m6A甲基化相关单核苷酸变异与膜性肾病的发病相关

目的:膜性肾病(membranous nephropathy, MN)是一种具有遗传易感性的肾小球靶向性自身免疫性疾病,其发病机制仍未完全阐明,本文旨在探索m6A甲基化相关单核苷酸变异(m6A-SNPs)是否参与了其发病环节。方法:本研究利用全基因组关联分析(GWAS)和RMvar数据库中的SNPs数据初步确定了与MN相关的m6A-SNPs,通过查询在线网站选取位于基因本体区、显示顺势表达数量性状位点(cis-eQTL)信号以及在东亚人群中次等位基因频率(minor allele frequency, MAF)值大于0.1的SNPs,并对剩余SNPs进行功能注释。最后,利用GEO数据库中GSE108113数据集进行差异基因表达分析。结果:共确定了61个与MN相关的m6A-SNPs以及MICA、NOTCH4、EXTL3、PCDHB14等8个差异表达基因。结论:m6A-SNPs可能通过调控以上基因的表达参与了MN的发生发展。

碳酸司维拉姆联合常规治疗对慢性肾衰竭合并高磷血症患者血清炎症因子及HO-1、iPTH水平的影响

目的:探讨碳酸司维拉姆联合常规治疗对慢性肾衰竭(CRF)合并高磷血症患者血清炎症因子及血红素氧化酶1(HO-1)、全段甲状旁腺激素(i PTH)水平的影响。方法:将2014年1月-2015年1月唐山市工人医院肾内科确诊为CRF合并高磷血症患者60例按随机数字表法分为对照组和观察组,各30例。对照组患者给予降糖、降脂、降压、降磷、保护肾脏等临床常规方法治疗,观察组患者在对照组治疗基础上给予碳酸司维拉姆(剂量0.8 g,每天3次,餐中服药),疗程均为4周。比较两组患者血清中白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、HO-1、i PTH和钙、磷水平,并比较两组患者不良反应发生情况。结果:因两组患者在治疗过程中均有2例退出,故最终两组纳入数分别为28例。治疗前,两组患者血清各指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,两组患者治疗后血清中IL-6、CRP、i PTH、磷水平均显著降低(P<0.05),血清钙水平显著升高(P<0.05),且观察组患者上述指标较对照组改善更明显(P<0.05)。两组患者不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:碳酸司维拉姆联合常规治疗后能更为有效地降低CRF合并高磷血症患者血清炎症因子(IL-6、CRP)和HO-1、i PTH水平,调节钙、磷代谢,且安全性较高。

糖尿病肾病患者血CD64、Alb、IL-6表达及其与合并肺部感染的关系和预后影响因素

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者血CD64、白蛋白(Alb)、白细胞介素(IL)-6表达与其合并肺部感染的关系及预后影响因素。方法选取126例DN合并肺部感染患者纳入肺部感染组,同期126例DN未合并肺部感染患者纳入非肺部感染组。检测比较两组血CD64、Alb、IL-6水平,比较肺部感染组不同预后患者一般资料与血CD64、Alb、IL-6水平,分析DN合并肺部感染预后的影响因素及血CD64、Alb、IL-6对患者预后不良的预测价值。结果肺部感染组血CD64、IL-6表达均明显高于非肺部感染组,血Alb表达明显低于非肺部感染组(P<0.05);肺部感染组死亡患者血CD64、IL-6表达均明显高于生存患者,血Alb表达明显低于生存患者,临床肺部感染评分(CPIS)、急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分均明显高于生存患者(P<0.05);肺部感染组CPIS、APACHEⅡ评分与血CD64、IL-6表达正相关,与血Alb表达呈负相关(均P<0.05);DN合并肺部感染患者预后与CPIS、APACHEⅡ评分、血CD64、Alb、IL-6表达关系密切;血CD64、Alb、IL-6联合预测DN合并肺部感染患者预后死亡的曲线下面积(AUC)高达0.899,高于3种指标单独预测,联合预测的最佳敏感度为86.21%,特异度为81.44%。结论DN合并肺部感染患者血CD64、Alb、IL-6表达异常,可反映患者肺部感染严重程度及病情,在判断DN合并肺部感染患者预后方面具有重要价值。

1,25(OH)_2D_3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β_1的表达的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中。对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH+1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3。刺激HK-2细胞48 h。半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达;Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达;免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量。结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1 mRNA表达;PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加;PTH+1,25(OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达;10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量;PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P<0.05)。免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性;PTH+1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P<0.05)。ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH+1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达。

原发性肾小球肾炎患者尿中结缔组织生长因子的检测及其临床意义

目的探讨原发性肾小球肾炎患者尿中结缔组织生长因子(CTGF)水平的变化及临床意义。方法选择原发性肾小球肾炎患者48例,正常对照组32例,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定其尿中CTGF分泌水平,应用比浊法检测尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血浆清蛋白、血肌酐、血尿素氮等生化指标,选用肾小球指数、肾小管间质病变程度作为评价肾脏病理损害的指标,并与尿中CTGF水平进行相关性分析。结果原发性肾小球肾炎组患者尿CTGF水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。原发性肾小球肾炎组患者尿CTGF水平与尿蛋白指数、血肌酐水平、血尿素氮水平、肾小球指数、肾间质病变程度呈正相关(r值分别为0.453、0.368、0.339、0.412、0.397,P<0.05),而与血浆清蛋白水平无明显相关性。结论原发性肾小球肾炎患者尿中CTGF水平升高,检测尿中CTGF水平可能成为评价慢性肾小球肾炎患者肾脏病变严重程度的指标。

醛固酮对人肾小管上皮细胞MMP-1/TIMP-1基因表达和合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的探讨醛固酮(ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)基因表达,以及合成分泌纤维连接蛋白(FN)的影响。方法人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含5%FCS的DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)刺激HK-2细胞48h后,应用半定量RT-PCR法检测细胞中MMP-1、TIMP-1和FN的基因表达,ELISA法测定培养上清液中纤维连接蛋白(FN)的含量。结果 ALD呈剂量依赖性地下调HK-2细胞中MMP-1的基因表达,上调TIMP-1和FN的基因表达,MMP-1/TIMP-1比值降低(P<0.05)。ALD呈剂量依赖性地增加培养上清液中FN的含量(P<0.05)。结论 ALD通过调控HK-2细胞中MMP-1和TIMP-1的基因表达,促进其合成分泌FN,导致肾间质纤维化的进展。

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的研究甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的PTH刺激HK-2细胞后,应用Hoechst33258染色观察PTH对HK-2细胞形态学的改变,Annexin V/PI双染流式细胞术检测PTH对HK-2细胞凋亡的影响。Western blot和半定量RT-PCR法检测PTH对HK-2细胞Bax和Bcl-2蛋白和基因表达的影响。结果Hoechst33258染色结果表明,PTH作用于HK-2细胞48h,细胞出现核固缩、核碎裂,随着PTH浓度的升高,凋亡细胞数逐渐增多,且具有一定的浓度依赖性。流式细胞术结果表明,随着PTH浓度的升高,凋亡细胞百分率逐渐增多,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot和半定量RT-PCR结果表明,随着PTH浓度的升高和作用时间的延长,Bax蛋白和基因表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白和基因表达量逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加。结论PTH可能通过调节凋亡基因Bax和Bcl-2的表达促进肾小管上皮细胞凋亡,进而促进肾小管间质纤维化。

成人过敏性紫癜性肾炎患者血清肝细胞生长因子及血尿结缔组织生长因子的研究

目的:探讨过敏性紫癜性肾炎(HSPN)患者血清肝细胞生长因子(HGF)及血尿结缔组织生长因子(CTGF)的水平及其与肾脏损害的关系。方法:选择HSPN病例35例,正常对照组32例,应用ELISA方法测定其血清HGF及血尿CT-GF的水平,应用比浊法检测尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮等生化指标,选用WHO病理分类法进行分级分组,并与血清HGF及血尿CTGF水平进行相关性分析。结果:HSPN患者血清HGF水平较对照组升高,在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级血尿CTGF较对照组升高,在Ⅳ级血清HGF与尿CTGF水平呈负相关。结论:HSPN患者血清HGF升高,病理较重时血尿中CTGF的水平升高,提示其参与了HSPN的发生发展。测定HGF和CTGF二者相结合可能更有效的评估紫癜性肾炎的肾脏损害的程度。

乙醛促进人肾小管上皮细胞表型变化并增加细胞α平滑肌肌动蛋白的表达

机体摄入大量的酒精后,约90%在肝脏乙醇脱氢酶的作用下转化为乙醛,并进入血液循环。肾脏是仅次于肝脏的酒精排泄器官。酒精及其代谢产物乙醛通过肾脏排泄到尿中,尿中乙醛的含量高于肝脏及血液中的含量。长期过量饮酒可导致酒精性肾损害,酒精性肾损伤以肾小管间质病变为主,但其作用机制目前尚不清楚。肾小管上皮细胞发生表型转化是发生肾间质纤维化的重要机制之一。

金水宝胶囊联合坎地沙坦酯片治疗早期糖尿病肾病的效果观察

目的:研究用金水宝胶囊联合坎地沙坦酯片治疗早期糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)的临床效果。方法:将2017年1月至2019年5月唐山市唐山工人医院收治的78例早期DN患者随机分为研究组(n=39)与对照组(n=39)。对两组患者均进行常规的降血糖治疗,在此基础上用坎地沙坦酯片对对照组患者进行治疗,用金水宝胶囊联合坎地沙坦酯片对研究组患者进行治疗,然后比较两组患者的各项临床指标。结果:治疗后,研究组患者血清低密度脂蛋白胆固醇、血清甘油三酯、血清总胆固醇、糖化血红蛋白、舒张压、收缩压、尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白和血清胱抑素C的水平均低于对照组患者,P<0.05。结论:对早期DN患者进行常规降血糖治疗的基础上,用金水宝胶囊联合坎地沙坦酯片对其进行治疗能显著改善其血压、糖化血红蛋白、血脂、尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白及血清胱抑素C等指标的水平。

慢性肾衰竭合并布鲁菌病一例

布鲁菌病属于人畜共患传染病,临床多表现为发热、乏力、多汗、关节痛、睾丸痛,以及淋巴结、肝、脾肿大;也可引起布鲁菌病性脊柱炎,表现为椎旁脓肿,以腰椎受累最为常见。MRI检查对诊断布鲁菌病引起的腰椎旁脓肿具有较高的灵敏度和特异度。慢性肾衰竭合并布鲁菌病的报道较少,临床上容易漏诊或误诊。布鲁菌感染还可引起布鲁菌性肾小球肾炎。本文报道1例慢性肾衰竭合并布鲁菌病,结合文献复习,总结临床诊治经验。

反义寡核苷酸对高糖诱导的肾小管上皮细胞骨调素表达及Ⅲ型胶原分泌的影响

目的研究骨调素(OPN)反义寡核苷酸(AS-ODN)对高糖环境下人肾小管上皮细胞(HK-2)OPNmRNA和蛋白表达及Ⅲ型胶原分泌的影响。方法将HK-2细胞分为正常糖对照组、高糖组、渗透浓度对照组进行体外培养。用脂质体介导的方法将OPN反义、正义、错义寡核苷酸转染细胞,并进行高糖培养。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测OPN mRNA表达;流式细胞仪检测细胞内OPN蛋白合成;ELISA方法检测上清中Ⅲ型胶原分泌情况。结果高糖环境下,HK-2细胞OPN mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01),OPN反义寡核苷酸转染后,其OPN mRNA、蛋白表达及Ⅲ型胶原分泌均明显低于高糖组(P<0.01),而正义和错义的OPN寡核苷酸转染后与高糖组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外培养的HK-2细胞经高糖诱导表达OPN,OPN反义寡核苷酸能够抑制OPN表达及Ⅲ型胶原分泌,表明阻断OPN可能是延缓高糖环境下肾小管上皮细胞细胞外基质积聚的有效手段之一。

苯那普利和缬沙坦联合应用对大鼠阿霉素肾病的影响

目的:探讨苯那普利和缬沙坦对大鼠阿霉素肾病的干预作用。方法:实验Wistar大鼠实行右肾切除手术,以阿霉素尾静脉注射造模,分别用苯那普利、缬沙坦及两者联合灌胃。用药后2～8周检测血、尿标本;透射电镜下观察肾形态学变化;用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡。结果:与肾病组相比,3个干预组中的肌酐、尿素氮、尿蛋白、血压均降低,且差异显著;电镜下肾小球超微结构改善;凋亡细胞减少,差异显著。联合应用组与单用组差异显著。结论:苯那普利、缬沙坦及两者联合应用均可延缓阿霉素肾病肾小球硬化的进展,其机制可能与减少细胞的凋亡及肾超微结构的改善有关,两药联合应用效果更显著。

醛固酮对人肾小管上皮细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1和纤维连接蛋白的影响

目的探讨醛固酮(ALD)对人肾小管上皮细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和纤维连接蛋白(FN)的影响。方法人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含5%FCS的DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)刺激HK-2细胞48 h后,应用半定量RT-PCR法检测细胞中PAI-1和FNmRNA的表达,ELISA法测定培养上清液中FN的含量。结果 ALD呈剂量依赖性地上调HK-2细胞中PAI-1和FN的基因表达,并增加培养上清液中FN的含量(P<0.05)。结论 ALD通过促进HK-2细胞PAI-1的基因表达,并促进其合成分泌FN,导致肾间质纤维化的进展。

氦氖激光穴位照射治疗隐匿性肾小球疾病的初步研究

我院采用低能量Ｈｅ－Ｎｅ激光双例肾俞穴位照射治疗隐匿性肾小球疾病，并设单纯药物治疗组为对照，研究结果表明，单纯激光治疗对蛋白尿及血尿的疗效与药物治疗无差异（Ｐ＞０．０５），但无任何副作用，而激光＋药物与单纯药物治疗则疗效显著（Ｐ＜０．０１），蛋白尿的疗效与尿蛋白的性质有关，尿ＩｇＧ越多，疗效越差，血尿的疗效与红细胞的形态也有一定关系。建议激光＋药物为最佳治疗手段。