15-HETE对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响(英文)

用肺动脉环和全细胞膜片钳技术研究15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响。新出生的幼兔分两组,一组放入吸氧分数为0.12 的低氧舱内;另一组保持正常氧环境。9 d 后, 称重、取肺动脉进行细胞培养并制作肺动脉环。分别加入4-氨基吡啶(4-aminopyridione, 4-AP)、四乙胺(tetraethylammonium, TEA)、glyburide(GLYB)三种特异性钾离子通道阻断剂, 观察15-HETE 对兔肺动脉平滑肌钾离子通道的作用变化,同时采用全细胞膜片钳测定钾电流。结果显示: 5 mmol/L 4-AP 阻断KV通道后可以抑制15-HETE 诱导的缺氧兔肺动脉收缩;TEA和GLYB 分别阻断大电导型钙激活钾通道(BKCa)和KATP通道后并不影响15-HETE诱导的缺氧兔肺动脉收缩; 15-HETE可降低兔肺动脉平滑肌细胞钾电流幅度。上述结果提示: 缺氧兔肺动脉中,15-HETE阻断电压依赖钾通道(KV通道), 引起膜去极化, 可能是缺氧性肺血管收缩的机制之一。

花生四烯酸及其3种代谢产物对兔肺动脉环作用的比较

目的通过比较花生四烯酸(AA)及其3种代谢产物:15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)、8(S),15(S)-二羟基二十碳四烯酸〔8(S),15(S)-D iHETE〕、15-酮基二十碳四烯酸(15-KETE)对缺氧组与正常组幼兔的肺动脉环张力的影响,以探讨AA及其3种代谢产物在缺氧性肺动脉高压形成中的作用。方法12只新生幼兔随机分为两组(n=6),一组置于正常的培养箱中,其吸入氧(F iO2)浓度为0.21,作为正常组;一组置于缺氧的培养箱中,吸入氧(F iO2)浓度为0.10,作为缺氧组。9 d后将两组幼兔处死,采用组织浴槽血管环法观察AA、8(S),15(S)-D iHETE、15-HETE、15-KETE对正常和缺氧幼兔肺动脉收缩的影响。结果①AA、8(S),15(S)-D iHETE、15-HETE、15-KETE以浓度依赖方式收缩正常组幼兔肺动脉环,其中15-KETE和15(S)-D iHETE收缩血管作用明显,而AA、15-HETE收缩血管作用不明显;②AA、15-KETE、15-HETE、8(S),15(S)-D iHETE使缺氧幼兔肺动脉环张力增加,AA、15-HETE使缺氧组幼兔肺动脉环张力较正常组增高;但缺氧肺动脉环对四种物质的反应力差异无显著性;③正常组幼兔肺动脉环对15-KETE的反应明显高于缺氧组。结论15-HETE的代谢产物8(S),15(S)-D i-HETE在缺氧性肺动脉高压形成中起一定的作用,而15-KETE可能不参与慢性缺氧导致的幼兔肺动脉的收缩过程。

甲醇对豚鼠单个心室肌细胞动作电位的影响

目的 研究甲醇对正常豚鼠心室肌细胞跨膜动作电位影响 ,旨在探讨甲醇对心肌细胞的电生理作用。方法 酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞 ,应用全细胞膜片钳技术记录甲醇对豚鼠单个心室肌细胞动作电位的影响。结果 应用 0 .2 %甲醇使豚鼠单个心室肌细胞动作电位复极 5 0 %时程 (APD50 )从给药前 (12 92 .6 8± 2 98.0 3)ms缩短到 (75 0 .2 5± 6 8.0 5 )ms (n =6 ,P <0 .0 5 ) ;动作电位复极 90 %时程 (APD90 )从给药前 (132 8.13± 2 89.91)ms缩短到(783.2 5± 6 3.4 4 )ms (n =6 ,P <0 .0 5 ) ;动作电位幅度 (APA)从给药前 (12 6 .35± 3.2 0 )mV减少到 (113.2 0± 6 .0 8)mV(n =6 ,P <0 .0 5 )。结论 甲醇降低动作电位幅度 ,缩短动作电位时程 ,影响心肌正常工作 ,可能与它对心肌细胞钾通道的作用有关。

米诺地尔醇质体中药物含量及包封率的测定

目的建立米诺地尔醇质体中药物含量及包封率的测定方法。方法采用低温超速离心法分离游离药物和醇质体,高效液相色谱(HPLC)法检测醇质体中游离药物含量和总药量,并计算包封率。结果米诺地尔在10.0～300.0μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9996),标准曲线为:A=25365C+28487;空白回收率在99.6%～101.0%之间。用此方法测定3批米诺地尔醇质体的包封率在61.1%～63.3%之间。结论该方法操作简单,结果准确,适合于米诺地尔醇质体的含量和包封率的测定。

骨髓间质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注凋亡蛋白Caspase-3的影响

目的研究静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对脑缺血再灌注模型大鼠神经功能及凋亡相关蛋白caspase-3的影响。方法体外培养及扩增MSCs后,用绿色荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记,通过静脉途径移植给大脑中动脉缺血2 h再灌注的SD大鼠,按不同时间点取材,荧光显微镜观察BMSCs在脑内的分布,免疫组织化学染色及RT-PCR检测大鼠脑内caspase-3蛋白表达情况。结果移植组在移植后第6天神经功能明显好于对照组(P<0.05)。移植组移植后3、12、24、48、72 h caspase 3免疫组化阳性目标面密度分别为(1.34±0.31)%、(3.98±0.67)%、(5.58±0.92)%、(4.65±0.69)%、(3.51±0.63)%,对照组分别为(2.09±0.19)%、(5.23±0.30)%、(6.89±0.57)%、(5.93±0.56)%、(4.39±0.57)%,移植组和对照组比较均(P<0.05)。6h及7 d移植组caspase 3阳性目标面密度分别为(2.81±0.35)%、(1.64±0.29)%,与对照组(3.92±0.44)%,(2.29±0.21)%比较差异显著(P<0.01)。移植组相应时间点caspase-3的表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.01);移植组大鼠缺血侧皮层的caspase-3 mRNA相对量明显低于对照组(P<0.01)。结论经静脉注射骨髓间充质干细胞可明显改善神经功能。其可能通过下调caspase-3表达方式对脑缺血再灌注损伤起保护作用。

卡维地洛对充血性心力衰竭患者血浆可溶性炎性细胞因子和氧化应激的影响

目的 探讨卡维地洛的抗氧化、抗炎症、抗免疫、抗凋亡作用。方法 6 0例充血性心力衰竭 (CHF)患者都接受心力衰竭的常规治疗 (强心剂、利尿剂和ACEI) ,有心绞痛或心肌缺血者亦需应用硝酸酯类药物治疗。卡维地洛组加用卡维地洛。治疗前及治疗后 8、12周检测患者的血浆TNF -α、可溶性sFas和可溶性sICAM - 1、一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)水平及心功能检查。结果 卡维地洛组能显著降低TNF -α水平 ,而常规治疗组无明显变化。sFas、NO、MDA治疗前后均有显著降低(P <0 .0 5 ) ,但卡维地洛组sFas、NO、MDA的降低程度明显优于常规治疗组。结论 卡维地洛具有抗氧化、抗炎症、抗免疫、抗凋亡作用 。

15-KETE对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞钾离子通道的作用

目的观察15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetraenoic acid,15-KETE)对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth cells,PASMCs)膜电压门控钾离子通道的活性的影响。方法将12只雄性SD大鼠随机分成对照组和缺氧组,每组6只。采用急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和弹性酶)获得SD大鼠单个PASMCs,应用全细胞膜片钳记录方法,研究15-KETE对两组大鼠膜电位(Em)、膜电容(Cm)、电压门控钾电流(IKv)的影响。结果 (1)慢性缺氧使大鼠PASMCs的Em显著去极化(P<0.05,n=6),明显地抑制了大鼠PASMCs的IKv(P<0.01,n=6),对大鼠PASMCs的Cm无影响;(2)较高浓度的15-KETE(1×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L)可使慢性缺氧大鼠PASMCs去极化;(3)15-KETE(1×10-8 mol/L～1×10-6 mol/L)可浓度依赖性地抑制慢性缺氧大鼠PASMCs的IKv;(4)较高浓度15-KETE(1×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L)对缺氧PASMCs IKV的平均阻抑率显著高于常氧PASMCs。结论缺氧未改变15-KETE引大鼠PASMCs去极化及浓度依赖抑止IKv的特性,且缺氧可能改变了PASMCs对15-KETE的敏感性。

白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉环的作用及其机制

目的用组织浴槽血管环技术研究白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉的作用及其机制。方法游离健康SD大鼠的肺内肺动脉，直径约为0．5～1．0mm，剪成长约3mm的血管环，观察不同剂量的白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉的作用，并探讨去除血管内皮、钾离子通道阻断剂、L-型钙离子通道阻断剂以及无钙Krebs液对白芷水煎剂对大鼠离体肺动脉作用的影响。结果①白芷水煎剂以浓度（0—1．0g/mL）依赖的方式收缩大鼠离体肺动脉环，但去除肺动脉环的内皮，白芷水煎剂收缩大鼠离体肺动脉环曲线明显右移；②10^-4mol／L4-氨基吡啶（4-amonopyridione，4-AP）可明显降低白芷水煎剂收缩离体肺动脉环的作用；③10^-2mol／L四乙胺（tetraethylammonium，TEA）和10^-6mol／L格列本脲（glyburide，GLYB）对白芷水煎剂收缩大鼠离体肺动脉环的作用无明显影响；④10^-6mol／L维拉帕米（verapamil）和无钙Kreb’s液显著降低白芷水煎剂引起的离体肺动脉环的收缩。结论白芷水煎剂可浓度依赖性收缩大鼠离体肺动脉环，其机制与血管内皮、Kv通道、细胞外液钙离子和L-型钙离子通道有关。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.2、Kv3.4表达的影响

目的从细胞分子水平研究电压门控型钾通道亚型Kv1.2、Kv3.4在15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid,15-KETE)致大鼠肺动脉收缩过程中的作用。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth cells,PASMCs),使用RT-PCR和Western blot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上Kv1.2、Kv3.4通道表达的影响。结果 (1)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv1.2通道mRNA及蛋白质的表达;(2)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv3.4通道mRNA及蛋白质的表达。结论 Kv1.2、Kv3.4通道参与由15-KETE引起的缺氧肺动脉收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)。

ERK1/2通路和血管内皮细胞在15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉收缩中的作用

目的用组织浴槽血管环技术研究细胞外信号调节激酶1/2(extracellular regulated protein kinases1/2,ERK1/2)通路和血管内皮细胞在15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉收缩中的作用。方法 16只体质量为(220±20)g清洁级Wistar大鼠随机分为2组(n=8),正常对照组置于正常环境中饲养(FiO2=21%),缺氧组置于缺氧的培养箱中饲养(FiO2=10%),连续饲养9 d后处死,游离直径约为0.5—1.0 mm肺内肺动脉(PA)。剪成3 mm长的动脉环,在组织浴槽内进行张力研究。比较在15-KETE给药前后肺动脉环张力变化;机械法去除动脉环内皮,比较内皮完整和去内皮后,15-KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;用ERK1/2上游激酶抑制剂U0126孵育肺动脉环,比较U0126孵育前后15-KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;机械法去除动脉环内皮,再比较U0126孵育前后15-KETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用。结果 1)15-KETE对缺氧大鼠肺动脉环有收缩作用,呈浓度一效应关系,与正常对照组比较差异显著(P<0.05);2)内皮完整和内皮去除的肺动脉环,15-KETE对其缩血管作用均受到抑制,但差异显著(P<0.05);3)内皮完整肺动脉环,在U0126孵育前后,15-KETE的缩血管作用均受到抑制,但差异显著(P<0.05);4)内皮去除的肺动脉环,U0126孵育前后,15-KETE的缩血管作用也受到抑制,差异显著(P<0.05)。结论 15-KETE可浓度依赖性地收缩缺氧大鼠肺动脉环;15-KETE引起缺氧肺动脉收缩可能与ERK1/2信号转导通路和血管内皮细胞有关,并且位于平滑肌的ERK1/2通路也参与15-KETE诱导缺氧大鼠肺动脉环的收缩。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.5、Kv2.1表达的影响

目的从细胞分子水平研究电压门控型钾通道亚型Kv1.5、Kv2.1在15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid,15-KETE)致大鼠肺动脉收缩过程中的作用。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth cells,PASMCs),使用RT-PCR和Western blot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上Kv1.5、Kv2.1通道表达的影响。结果 (1)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv1.5通道mRNA及蛋白质的表达;(2)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达。结论 Kv1.5、Kv2.1通道参与由15-KETE引起的缺氧肺动脉收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

目的探讨15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞内Ca2+的作用及其来源。方法以酶法(胶原酶Ⅰ型和弹性酶)分离培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,将细胞稀释所需密度(2×105个/mL),加样于6孔板中的盖玻片上,放入37℃孵箱中培养12 h,细胞贴壁后,取出6孔板中的盖玻片,放入特制的小槽内,D-Hanks液冲洗细胞3次,加入1×10-5mol/L的Flou-3/AM,置37℃孵箱中避光孵育约30 min,用D-Hanks液洗去细胞外残留染料,应用激光扫描共聚焦显微镜技术,测定了15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞游离钙离子浓度的影响。结果 1)15-KETE(1×10-8—1×10-6)mol/L可依赖性引起肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)增加;2)1×10-6mol/L维拉帕米(L-型钙离子通道阻断剂)和无钙离子细胞外液显著阻抑了1×10-6mol/L 15-KETE引起肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加。结论 15-KETE可引起大鼠肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加,并且此钙来源于细胞外液钙离子。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERK1/2活性的影响

目的从细胞分子水平上研究15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid,15-KETE)对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERK1/2的活性的影响。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth cells,PASMCs),使用Western blot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上ERK1/2活性的影响。结果 1)10-6mol/L 15-KETE作用从0.5 h到24 h与对照组(未加15-KETE)比较,对ERK1/2总量没有明显的影响。2)与对照组比较,15-KETE处理0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h明显增强p-ERK1/2(P<0.05)。3)与对照组比较,10-8、10-7和10-6mol/L 15-KETE明显增强p-ERK1/2(P<0.05),随15-KETE浓度增大,p-ERK1/2增多。4)与15-KETE作用比较,ERK1/2抑制剂PD98059 20μmol/L、50μmol/L和U0126 0.1μmol/L、1μmol/L均能抑制15-KETE对ERK1/2的活化(P<0.05),并且随着抑制剂浓度增大,抑制作用加强。结论 15-KETE对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞上的ERK1/2表达没有明显的影响,但能激活肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2,使其磷酸化,并呈时间-剂量依赖关系。ERK1/2通路的特异性抑制剂PD98059、U0126能抑制15-KETE对ERK1/2的磷酸化。

二氢槲皮素生物活性及作用机制最新研究进展

查阅近五年来国内外相关文献,对二氢槲皮素的生物活性和作用机制方面的最新研究进行了综述,为二氢槲皮素成为潜在的药用制剂提供理论支撑。应对二氢槲皮素的结构与生物活性有较深的了解,对其提取工艺进行改进,通过生物合成途径增加二氢槲皮素的原料供应,解决其大规模应用问题,为更好地研究、开发和利用二氢槲皮素提供参考依据。