应用高效电融合技术制备小鼠抗人vasorin(VASN)单克隆抗体

目的通过电融合法制备肝癌候选标志物人vasorin(VASN)蛋白单克隆抗体并进行鉴定。方法以人带组氨酸标签的VASN重组蛋白(VASN-His)免疫小鼠后进行细胞电融合,间接ELISA筛选能够结合天然VASN的阳性克隆。通过ELISA检测抗体的效价及亲和力、Western blot法检测抗体能否识别HepG2细胞中VASN蛋白。结果在脾细胞与Sp2/0细胞的比例为2∶1,交变电场场强50 V 2 MHz 20 s,直流脉冲强度500 V 0.5 s时,融合率达0.31%。获得2株小鼠抗人VASN单克隆抗体(4H1和8B9),抗体最高效价为1∶256000,亲和力最高可达到4.9×10^(6)L/mol;2株抗体均可识别HepG2细胞的VASN蛋白。结论运用细胞电融合法成功制备2株小鼠抗人VASN的单克隆抗体。

以培养创新人才为目标的高等学校实验室管理改革

实验室作为高校的一个重要组成部分,是高校实验教学及学科建设的重要支撑,是培养创新人才的摇篮。实验室管理改革直接关系到高校教学质量和创新型人才培养水平。1实验室建设在创新人才培养中发挥的作用高校实验室是集教学、科研和社会服务的重要基地,它的建设和管理情况展现了高校的办学水平、科研实力及产品开发的能力。20世纪80年代制定的实验室管理体制适合专业性强.

高效电融合法制备抗牛γ-干扰素单克隆抗体

目的为了获得高特异性牛γ-干扰素单克隆抗体。方法采用工程菌BL21(DE3)/p ET28aHis-BoIFN-γ表达的目的蛋白BoIFN-γ免疫小鼠,优化电融合条件,制备抗BoIFN-γ单克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法鉴定单克隆抗体特异性。结果在裂解大肠杆菌液的上清液中目的蛋白BoIFN-γ高表达。脾脏淋巴结细胞与SP2/0细胞比例3∶1,单次融合细胞数3×10;个,交变电场电压40 V,直流脉冲电压500 V时,细胞融合率可达0.41%。而PEG法的细胞融合率为0.07%。获得3株抗BoIFN-γ单克隆抗体杂交瘤细胞株(2E9、3F7、5B7),2E9和5B7的亚类为IgG2a,3F7亚类为IgG2b。抗体最高效价为1∶25600,3株单抗均可识别标准BoIFN-γ蛋白,其中3F7亲和力最高。结论说明细胞高效电融合法的细胞融合率显著高于PEG化学诱导法。电融合法制备的单克隆抗体效价高、特异性强、敏感度高。

基于电融合方法的牛妊娠相关糖蛋白单克隆抗体制备及其应用

为了制备抗牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)单克隆抗体,本试验提纯妊娠母牛子叶bPAG,免疫小鼠后进行细胞电融合,通过ELISA、Western blot方法对抗bPAG单克隆抗体进行筛选。结果显示:获得5株bPAG特异性强、灵敏度高的单克隆抗体,抗体最高效价为1∶256000,亲和力最高可达到3.75×10^(7) L/mol,5株单克隆抗体均能识别天然bPAG蛋白。采用高碘酸钠法对单抗标记辣根过氧化物酶(HRP),将最佳配对抗体用于建立双抗夹心ELISA方法,对64个血清样本进行检测。结果显示:以10H2作为捕获抗体与HRP-5G1配对建立的双抗夹心ELISA方法检测bPAG阳性和阴性血清样本,与爱德士牛早孕检测试剂盒比较符合率达95.2%。结果表明,本试验运用细胞电融合法制备的抗bPAG单克隆抗体可应用于建立双抗夹心ELISA体系,为下一步bPAG检测试剂盒的研制提供技术支持。

新型醛糖还原酶抑制1-乙酰基-1H-吲哚-3-乙酸酯的合成及其抑制活性

醛糖还原酶抑制剂(ARIs)抑制多元醇途径的醛糖还原酶是治疗糖尿病并发症的重要策略。以2-氯苯甲酸为起始原料,在碱性条件下经铜催化,与甘氨酸反应生成氯代邻羧基苯基甘氨酸,再与乙酸酐反应,生成N-乙酰基邻羧基苯甲酸。然后在吡啶催化下合环,生成1-乙酰基-^(1)H-吲哚-3-乙酸酯(AIA),总收率为79.0%,纯度为99.0%。通过^(1)H NMR、^(13)C NMR和MS(ESI)对其结构进行表征,并对该化合物的的醛糖还原酶抑制活性进行测定,IC 50=9.4×10^(-2)μM。

miRNA-200b在糖尿病小鼠海马体中的异常表达及靶基因预测

目的分析糖尿病小鼠海马体miRNA-200b表达情况,并预测miRNA-200b靶基因。方法采用链脲佐菌素或联合高糖高脂饮食分别诱导1型和2型糖尿病小鼠模型,建模后处死小鼠,分离海马体组织,利用荧光定量PCR测定miRNA-200b表达量。通过miRWalk、miRDB和miRPathDB三个基因数据库预测miRNA-200b靶基因,进行GO分析和KEGG分析。结果成功建立糖尿病小鼠模型。糖尿病小鼠海马体中miRNA-200b表达量比正常小鼠下降(P<0.05)。生物信息学预测显示,miRNA-200b筛选到3个靶基因,分别是GAB1、SLC5A3和GICCL1,靶基因功能富集于糖代谢、脑部神经营养等信号通路。结论miRNA-200b在糖尿病小鼠海马体中显著下降,有望成为糖尿病治疗的新靶点。

2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮对映异构体手性拆分及光学纯度的测定

以表面涂覆纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性硅胶为固定相,以V(正己烷)∶V(异丙醇)=95∶5的溶剂为流动相,拆分对映异构体2-氧杂双环[3,3,0]辛-6-烯-3-酮.流速为0.8mL/min,柱温25℃,检测波长205nm.结果表明:该条件下对映异构体的分离度为3.0,能有效拆分,用面积归一化方法可确定光学纯度.

奶牛早期妊娠诊断及妊娠相关糖蛋白(PAG)ELISA检测技术进展

奶牛配种后,及时且准确了解奶牛的妊娠状况至关重要。奶牛早期妊娠诊断可显著缩短平均育种间隔,提高奶牛养殖效率。随着早期妊娠诊断技术不断发展,检测牛妊娠相关糖蛋白(PAG)逐渐被人们重视,尤其是酶联免疫吸附试验(ELISA)得到更多的开发与利用。目前国外已有PAG ELISA牛妊娠检测试剂盒用于检测怀孕早期PAGs,该方法快速、准确、灵敏,而国内现存的试纸条准确率低。本文综述了传统的奶牛早期妊娠诊断方法和PAG ELISA方法的发展现状,对ELISA检测方法在动物繁殖领域的应用进行展望。

牛妊娠相关糖蛋白10的制备及其生物信息学分析

目的重组表达牛妊娠相关糖蛋白10(bovin pregnancy associated glycoproteins 10,BoPAG10),并对其结构和功能进行预测分析。方法通过密码子优化并合成BoPAG10基因,构建pcDNA3.1-BoPAG10重组表达载体,并瞬转至293F细胞中,采用Ni-NTA亲和层析对表达产物进行分离纯化,通过SDS-PAGE和Western blot检测表达效果,利用生物信息学软件对BoPAG10基因编码蛋白进行结构和功能预测。结果PCR和双酶切鉴定BoPAG10基因为1173 bp,成功表达BoPAG10重组蛋白,大小为48 kDa的,含量质量分数为91%。BoPAG10蛋白N端29个氨基酸为信号肽,7个糖基化位点和11个B细胞抗原表位。结论本研究作者成功表达并纯化出BoPAG10蛋白,为BoPAG10蛋白的结构和功能的研究以及抗BoPAG10单克隆抗体的制备奠定基础。

牛妊娠相关糖蛋白的研究进展

妊娠相关糖蛋白(pregnancy associated glycoprotein,PAG)是由反刍动物胎盘表达的一种天冬氨酸蛋白酶家族,在反刍动物滋养外胚层的单核和双核细胞中合成。在牛科动物中,PAG家族蛋白种类较多。PAG家族各蛋白成员在分子质量、氨基酸序列和生理功能等方面有一定差别,还需要大量的科学研究来揭示这些蛋白质的功能和作用。PAGs在奶牛妊娠过程中发挥了重要作用,可以作为检测奶牛妊娠及诊断妊娠丢失的标志物,同时还可以作为监测胎盘功能的指标。笔者综述了PAG家族的起源、在牛体内的生物学功能及在牛妊娠监测中的应用,旨在为奶牛早期妊娠诊断研究提供理论参考。