miR-126过表达和ADAM9基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)过表达和解整联蛋白金属蛋白酶9(ADAM9)基因沉默对胃癌细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人胃低分化腺癌SGC-7901细胞和人正常胃黏膜上皮NGEC细胞,提取细胞中总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2种细胞中miR-126和ADAM9 mRNA表达水平。将处于对数生长期的SGC-7901细胞分为miR-126过表达组(miR-126-OE组)和ADAM9基因沉默组(ADAM9 siRNA组),以LipofectamineTM 2000为载体分别转染miR-126模拟物(miR-126 mimics)和敲低ADAM9的RNA寡核苷酸,并设置相应的阴性对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平。TargerScan网站预测miR-126的靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-126和ADAM9的靶向调控关系,采用RT-qPCR法和Western blotting法检测转染miR-126 mimics后SGC-7901细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法检测,与人正常胃黏膜上皮NGEC细胞比较,胃癌SGC-7901细胞中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),而ADAM9mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。MTT法检测,SGC-7901细胞过表达miR-126或沉默ADAM9基因48和72 h后,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验检测,与相应阴性对照组比较,48 h后miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞迁移率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与相应阴性对照组比较,miR-126-OE组和ADAM9 siRNA组细胞中E-钙黏蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),而N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。靶基因预测,ADAM9的3´-UTR含有与miR-126-3p互补的核苷酸序列。双荧光素酶报告基因实验,ADAM9是miR-126靶向负调控的下游基因。SGC-7901细胞转染miR-126 mimics 48 h后,与mimics NC组比较,miR-126 OE组细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:胃癌SGC-7901细胞中miR-126低表达而ADAM9基因高表达。miR-126过表达可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,其机制可能与miR-126靶向负调控ADAM9并抑制胃癌细胞的上皮-间质转化(EMT)进程有关。

下调HMGB2表达对肝癌LM3细胞上皮-间质转化的抑制作用及其AKT/mTOR信号通路机制

目的:探讨下调肝癌细胞中高迁移率族框蛋白2 (HMGB2)表达对肝癌细胞生物学行为及上皮-间质转化(EMT)进程的影响,并阐明其作用机制。方法:对数生长期的人肝癌LM3细胞分为阴性对照组和HMGB2 RNA干扰组(HMGB2 siRNA组),分别以Lipofectamin 2000为载体转染无关序列的RNA寡核苷酸(RNA oligo)和敲除HMGB2序列的RNA oligo。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平,分别采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力,采用Western blotting法检测2组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、 N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,HMGB2 siRNA组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),HMGB2 siRNA组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin、Vimentin、mTOR、AKT和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:下调HMGB2的表达可降低肝癌LM3细胞迁移和侵袭能力并抑制EMT,其作用机制可能与参与调节AKT/mTOR通路相关蛋白表达有关。

人胃癌组织中微小RNA-126和解整合素-金属蛋白酶9的表达及其与临床病理参数的相关性

目的分析人胃癌组织中微小RNA-126(miR-126)及解整合素-金属蛋白酶9(ADAM9)的表达及其与临床病理参数的相关性,探讨二者与胃癌发生发展的关系。方法收集2020年1月至2022年9月吉林省人民医院收治并经临床和病理组织学确诊为胃腺癌的46例患者手术切除的癌组织及距离癌组织3~5 cm的癌旁组织。采用荧光定量聚合酶链反应法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-126及ADAM9 mRNA的表达,免疫组织化学法检测ADAM9蛋白的表达。记录患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、肿瘤分期及转移等基本信息,分析miR-126及ADAM9的表达与胃癌患者临床病理参数的相关性。结果胃癌组织中miR-126 mRNA的相对表达量显著低于癌旁组织[(0.53±0.24)比(1.00±0.00)](t=-8.613,P<0.001),ADAM9 mRNA的相对表达量显著高于癌旁组织[(1.43±0.56)比(1.00±0.00)](t=3.412,P=0.002)。ADAM9在胃癌组织中的阳性率显著高于癌旁组织[73.9%(34/46)比15.2%(7/46)],差异有统计学意义(χ^(2)=29.723,P<0.001)。胃癌组织中miR-126的表达水平与患者肿瘤分化程度、TNM分期以及远处转移有关(均P<0.05)。胃癌组织中ADAM9的表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(均P<0.05)。结论胃癌组织中miR-126的表达水平下调,ADAM9表达上调,二者之间可能存在负调节作用,且与胃癌的进展及转移关系密切。

RNAi抑制高迁移率族蛋白B2表达对人肝癌细胞HepG2迁移及侵袭能力的影响及机制

目的采用RNA干扰技术下调肝癌细胞中高迁移率族蛋白B2(HMGB2)的表达,观察其对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,分为HMGB2 RNA干扰组(HMGB2 siRNA)及阴性对照组(NC),分别以脂质体2000为载体,转染敲除HMGB2序列的RNA寡核苷酸(RNA oligo)及RNA干扰无关序列。采用RT-qPCR及Western blot法检测细胞中HMGB2 mRNA及蛋白表达水平以验证干扰效果;采用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测敲低HMGB2对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot法检测敲低HMGB2对HepG2细胞EMT相关蛋白表达的影响。结果HMGB2 siRNA组细胞HMGB2 mRNA及蛋白表达水平低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),表明RNA干扰成功;细胞划痕及Transwell侵袭实验结果显示,HMGB2 siRNA组细胞愈合率及侵入小室的细胞数量少于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),表明下调HMGB2表达可降低HepG2细胞的迁移及侵袭能力;Western blot结果显示,HMGB2 siRNA组HepG2细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平低于NC组,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调HMGB2表达可抑制肝癌细胞的上皮间质转化进程,进而降低其迁移及侵袭能力。

双氢青蒿素通过抑制HMGB2表达及逆转EMT进程抑制肝癌细胞生长及侵袭

目的:观察双氢青蒿素(DHA)对体外生长的肝癌细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人肝癌细胞HepG2和LM3,采用不同浓度DHA处理,设立不加药的阴性对照组并以顺铂作为阳性对照。MTT、流式细胞术分别检测DHA对肝癌细胞增殖及凋亡的影响;划痕实验、Transwell实验分别观察DHA对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测DHA对肝癌细胞凋亡相关蛋白、HMGB2及EMT相关蛋白表达的影响。结果:与阴性对照组相比,DHA处理后的肝癌细胞存活率降低、凋亡率提高,迁移及侵袭能力降低(P<0.05),HMGB2蛋白表达显著降低,凋亡相关蛋白Cleavedcaspase3、Bax表达显著增加,Bcl-2表达显著减少,EMT相关蛋白E-cadherin表达显著增加,N-cadherin、Vimentin表达显著减少(P<0.05)。结论:DHA可抑制肝癌细胞生长,促进其凋亡,降低其迁移及侵袭能力,其机制可能为DHA通过降低HMGB2表达抑制肝癌细胞EMT进程。