙下颌骨,建立由咬肌、颞肌、翼内肌和翼外肌4组肌肉共同加载,由硅橡胶模拟颞下颌关节结构功能状态下的下颌骨机械力学模型。采用电阻应变片的测量方法,分析不同坚强内固定方式,即仅在下颌角上缘张力带固定一个小型接骨板和在下颌角下缘附加固定一个小型接骨板对下颌骨应力分布的影响。结果两种固定方法下健侧的应力分布与骨折前均无显著性差异(P>0.05),但是仅在下颌角上缘固定一个小型接骨板将使患侧下颌骨下缘呈张应力趋势,造成应力轨迹的中断。结论两种固定方法均可以恢复健侧的应力轨迹,但是要获得骨折区域充分的稳定性,固定两个小型接骨板是必要的。

口腔癌相关成纤维细胞对人工基底膜的降解作用及其机制

目的观察口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)降解人工基底膜matrigel的能力,并探讨其可能的作用机制。方法matrigel凝胶与CAFs和NFs共同培养24、48、72h后,收集培养上清液,按照羟脯氨酸检测试剂盒说明测定羟脯氨酸含量;用考马斯亮兰微孔板法行微量蛋白定量;用明胶酶谱分析对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量进行测定。结果在各时间段,口腔CAFs上清超滤液中羟脯氨酸含量、上清液总蛋白浓度及MMP-2酶原含量明显高于NFs,且CAFs组表达大量MMP-2活性酶。口腔CAFs和NFs皆不表达MMP-9。结论CAFs具有较强的降解细胞外基质的能力,提示其与肿瘤-宿主微环境中基质重建及肿瘤侵袭有关。

附着状态对口腔白色念珠菌ALS基因mRNA的影响

目的比较生物膜和游离状态下,白色念珠菌ALS基因在mRNA水平上的表达差异。方法一步法RT_PCR观察白色念珠菌临床分离株和标准菌株,在游离状态和生物膜状态下ALS1和ALS4的mRNA的丰度差异。结果白色念珠菌临床分离株在生物膜状态下,ALS1和ALS4的mRNA丰度明显强于游离状态,而标准株在游离状态和生物膜状态下,ALS1和ALS4的mRNA丰度没有显著性差异。结论生物膜状态下的白色念珠菌,ALS基因在转录水平的表达有增强,提示该基因在生物膜形成发展中可能有一定的作用,但其增强的程度在菌株之间可能有较大的差别。

白细胞介素1基因多态性与四川地区慢性牙周炎相关关系的研究

目的 检测IL-1基因型在不同牙周健康状态汉族人群中的分布,分析IL-1等位基因与慢性牙周炎的相关关系。方法 选取汉族慢性牙周炎患者182例,检查全口临床牙周附着丧失量,牙周袋深度;同时选取牙周健康对照者89例。棉拭子刮取颊黏膜脱落细胞,用PCR-RFLP法和PCR法检测IL-1+3953、IL-1A-889、IL-1B-511和IL-1RN(intron2)VNTR基因型分布。结果 重度慢性牙周炎患者组IL-1A.889、IL-1B+3953和IL-1B-511等位基因Ⅱ以及IL-1A-889和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ、Ⅱ,1B+3953和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ基因频率均显著高于健康对照组(P<0.05),IL-1RN(intron2)VNTR等位基因的基因型和等位基因频率在各组间的分布无显著性差异(P>0.05)。结论 IL-1基因多态性与慢性牙周炎有相关关系,IL-1B+3953、IL-1A-889和IL-1B-511等位基因Ⅱ以及IL-1A-889和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ、IL-1B+3953和IL-1B-511复合等位基因Ⅱ可能是部分慢性牙周炎患者易感性的遗传标志。同时提示IL-1基因型在不同地域、不同人种中的分布是不相同的。

实验性牙移动中三叉神经节P2X3受体蛋白量及mRNA的表达变化

目的研究正畸牙移动中P2X3受体蛋白量及mRNA在三叉神经节(TG)中的表达变化规律。方法以雄性SD大鼠为实验对象,模拟临床矫治的牙移动过程,分别在实验4h,1d,2d,3d,5d,7d和14d时取出三叉神经节,应用Westernblot分析检测P2X3受体蛋白的表达量,同时应用原位杂交方法对P2X3受体的表达部位及强度变化进行研究。结果大鼠牙齿加力后,Westernblot分析观察发现TG内P2X3受体蛋白量发生一定变化,并呈现一定的时间规律,在实验1d后开始出现变化,3d后达到高峰,14d后下降至与对照组基本一致。同时观察到TG内P2X3mRNA杂交信号阳性标记神经元的数量呈现一定的时间规律,与Westernblot分析结果基本一致。结论在大鼠牙移动过程中,TG中P2X3受体表达为一过性变化,呈现短时上调的规律,时间与正畸牙移动时的疼痛时间吻合,推测P2X3在正畸牙移动中可能与疼痛传导密切相关,但其作用机制还有待进一步探索。

人类牙乳头细胞的体外培养及细胞生物学性状研究

目的体外分离培养人类牙乳头细胞,并对传代细胞的生物学特性进行研究。方法选择3～4月胎龄的自然流产人胚胎,分离牙乳头,组织块法培养人类牙乳头细胞并鉴定。观察细胞的生长特性,经Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白免疫细胞化学染色及细胞矿化诱导后的钙盐染色对细胞的生物学性状进行研究。结果分离培养的人类牙乳头细胞在体外生长良好,细胞及分泌基质中的Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白表达阳性。将培养细胞行矿化诱导后,细胞可形成钙化基质。结论通过机械分离及贴壁法可获得人类牙乳头细胞,其传代细胞在基质形成和矿化能力方面与体内人牙乳头细胞有相似性,有潜力作为牙组织工程的种子细胞。

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株细胞外信号调节激酶通路的影响

目的研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)对舌癌细胞株细胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响。方法以口腔CAFs条件培养基刺激舌癌细胞株Tca8113和将Tca8113细胞与口腔CAFs共同培养,采用Western杂交检测特定时间Tca8113细胞总ERK和总pERK的表达。结果Tca8113细胞经口腔CAFs条件培养基刺激或与口腔CAFs共同培养后,总pERK的表达迅速增加,总pERK与总ERK的比值增加。结论口腔CAFs对癌细胞ERK通路有活化作用。

微生物凝集素的研究进展

凝集素(lectin)是一类可使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白,包括微生物凝集素、植物凝集素和动物凝集素,在多个学科领域有重要的应用价值。本文就微生物凝集素的种类、主要性能和功能以及口腔内微生物凝集素的研究作一综述。

体内组织工程骨的BMP4 mRNA表达

比较磷酸钙陶瓷构建的体内组织工程骨和自然再生骨的BMP4 mRNA表达。制备Φ5mm×8mm的骨诱导性磷酸钙陶瓷20粒并分别植入5只狗的竖直肌内,同时,拔除狗的一颗磨牙形成自然再生骨模型。术后1、2、4、12及24周,取出体内组织工程骨及自然再生骨。提取总RNA,经逆转录成cDNA后,用实时相对定量PCR的方法检测BMP4 mRNA的表达。结果表明:在本实验周期,BMP4 mRNA在磷酸钙陶瓷构建的体内组织工程骨中的表达量高于在自然再生骨中的表达量,但BMP4 mRNA在体内组织工程骨和自然再生骨中有相同的基因表达时序性。作为类似自体骨的骨替代物,磷酸钙陶瓷构建的体内组织工程骨具有切实可行的应用前景。