超声介导微泡造影剂在临床诊断及治疗中的作用

超声介导靶向微泡造影属于＂超声分子影像学＂的范畴,是指将微泡造影剂通过血管途径进入靶组织,应用超声造影技术来观察靶区在组织水平、细胞及亚细胞水平的成像,借以反映病变区组织在分子基础方面的变化。特异性靶向超声微泡表面携带有对靶分子具有特异识别能力的分子探针（单克隆抗体或其他配体）,

应用低浓度长春新碱分离并鉴定MG-63细胞系中的骨肉瘤干细胞

目的分离并鉴定人成骨肉瘤细胞系MG-63中的骨肉瘤类肿瘤干细胞。方法通过无血清培养基加入低浓度长春新碱的方法悬浮培养成骨肉瘤细胞球来进行分离和类干细胞富集。后行细胞形态学观察、细胞球免疫荧光染色、RT-PCR、流式细胞仪鉴定细胞表面标志物,成骨、成脂肪诱导及裸鼠成瘤的一系列鉴定试验。结果悬浮培养得到肉瘤细胞球,可持续传代细胞亚系"MG-63-M",多能干细胞、胚胎干细胞标志物及多药耐药基因表达均为阳性。具有很强的自我更新及多项分化能力。结论MG-63细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的骨肉瘤干细胞,而采用神经干细胞培养基中添加低浓度长春新碱是从骨肉瘤细胞系中分离培养出骨肉瘤干细胞的有效办法。

Cofilin在肿瘤中作用的研究进展

丝切蛋白（Cofilin）是一种低分子量（21KD）的肌动蛋白结合蛋白，普遍存在于真核生物中。Cofilin的活性受多种因素的调节而发挥着不同的作用，近年来关于cofilin在恶性肿瘤中的表达作用受到了很大的关注，肿瘤细胞中Cofilin表达异常，与肌动蛋白形成复合物改变细胞的正常功能。

逆转录病毒介导的靶向人Slingshot-1L基因的稳定转染细胞系的建立

目的应用Slingshot(SSH)-1L重组逆转录病毒载体,建立过表达该基因的稳定转染细胞系。方法用脂质体法将含SSH-1L的重组逆转录病毒载体pLNCX-SSH-1L转染PA317包装细胞,G418筛选,滴度测定。收集病毒上清感染MG63细胞,G418筛选。结果应用pLNCX-Slingshot-1L重组逆转录病毒载体,获得滴度为5×108 CFU/L的病毒上清,感染MG63细胞,获得了过表达SSH-1L基因的MG63细胞。结论应用SSH-1L重组逆转录病毒载体,成功建立了过表达该基因的稳定细胞系。

逆转录病毒介导的靶向人Slingshot-1L基因稳定转染人骨髓间充质干细胞系的建立

目的建立过表达该基因的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)稳定转染细胞系。方法采用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离、纯化hMSCs。应用脂质体法将Slingshot-1L重组逆转录病毒载体pLNCX-Slingshot-1L转染PA317包装细胞,G418筛选,滴度测定。收集病毒上清感染第2代hMSCs,G418筛选,挑选阳性克隆,扩增培养。结果采用密度梯度离心法联合贴壁培养法成功分离、纯化了hMSCs,应用pLNCX-Slingshot-1L重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,获得滴度为5×108CFU/L的病毒上清。收集病毒上清感染hMSCs,获得了过表达Slingshot-1L基因的hMSCs。结论应用Slingshot-1L重组逆转录病毒载体,成功建立了过表达该基因的hMSCs稳定转染细胞系。

肿瘤多药耐药机制及其相关信号通路的研究进展

临床肿瘤治疗中化疗药物的应用在一定程度上抑制了肿瘤的生长，复发和转移，但近年来，肿瘤多药耐药的产生严重影响了化疗对肿瘤的疗效。多药耐药（multidrugresist-ance，MDR）由一种抗肿瘤药物诱发，同时产生对多种结构和作用机制不同的药物敏感性减弱，导致化疗失败。MDR产生机制主要包括以下方面。

LIMK1与恶性肿瘤的研究现状

LIMKl是LIM激酶（LIMkinase，LIMK）蛋白家族两大成员之一，生理功能主要是把Cofilin磷酸化使它成为失活的pCofilin，进而参与细胞肌动蛋白骨架的重新组合，体内有很多种机制调控着LIMKl的活化，活化的LIMKl起着桥梁的作用，是连接细胞外刺激与细胞骨架稳定性的纽带[1]。

钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ调控SSH-1L活性的作用

目的探讨钙(Ca2+)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含Myc-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经不同浓度的钙离子载体A23187诱导10min,蛋白印迹实验,观察P-cofilin、P-SSH1L、P-CaMKⅡ水平的变化;体内及体外实验检测CaMKⅡ对SSH-1L的磷酸化及活性调控作用。结果当A23187浓度为1μmol/L时CaMKⅡ活性达到了最大,同时此浓度下P-cofilin水平以及SSH-1L的978位点丝氨酸的磷酸化水平升高。体外实验证实CaMKⅡ可使SSH-1L(WT)磷酸化,但是对其突变体SSH-1L(2SA)无作用;同时CaMKⅡ明显抑制了SSH1L(WT)的活性,但对SSH-1L(2SA)的活性无作用。结论CaMKⅡ对SSH-1L的活性具有明显调控作用,且与SSH-1L的丝氨酸位点密切相关。

钙调素蛋白磷酸酶对Slingshot-1L的调控作用

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶(Calcinenurin/PP2B/CnA/Cn)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含YFP-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经钙离子载体A23187诱导10min,进行免疫细胞化学染色,观察细胞形态变化;体内及体外实验检测PP3B对SSH-1L的活性调控作用;应用免疫共沉实验检测PP2B与SSH-1L的相互结合情况。结果Ca2+信号诱导骨肉瘤细胞形成伪叶,同时SSH-1L与F-actin移位共聚集至细胞膜伪叶,但是被PP2B有效抑制剂Cypermethrin完全阻断;在体外,SSH-1L磷酸酶活性测定实验以及SSH-1L与PP2B结合实验证实SSH-1L与PP2B在细胞内是一对相互结合的蛋白质,同时PP2B具有促进SSH-1L酶活性的作用。结论PP2B通路对细胞伪叶的形成及细胞运动具有重要调控作用,同时对SSH-1L酶具有促进其活性的作用。