新教育部重点实验室评估指标体系浅析

本文介绍了《教育部重点实验室评估指标体系》对教育部重点室发展所起到的作用,阐述了新版《教育部重点实验室评估指标体系》的主要变化的同时初步分析教育部重点实验室发展的方向。

分子对接和动力学模拟提高嗜热蛋白酶PhpI的活力

通过分子对接和动力学模拟对嗜热蛋白酶的分子进行改造,确定蛋白酶PH1704(PhpI)定点突变残基,并通过分子生物学实验进行验证.突变体K43C的蛋白酶活力提高了5.8倍.分子动力学模拟结果表明,经过8 ns的动力学模拟后,K43C突变体二级结构由野生型的S2片层(F11-E12-D13)变成环状结构.E12和K43均是活性位点的重要残基,这种变化将导致活性位点的柔性增强,有利于催化反应的发生.

人类细胞色素P450 2E1酶在不同乙醇浓度下构象变化的分子动力学模拟（英文）

细胞色素P450(CYP)2E1家族酶是一种具有双重功能的单加氧酶,能够参与市场上6%药物的代谢而具有重要的作用.这类酶与酒精的消耗、糖尿病、肥胖症以及厌食症等密切相关,引起了广泛的研究兴趣.目前尚未见从原子水平上对这种酶在不同乙醇浓度下构象行为的研究.基于此,本文研究了花生四烯酸(AA)与CYP2E1复合物结构在不同乙醇浓度下构象与能量变化的特点.对于在不同乙醇浓度下AA与CYP2E1的复合物结构,采用分子动力学模拟结合自由能计算的方法进行研究.分子动力学模拟结果表明,His109和Lys243氨基酸残基对AA与CYP2E1的结合起到了至关重要的作用.当体系的乙醇浓度较高时,AA的结合能力有所下降,这种结合能力的下降是由于AA与CYP2E1之间氢键相互作用力的减弱所致.本研究对于AA与CYP2E1复合物结构在不同乙醇浓度下,AA分子与CYP2E1分子结合能力下降以及CYP2E1的构象变化给出了详细的解释.本研究工作得到的结论对于实验和理论研究均有重要意义,可为后续细胞色素P450酶类催化活性的研究提供理论支持.

基于拉伸分子动力学模拟的黄嘌呤氧化酶抑制剂解离途径的理论研究

采用拉伸分子动力学模拟的方法研究了黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XO)抑制剂别嘌呤醇(Allopuri⁃nol)和葛根素(Puerarin)从XO离去通道解离的动态过程.分子对接结果表明,别嘌呤醇和葛根素均结合在XO的钼蝶呤中心(Molybdopterin,Mo-pt);丙氨酸扫描的结果显示,Val789,Arg880,Phe911,Phe914和Val1081在XO与抑制剂的结合中起到非常重要的作用.拉伸分子动力学模拟结果显示,相比于葛根素,别嘌呤醇需要更大的外力和更长的时间才能从XO中解离,拉伸过程中Arg880,Phe1009,Thr1010,Val1011和Ala1079均对维持2种复合物的结构稳定起到重要作用,Phe649和Phe1013在抑制剂解离过程中起到门控的作用,His875起到阻碍抑制剂解离的作用.

大豆蛋白的小分子酶解产物抗氧化活性研究

以低温冷轧豆粕为原料、大豆分离蛋白为反应底物,进行酶水解反应,酶解产物经离子交换层析,凝胶排阻层析等方法分离,获得了平均分子量为800 D的小分子活性肽(SBP),用邻苯三酚自氧化法测定其抗氧化性。结果表明:此类小分子活性肽对邻苯三酚(PR)自氧化具有较好的抑制作用(1 mg/mL SBP的抑制率为33.3%)。与谷胱甘肽(GSH)进行比较,二者具有相似的抗氧化活性。

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的小分子模拟物2-TeCD保护线粒体抵抗氧化损伤

首次合成了一个新的含碲化合物 2 TeCD(二碲桥联环糊精 ) ,并证实其具有谷胱甘肽过氧化物酶 (GPX)活力 ,能清除氢过氧化物 .与其它GPX模拟物相比 ,2 TeCD具有分子量小 ,水溶性好及良好的化学和生物学稳定性 ,且其GPX活力比另一种被广泛认知的小分子模拟物Ebselen高约 4 6倍 .用Fe2 + Vc诱导的线粒体损伤体系研究了 2 TeCD的抗氧化性质 ,结果发现在相同剂量下 2

制半夏抑制基质金属蛋白酶活性及抗肿瘤机理的实验研究

目的研究制半夏对基质金属蛋白酶-16(MMP-16)活性的抑制作用。方法根据抑制MMPs活性后底物降解速率降低的原理,通过检测底物降解速率,测定中药制半夏对MMP-16的抑制作用。结果与空白对照组及阳性对照组相比,制半夏具有较强的抑制MMP-16活性的作用,其抑制活性IC50=23μg/m l。结论半夏水煎剂在体外具有抑制MMP-16活性的作用,其抑制活性较强,且存在剂量依赖关系。

无花果蛋白酶与木瓜蛋白酶酶学性质的比较

比较了无花果蛋白酶和木瓜蛋白酶的部分酶学性质,二者均为巯基蛋白酶类,且水解底物相似.实验结果表明,无花果蛋白酶比木瓜蛋白酶的适用性更广,两者在反应温度范围上各有优点,无花果蛋白酶的适宜pH值范围大于木瓜蛋白酶的适宜pH值范围;在对底物的亲合性上,无花果蛋白酶明显高于木瓜蛋白酶.

四君子汤对D-gal衰老模型小鼠学习记忆能力及脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和端粒酶活性的影响

目的研究四君子汤(SJ)对D半乳糖(D-gal)衰老模型小鼠学习记忆能力及脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和端粒酶的调节作用。方法采用10%D-gal颈背部皮下注射,每日1次,连续6 w,建立衰老小鼠模型。同时按高、中、低三个剂量组分别喂饲四君子汤,正常对照组和模型组喂饲同体积的蒸馏水。跳台法检测学习记忆能力,MTT法检测脑组织SOD活性,PCR-ELISA法检测脑组织端粒酶活性。结果D-gal衰老模型小鼠在跳台试验中呆在安全区的时间(Ts)明显缩短,错误次数(Ne)明显增加(P<0.01),四君子汤能明显延长Ts,减少Ne(P<0.01);D-gal衰老模型小鼠脑组织SOD活性明显下降(P<0.01),四君子汤能明显提高D-gal衰老模型小鼠脑组织SOD(P<0.01);D-gal衰老模型小鼠脑组织端粒酶活性无明显变化,四君子汤能明显提高D-gal衰老模型小鼠脑组织端粒酶活性(P<0.01)。结论四君子汤能提高D-gal衰老模型小鼠的学习记忆能力,对脑老化有一定的预防作用,其作用机制可能与增强脑组织SOD和端粒酶活性有关。

嗜热蛋白酶PH1704别构中心量子化学计算与突变体动力学

通过量子化学计算，确定嗜热菌PyrococcushorikoshiiOT3的PHl704蛋白酶别构位点的关键残基为Argll3，Tyrl20和Asnl29．其中，Argll3及Asnl29与别构抑制剂结合，参与别构调控．Tyrl20残基位于亚基交界面附近，并与亲核残基Cys100之间以氢键相连，可通过影响亚基聚合来影响酶的亲核催化．DJ-1超家族的4种构建蛋白的结构显示，120位点位于亚基交界面处，影响亚基的聚合，进而影响蛋白酶的活力，并间接参与别构调控．分子生物学实验显示，突变体R113T／Y120P／N129D的kcat/km（L·μmol^-1·min^-1）值是野生型kcat/km。值的6倍，h系数由野生型的0．86转变为1．3，负协同效应消失．113和129位点处阴离子别构剂脱离，从而破坏113，120和129位点间的封闭环结构，使AC交界面胡螺旋（124～129，524—529）间聚合度增强；120位点残基由rryr转变为Pro，与Cys100间氢键断裂，亲核进攻的阻力减小，从而使酶活力提高，别构负调控消失．

丁酸环氧丙酯的化学合成与酶法拆分

利用化学方法 ,由外消旋环氧氯丙烷出发 ,合成丁酸环氧丙酯 ,精制后可获得纯度96%以上的丁酸环氧丙酯 ,收率为 47% .利用猪胰脂肪酶进行不对称酯水解反应 ,可获得光学纯度为 93 .3 % ( ee值 )以上的

生物化学实验教学课程化体系与方法的改革探索

生物化学实验课程是高等学校生物学及相关专业学生的必修实验课程。本文根据生物化学实验教学课程化的特点,结合工作实践,在生物化学实验教学体系与方法等方面进行了改革探索,制定了切实可行的有效措施,提高了生物化学实验教学的质量,培养了学生的动手能力和科学实践能力。

乙酰肉碱的化学合成与酶法拆分

采用化学方法以肉碱为底物,合成了外消旋乙酰肉碱,精制后可获得纯度99%以上的乙酰肉碱,收率为96%.利用蜗牛酶(SnailEnzyme)对其进行不对称酯水解反应,发现蜗牛酶对乙酰肉碱具有高度立体选择性,并且可得到光学纯度为98%的乙酰-L-肉碱.

重组嗜热脂肪酶工程菌发酵工艺的研究

目的研究重组嗜热脂肪酶表达菌株E.coli BL21(DE3)的生长条件及产物表达规律.方法在发酵过程中,采用补加葡萄糖和蛋白胨,控制pH、溶氧值和温度的方法.结果最终发酵液在600nm的光密度值达到54,发酵液细菌湿重达96g/L,脂肪酶活性达到6.8×105U/L.结论确定了工程菌培养的最佳条件,提高了目的蛋白和菌体的收获量.

生物化学综合实验教学改革的初探

生物化学实验教学是生物化学教育的重要组成部分,在培养高素质、高能力人才的过程中起到至关重要的作用。紧跟学科发展进程、根据生物化学实验教学特点、按照自主创新型学生培养要求,对生物化学实验内容进行整合与调整,重点强调培养具有广阔科研视野、立体化思维的创新型科研人才,提高学生的综合科研能力,拓展学生的科研视野,激发学生的科研兴趣。

酶化学修饰的研究进展

化学修饰已成为改进酶理化性质和生物活性的有效方法 ,引起了人们高度的重视 .本文主要介绍酶化学修饰的目的、意义、方法 ,以及修饰剂的选择、种类 ,评述了酶化学修饰领域的主要进展。

新时代高校科研实验室安全管理新理念

近年来,高校实验室安全问题逐渐凸显,针对高校实验室安全管理的研究大都将科研实验室和教学实验室放在一起讨论,而事实上,相对于教学实验室,科研实验室在实验室安全管理层面上有很大区别。辨析了科研实验室和教学实验室在实验室安全层面上的差异,为有针对性的开展实验室安全工作提供理论基础并提出新的差异化的解决对策。

应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬（ＧＰＸ）活性的含硒单链抗体酶。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ方 法从杂交瘤细胞株２Ｆ３中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经ＤＮＡ序列测定后，构建成表达载体 ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ，经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变，得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ分别转 化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）和 ＢＬ２１（ｃｏｄｅｎ ｐｌｕｓ），表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的５％－１０％、１５％－ ２０％和 ２５％－３０％。该重组蛋白以包涵体形式存在，相对分子质量为３００００。其 ＧＰＸ活性为３４００Ｕ／μｍｏｌ，接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。

嗜热酯酶EstTs1的远源三维结构模建及分子对接

利用Phyre网络服务器,构建嗜热酯酶EstTs1的三维结构,并通过分子动力学优化构型,得到了可靠的构型.分子对接研究表明,p-硝基苯基丁酸酯是EstTs1的最适底物,其大小正适合EstTs1的活性口袋.Thr111是底物与酶结合的重要残基,与底物形成了氢键;Ser85是重要的催化残基.

磷酸三酯酶的同源模建及分子对接理论

利用同源模建和分子动力学模拟方法模建了来源于Thermaerobacter marianensis的磷酸三酯酶样内酯酶(PLLs)三维结构.通过与不同底物的对接可知,Arg44与两种底物(磷酸三酯和内酯)均形成氢键,从而Arg44是两种底物与酶结合时重要的氨基酸残基.