黄芩煎剂益生菌发酵液有效成份的分析

为研究单菌株及多菌株发酵后的黄芩煎剂对黄芩活性成分及化学成分的影响,本实验分别利用植物乳杆菌单菌株及植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉3株益生菌分别对黄芩煎剂进行72 h液态发酵,最终获取单菌株和多菌株发酵液,再分别利用?KTAavant分子层析液相色谱和薄层色谱分别对各发酵样品成分种类和有效成分含量进行测定。分子层析色谱分析结果显示,经单菌株和多菌株发酵黄芩煎剂后,发酵液中各种化学成分的含量出现显著变化,与黄芩煎剂相比,发酵液中低分子量的化学组份含量明显增加,且多菌株发酵液中低分子量化学组份的含量显著高于单菌株植物乳杆菌发酵液(P<0.001)。薄层色谱分析结果显示,黄芩煎剂经单菌株和多菌株分别发酵后,黄芩煎剂中的活性成分均发生了明显变化,其中多菌株发酵液活性成分含量极显著高于黄芩标准对照药材(P<0.0001),多菌株发酵液活性成分含量极显著高于黄芩煎剂(P<0.0001),且多菌株发酵液中的有效成分含量极显著高于单菌株发酵液(P<0.0001)。本研究首次证实采用多菌株(植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉)发酵黄芩煎剂可以有效提高药液中的活性成分和化学成分含量,为进一步研究黄芩的药用价值提供了重要参考。

兽用生物制品的安全性问题与应对措施

安全性是兽用生物制品的重要课题之一,直接关系到畜牧业的发展和人民的身体健康。对此,必须更加注重预防,深入挖掘存在的安全问题,找到有效的解决办法,为兽用生物制品的安全提供充分的保障。在此基础上,本文分析了兽用生物制品存在的安全问题及对策。

替代抗生素益生菌的筛选及其抗鸡沙门氏菌感染的研究

为筛选能够替代抗生素的益生菌并评估其抗鸡沙门氏菌感染的应用效果,本研究先通过琼脂平板法以标准致病性大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌及金黄色葡萄球菌作为指示菌,从15株候选益生菌中筛选具有较强抗菌活性的候选菌株;再以临床分离的10株致病菌为指示菌,通过琼脂平板法从上述5株候选益生菌中筛选抗菌活性最强的益生菌。筛选结果显示,有5株益生菌的抗菌活性较强,分别为L.C332、E.C329、L.C314、L.C311、L.C308,其中唾液乳杆菌L.C332株的抗菌活性最强。将SPF鸡随机分为3组,益生菌组鸡每日饲喂1×10^(9)cfu的L.C332株,同时每日口服感染1×10^(4)cfu的鸡白痢沙门菌C79-1株;感染对照组鸡每日口服感染1×10^(4)cfu鸡白痢沙门菌C79-1株;空白对照(BC)组鸡饲喂基础日粮。感染后每周采血通过平板凝集法检测血清中的鸡白痢抗体效价,4周后剖杀全部鸡,取其肝脏及各肠道内容物,采用沙门氏菌显色培养基培养并经菌落计数统计各组鸡肝脏及肠道中的沙门氏菌属细菌。结果显示:益生菌组鸡抗体阳性率仅10%,感染对照组鸡抗体阳性率达80%;益生菌组鸡肝脏、十二指肠、空肠、回肠及盲肠中的沙门氏菌属细菌含量虽均高于BC组鸡但均极显著低于感染对照组鸡(P<0.001)。上述结果表明,口服唾液乳杆菌L.C332可以有效抑制鸡白痢沙门菌在鸡肝脏及肠道中的定植,阻止其自然感染,且L.C332株在体内外均具有较强的抑菌活性。本研究为新型替代抗生素益生菌的筛选和应用提供参考依据。

非洲猪瘟精准防控助力猪瘟净化

自2018年非洲猪瘟传入我国以来,给我国生猪养殖行业带来了重创。同时,历经几年的非洲猪瘟防控,也给生猪养殖行业带来了一些变革。在非洲猪瘟精准防控的背景下,各种防控措施、处置方案均进行了升级,生猪养殖、运输、屠宰、病死猪无害化处理、生物安全、大清洗大消毒等关键防控技术越来越成熟,越来越完善,为广大养殖者做好精准防控提供了技术支撑。非洲猪瘟的精准防控局面的形成,促使生猪养殖行业逐渐具备净化动物疫病的可能和条件。尤其是在当前非洲猪瘟精准防控的形势下,也为猪瘟净化带来了好的时机。

表达胸腺肽和干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌作为鸡新城疫病毒活疫苗免疫佐剂的初步研究

为评估以滴鼻方式免疫表达鸡胸腺肽和鸡干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌能否作为新城疫病毒(NDV)活疫苗的免疫佐剂及对其免疫效力的影响,本研究以表达鸡胸腺肽和鸡γ干扰素融合蛋白(cTα1-cIFN-γ,后简写为Tα1-IFN)的重组乳酸乳球菌(Tα1-IFN/r-L.lactis)与NDV活疫苗混合后(Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗)滴鼻免疫14日龄SPF鸡,同时设NDV活疫苗组、L.lactis+NDV活疫苗组及PBS阴性对照组。分别于免疫后不同时间(3 d、7 d、14 d、21 d、28 d)采血,于免疫后14 d、21 d、28 d分别检测各组鸡血清中的HI抗体效价;采用间接ELISA测定免疫后3 d、7 d及14 d各组鸡血清中主要细胞因子的分泌水平;分离各组鸡免疫后21 d及28 d外周血单个核细胞(PBMC)和外周血白细胞,分别通过CCK-8法检测各组鸡PBMC和白细胞中抗原递呈细胞(APC)的增殖活性。HI抗体检结果显示,分别在免疫后14 d、21 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡的NDV HI抗体效价与NDV活疫苗组以及L.lactis+NDV活疫苗组均无显著差异;但免疫后28 d,该组鸡血清中的NDV HI抗体效价极显著高于其余两组(P<0.0001)。细胞因子检测结果显示,在免疫后各时间点Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡血清中IFN-γ及IL-2(Th1型细胞因子)和IL-4(Th2型细胞因子)的分泌水平基本均显著或者均极显著高于NDV活疫苗组、L.lactis+NDV活疫苗组及阴性对照组(14 d的IL4除外)。Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡血清中IL-1β(促炎因子)和IL-10(抗炎因子)的分泌水平在免疫后3 d、7 d、14 d均极显著高于其余各组(P<0.0001)。细胞增殖活性的检测结果显示,免疫后21 d和28 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡PBMC的增殖活性均极显著高于其余各组;免疫后28 d,该组鸡PBMC的增殖活性均极显著高于L.lactis+NDV活疫苗组和阴性对照组(P<0.0001),但与NDV活疫苗组差异不显著(P>0.05);免疫后21 d和28 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡外周血白细胞中APC的增殖活性均极显著高于其余各组(P<0.0001);免疫后28 d,该组鸡白细胞中APC的增殖活性极显著高于NDV活疫苗组(P<0.01),但与L.lactis+NDV活疫苗组和阴性对照组均无显著差异。上述结果表明,本研究采用表达Tα1-IFN的重组乳酸乳球菌与NDV活疫苗同时滴鼻免疫SPF鸡后,可诱导其产生较高水平的体液免疫及细胞免疫反应,增强SPF鸡免疫系统的应答能力,同时又能维持鸡体内的免疫稳态。有望成为一种新型的、有潜力的免疫佐剂,为新型免疫佐剂的开发提供了重要实验数据及参考依据。

猪瘟的流行病学特点及防控

猪瘟(Classical swine fever, CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)引起的一种感染家猪和野猪的烈性传染病,发病率和死亡率都很高,对养猪业造成了重大的经济损失。严格的生物安全措施和疫苗接种是预防和控制CSF的主要方法,我国自实施CSFV疫苗强免政策以来,CSFV在我国的流行得到了有效的控制,大规模暴发的情况很少发生,仅部分地区呈点状散发或地方性流行,非典型和繁殖障碍型猪瘟增多。为了净化并根除CSF,应加强生物安全防控,采用可靠的诊断技术及时淘汰CSFV阳性猪,继续标记疫苗和药物治疗的研究,以减少疫情的传播风险,保障养猪业健康发展。

口服表达胸腺肽和鸡干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌对鸡肠道菌群影响的研究

为构建表达胸腺肽和鸡γ干扰素融合蛋白(Tα1-cIFN-γ)的重组乳酸乳球菌并检测其作为口服免疫增强剂对鸡外周血单个核细胞(PBMC)的增殖活性及鸡肠道菌群的影响,本研究将鸡胸腺肽(Tα1)和鸡干扰素(cIFN-γ)的编码基因序列(去除干扰素信号肽编码基因序列),并按照宿主菌乳酸乳球菌NZ3900株的基因组优化密码子后,以经G4S-linker连接的Tα1-cIFN-γ基因为模板,采用PCR扩增携带表达载体p NZ8149同源臂及HA标签的目的基因序列(Tα1-cIFN-γ-HA);通过PCR扩增携带Tα1-cIFN-γ-HA基因序列同源臂的全长p NZ8149载体序列,利用同源重组的方式将这两段基因连接构建重组质粒p NZ8149-Tα1-cIFN-γ-HA,并经PCR和测序鉴定正确后电转化乳酸乳球菌NZ3900感受态细胞中,构建重组乳酸乳球菌p NZ8149-Tα1-cIFN-γ-HA/NZ3900(r L.lactis-Tα1-cIFN-γ)并经PCR和测序鉴定;将重组乳酸乳球菌r L.lactis-Tα1-cIFN-γ经乳酸链球菌素(Nisin)诱导6 h~7 h,离心超声破碎后取上清采用western blot鉴定Tα1-cIFN-γ的表达。结果显示,r L.lactis-Tα1-cIFN-γ经PCR扩增到3185 bp的目的基因片段,测序结果显示目的片段完全正确;且在约25 ku处出现特异性条带,与目的蛋白Tα1-cIFN-γ大小相符,利用BCA蛋白测定试剂盒构建标准曲线,对Tα1-cIFN-γ绝对定量显示其含量为31μg/m L。以重组乳酸乳球菌裂解液(含重组蛋白40μg/m L,重组菌2×10^(9)cfu/mL)经口服免疫21日龄SPF鸡,并于28日龄加强免疫一次,于首免后2周、4周、7周采血分离PBMC,并分别采用Con A+Ionomycin、Con A+PMA及LPS刺激后,采用CCK-8法检测鸡PBMC的增殖活性。结果显示,经刺激后的各实验组鸡于首免后2周、4周、7周PBMC的增殖活性均极显著高于阴性对照组(口服PBS的鸡)(P<0.001、P<0.0001、P<0.0001);7周后剖杀各组鸡取其盲肠粪便样品经PCR扩增16S rDNA基因的保守区V3~V4基因序列,采用高通量测序并采用SIMCA软件、MOTHUR程序、AMDIS软件等对测序结果进行beta多样性、alpha多样性、菌群结构组成以及菌种重要性的LEf Se分析。beta及alpha多样性分析结果显示,实验组和阴性对照组鸡盲肠粪便样品测序结果分散于不同象限;且两组间样品的alpha多样性存在明显差异,表明实验组鸡具有更大的菌种丰度。菌群结构和组成分析结果显示,口服r L.lactis-Tα1-cIFN-γ显著改变了鸡盲肠肠道菌群门水平和属水平的结构和组成,其中厚壁菌门的乳酸杆菌属、普拉梭菌属和黏液真杆菌属等有益菌群显著增加;而拟杆菌门中的瘤胃菌属、另枝菌属等机会致病菌属显著减少。菌种重要性的LEf Se分析结果显示,与阴性对照组相比,口服r L.lactis-Tα1-cIFN-γ对SPF鸡肠道菌群的组成有显著影响,来自杆菌纲、乳杆菌目、乳杆菌科、乳杆菌属和厚壁菌门等有益菌成为肠道菌群内的重要菌种。上述结果首次表明,口服r L.lactis-Tα1-cIFN-γ不仅显著提高鸡PBMC的增殖活性等细胞免疫反应,而且还可以改善肠道菌群结构和组成,提高有益菌属的丰度,降低机会致病菌的丰度。本研究为天然绿色新型口服免疫增强剂和免疫佐剂的研制奠定了基础。

重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株、Re-12株+H7N9 Re-2株)对白羽肉鸡免疫抗体监测试验

为了评估重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株、Re-12株+H7N9 Re-2株)对白羽肉鸡免疫效果以及对白羽肉鸡最佳免疫时间,试验选取3个厂家(a、b、c厂)重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株、Re-12株+H7N9 Re-2株)分别在1日龄和7日龄进行接种,于接种前(1,7日龄)、14,21,28,35,42日龄采血进行抗体检测,以了解不同厂家高致病禽流感疫苗对白羽肉鸡免疫效果以及最佳免疫时间。结果表明:3个厂家高致病性禽流感疫苗对白羽肉鸡免疫效果没有明显差异,在21日龄后H5N1 Re-11、H5N1 Re-12、H7N9 Re-2抗体效价均在4 lb以上,各毒株抗体效价在28,35,42日龄时,1日龄抗体效价要高于7日龄,且a厂家疫苗产生的抗体效价要略高于b、c厂。说明1日龄免疫效果要好于7日龄,最佳免疫时间为1日龄。

针对银狐主要传染病血清学检测的免疫球蛋白单克隆抗体的制备

以饱和硫酸铵沉淀法和Agarose-Protein G亲和层析技术相结合从银狐血清中提纯免疫球蛋白(IgG),再经SDS-PAGE电泳鉴定,将纯化的免疫球蛋白(IgG)作为抗原,采用常规方法免疫BALB/c小鼠,3次免疫后取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞相融合制备杂交瘤细胞,利用间接ELISA、Western blot等方法进行鉴定及阳性克隆的筛选,对杂交瘤细胞产生的单克隆抗体进行鉴定和活性测定。结果得到与银狐免疫球蛋白(IgG)发生特异性反应的3株单克隆抗体,分别命名为E2、1E3和2G10。Western blot结果表明,E2、1E3和2G10单克隆抗体能与银狐IgG蛋白特异性结合。经抗体亚型鉴定E2、1E3和2G10均为IgG1、Kappa链。生产提纯的腹水单克隆抗体经Western blot分析效价可达到1∶6 000。该研究利用抗银狐IgG单克隆抗体制备检测感染主要传染病的银狐血清抗体试纸条具有良好的特异性与灵敏性,可以作为检测银狐主要传染病的一种新方法。

禽白血病的诊断技术研究进展

禽白血病是一种由禽白血病病毒感染引起的,可导致禽严重的免疫抑制、多器官发育迟缓以及多发性肿瘤,并导致禽的生产性能严重下降和大量死亡。由于ALV基因的变异和重组导致ALV亚群众多,传播性复杂。目前市场上缺乏有效的ALV疫苗和治疗药物,影响世界各地禽类的健康和养殖业的发展。在发达国家ALV已经基本被根除,包括中国在内的发展中国家然仍深受其害。自2008年我国实施ALV净化以来,大规模的ALV暴发已被遏制,但ALV散发时有报道。ALV净化需要投入大量时间和高额资金,加强ALV的流行病学监测对避免ALV暴发和彻底根除ALV至关必要。随着分子生物学和生物技术的快速发展,禽白血病的检测技术也得到了快速的进步和提高。本文将综述禽白血病检测技术的研究进展,以期为禽类疾病的防控提供参考。

兽医在实验动物工作中的主要作用

实验动物是一种特殊动物,对科学实验的质量起到决定性作用。兽医在实验动物的工作过程中起着重要作用,实验动物的发展与应用离不开兽医。主要对兽医在实验动物设施建设、运行与管理中的作用、在动物实验的设计与实施中的作用、在实验动物运输管理中的作用、在实验动物福利监督与管理中的作用、在生物安全评价与管理中的作用及在实验动物药品和废弃物管理中的作用进行了介绍。

禽白血病的流行病学特点及净化措施

禽白血病(AL)是由禽白血病病毒(ALV)引起的,可诱发家禽多种肿瘤性疾病,给家禽养殖业造成重大的经济损失。目前,由于我国对ALV的大规模净化,商品蛋鸡和肉鸡的ALV净化工作取得了显著成就,但是AL仍在我国许多本地鸡群中流行。本文对禽白血病的病原特征以及临床症状、流行情况等方面进行了综述,为该病的深入研究和养殖场工作防控提供参考。

实验动物发展现状及趋势

实验动物的质量好坏，对科学实验有着重要的影响，实验动物的发展关系到科学实验的质量，现在科研机构等都非常重视实验动物的选择。主要从实验动物的现状、实验动物的未来发展趋势阐述实验动物的发展现状及未来发展趋势，希望为研究实验动物的专家与学者提供理论参考依据。

浅论实验动物兽医的职责及实践

我国现在非常缺实验动物兽医，尤其具有一定实践能力的实验动物兽医。我国实验动物科学快速发展，动物兽医人才紧缺，实验动物兽医人员具有一定职责，需要具有一定的实践能力，促使能胜任实验动物兽医职责。本论文主要从实验动物兽医的发展、实验动物兽医的职责、实验动物兽医的实践任务进行阐述实验动物兽医职责及实践，希望为研究实验动物兽医的专家与学者提供理论参考依据。

机械加工领域中的智能制造技术与系统可行性研究

在经济飞速发展的现代社会,各方面的技术都在不断改进和创新,以求时刻跟紧时代步伐,走在社会发展前列。尤其是我国的机械加工行业,更是获得了飞速的进步,已经从初具雏形的简陋模式到如今完全建立起完整体系,机械加工行业的相关生产技术正在不断向着现代化方向发展。然而,虽然发展十分迅速,但是机械加工行业的生产效率和产品的平均质量还远远未能达到相关标准的要求,在这一方面,我国在国际竞争中还是处于弱势地位的,所以需要对该技术进行整体的研究和分析,积极研究智能化的机械加工技术和智能化机械加工系统,从而实现技术的彻底改革,奋力赶上时代的步伐,甚至走在发展前列。

PDCoV、PKV和MRV三重荧光定量PCR方法的建立及初步应用

为了快速同步检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪嵴病毒(PKV)和猪呼肠孤病毒(MRV),参考GenBank中PDCoV M、PKV 5’UTR和MRV L1基因保守序列,设计了特异性引物和探针并优化了反应条件,建立了同时检测PDCoV、PKV和MRV的三重荧光定量PCR方法。该方法可特异性检出PDCoV、PKV和MRV,与PRRSV、CSFV、PCV2、PRV、PEDV、TGEV、RV等病原无交叉反应,3种病毒的最低检测量分别为2.7×10^(1)copies/μL、1.22×10^(1)copies/μL和1.26×10^(2)copies/μL,组内及组间变异系数为0.001~0.019。应用所建立的方法与行业标准及文献报道方法同时检测142份临床样本,结果显示与行业标准及文献报道方法阳性符合率为78%~94.92%。本研究建立的三重荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,为临床PDCoV、PKV和MRV的鉴别诊断和流行病学调查提供了快速敏感的技术手段。

禽重要免疫抑制病防控关键技术创制写应用

我国家禽年饲养量超过100亿只,养禽业已成为“乡村振兴战略”跨入新时代的重要支柱。然而,传染性法氏囊病(IBD),马立克氏病(MD)、禽白血病(AL)等重要禽病毒性免疫抑制病严重威胁养禽业的健康发展。禽免疫抑制病常呈混合感染,IBD民间俗称鸡的“艾滋病”,MD是禽类最重要的肿瘤病,AL同时还是重要的种源性遗传病,在我国广泛流行,导致大型种禽场倒闭,给我国养禽业造成严重危害,同时也严重威胁我国家禽品种安全,是国家指定优先防治的重要禽病。

猪链球菌的临床症状及防治措施研究

随着近些年环境的不断恶化,导致各种动物的疾病发生率均在不断提高。目前来看,对于猪养殖而言,其中最为主要的疾病便是链球菌,在感染链球菌之后病猪的死亡率非常高,所以链球菌的防治工作也是猪生产期间的重点。对此,为了进一步提高生猪养殖综合水平,本文简要分析猪链球菌的临床症状及防治措施,希望能够为相关工作者提供帮助。