水产动物疾病学实验教学改革的探索

旨在促进本科学生掌握水产动物疾病学的基础理论和实践技能,提高学生对理论知识的综合应用能力,增强本科毕业生就业竞争力。文中突破传统的实验教学模式,根据水产养殖专业的培养目标,初步探讨了水产动物疾病学实验教学的改革措施,主要内容包括:对实验内容、教学条件、教学方法和考核办法进行改革和实践,充分调动了学生的学习积极性,提高了学生的学习兴趣,培养了学生的自主思维和创新意识。

3种常用水产药物对孔雀鱼和月光鱼的急性毒性试验

在室内常温、静水条件下,用生物毒性试验方法,研究了溴氰菊酯、二氧化氯、甲醛对孔雀鱼和月光鱼的急性毒性效应。3种药物对孔雀鱼的96 h半致死浓度(96 h LC50)分别为:0.225、2.5、83.33 mg/L,对月光鱼的96 h LC50分别为0.35、4.67、42 mg/L。2种鱼对3种药物敏感性均依次排序为:溴氰菊酯>二氧化氯>甲醛。除甲醛外,孔雀鱼对药物的敏感性比月光鱼强。

齐口裂腹鱼头骨系统解剖

采用常规方法对齐口裂腹鱼的头骨进行了解剖观察。齐口裂腹鱼头骨由脑颅和咽颅组成,脑颅狭长,各骨片之间衔接十分紧密,额骨扁平且狭长,约占据整个脑颅背面一半面积,副蝶骨形似宝剑,咽齿发达,左右对称,齿式为5.3.2～2.3.5。头骨数量多,膜骨在头骨表面,有眶蝶骨,上枕骨接顶骨且不与额骨相接,具尾舌骨、下舌骨,鳃盖骨边缘光滑等特征说明齐口裂腹鱼属于较低等的硬骨鱼类。

水生动物进口风险评估综述

随着全球水产养殖业的发展,水产动物活体或水产品贸易日益频繁,不可避免地给进口国带来病原风险,造成疾病引入和传播,甚至生物入侵,严重危害水产养殖业的发展。水生动物进口风险评估(IRA),是指从别国或地区进口水生动物活体包括其受精卵、稚鱼、幼鱼、苗种、成体以及商品等的风险分析。风险分析是指对风险事件进行科学、透明、系统分析的一个过程,它由危害识别、风险评估、风险交流和风险管理4个部分构成。目前,常用的风险评估方法有定性风险评估、半定量风险评估和定量风险评估3种。定性风险评估具有灵活性强、适用范围广、易掌握的特点,能够综合各种资料、数据和信息,尤其适合初次风险评估,但容易受评估人员主观因素的影响。定量风险评估可避免主观因素的影响,评估结果准确、可靠,但需要收集大量数据,工作量巨大,评估成本也很高。通常,定性评估结果若能够提供很好的防范措施,则不必进行定量评估。将外来水生病原阻止在引进之初远比引入后根除更加容易。因此,开展水生动物进口风险评估对于阻止水生动物疾病传播和水生态环境破坏具有重要意义,同时也可为各国进行水产贸易提供参考。

新形势下《特种水生动物增养殖学》课程的改革与创新

特种水生动物养殖的蓬勃发展在满足人民对水产品需求的同时,也给从业人员带来了可观的经济收入。"十三五"是大力推进渔业供给侧结构性改革,加快渔业转方式调结构,促进渔业转型升级的关键时期。全国渔业发展第十三个五年规划也明确指出:大力推广适销对路的名特优和高附加值养殖品种,促进养殖品种结构调整。因此,培养素质高、具有坚实的理论知识基础和较强实践动手能力的专业从业人员已显得尤为迫切。因此,积极探索《特种水生动物增养殖学》课程内容和教学方法等方面的改革与探索,积极为人才培养服务,具有重要的现实意义。

黄鳝体表溃疡病病原菌的分离与鉴定

研究首次报道从患体表溃疡病黄鳝的肝脏、肾脏、脾脏等分离到1株细菌,经动物回归试验鉴定其为病原菌。形态学观察、生理生化试验和16S rRNA基因鉴定,结果证实该病原菌株为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。通过致病性试验证明其对鲤鱼和泥鳅均有致病力;药敏试验结果表明:分离菌株对头孢氨噻肟、头孢曲松钠、丙氟哌酸、洛美沙星、甲氧苄啶、氟哌酸、壮观霉素等高度敏感,而对氨苄青霉素、乙酰螺旋霉素等药物不敏感。

鲤益生菌筛选及部分菌株对鲤前肠黏液的体外黏附作用

从养殖池、水族箱和健康鲤肠道等分离20株细菌,通过耐热和体外拮抗试验筛选出5株细菌,经生化试验和细菌16S rDNA测序鉴定为2株芽孢杆菌(Bacillus)、2株肠球菌(Enterococci)和1株柠檬酸杆菌(Citrobacter)。进一步采用体外固定鲤前肠黏液蛋白,结合同位素32P标记细菌并示踪的方法,研究来源于鲤肠道的肠球菌和柠檬酸杆菌以及鲤养殖水体中的芽孢杆菌对鲤前肠黏液的体外黏附活性,建立筛选鲤(Cyprinus carpio)益生菌的方法。结果表明,5株细菌均能黏附到黏液体外模型,肠球菌的相对黏附率极显著高于芽孢杆菌与柠檬酸杆菌(P<0.01),柠檬酸杆菌与芽孢杆菌的相对黏附率差异不显著(P>0.05),而肠球菌L2的相对黏附率极显著高于肠球菌E2(P<0.01)。研究证明,鱼源的肠球菌对鲤前肠黏液的黏附率高于异源的芽孢杆菌,而且不同种属的肠球菌在黏附能力上也存在差异。

人工养殖大鲵病原荧光假单胞菌的分离鉴定

从四川洪雅人工养殖的患病大鲵(Andrias davidianus)肝、肾中分离到一株优势菌(S100814),以腹腔注射、浸泡的方式进行人工感染试验,证实其为养殖大鲵的病原菌。该分离株生理生化特性与荧光假单胞菌一致,该菌为革兰氏阴性短杆菌,在TSA平板上生长呈边缘整齐、半透明的圆形灰白色菌落。接触酶、精氨酸双水解酶、明胶液化等为阳性,吲哚、V-P反应为阴性,可分解葡萄糖、阿拉伯糖、山梨醇、肌醇,但不发酵甘露糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖,不产H2S。根据分离株的形态、生理生化特性,结合16SrDNA序列(GenBank登录号为HQ880245)与系统发育树分析,将其鉴定为荧光假单胞菌。药敏试验表明,菌株对强力霉素和新生霉素高度敏感,对恩诺沙星、庆大霉素、丁胺卡那和氟苯尼考耐药。

南方鲇(Silurus meridionalis)豚鼠气单胞菌溶血素的分离、纯化与致病性研究

采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephadex A50凝胶层析法对豚鼠气单胞菌的溶血素进行分离、纯化,获得分子量为32.2kDa的单一多肽溶血素,测定溶血价为25。将该溶血素倍比稀释后梯度接种南方鲇,研究其对南方鲇的致病性和组织病理损伤情况。结果表明:豚鼠气单胞菌溶血素具有较强的毒力,对南方鲇的半数致死剂量(LD50)为0.29mg蛋白/kg体重;病鱼表现为体表褪色,腹部膨大,肝、脾、肾肿大,肝、脾淤血、出血明显;胃肠道内充有大量粘液,黏膜充血、出血;组织病理学表现为骨骼肌水肿、变性,肝细胞变性、坏死,血窦扩张淤血,肾小管上皮细胞变性、坏死,脾脏淋巴细胞减少,胃肠道黏膜上皮变性、坏死,脱落。

齐口裂腹鱼溃疡病病原的分离鉴定

从患溃疡病的齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)的溃疡灶中分离到一高致病性菌株D060501,动物回归实验证实该菌能引起健康齐口裂腹鱼出现明显的体表溃疡症,且具有较强的致病作用。通过对分离菌进行了形态学、理化特性等较系统的表观分类学指征鉴定,该菌菌株在TSA平板上生长呈边缘光滑、有光泽的圆形白色菌落,具有溶血性。染色发现该菌为革兰氏阴性短杆菌;具运动性;能发酵葡萄糖;脂酶、氧化酶和精氨酸双水解酶反应阳性;能利用葡萄糖产气,阿拉伯糖产酸;麦芽糖、硫化氢、氰化钾和V-P反应阳性;DNA酶和尿素反应阴性。对该菌的16S rDNA进行PCR扩增、克隆及测序,得到1条长度为1 514 bp的核苷酸序列。将获得的序列在GenBank数据库中进行Blast分析并下载同源性较高的细菌序列,用DNAstar软件进行多序列比对分析并构建系统发育树,结果表明,D060501分离株与其他嗜水气单胞菌形成一个簇群,菌株D060501与嗜水气单胞菌(Genbank登录号AF468055)的亲缘关系最近,同源性高达为99.1%,由D060501菌株的系统进化树分析可见,该菌与其他7株菌在进化上距离小于1.0,结合形态及生理生化特点可将其鉴定为嗜水气单胞菌。对该菌的药敏试验表明,该菌对氯霉素和庆大霉素高度敏感,对四环素、复方新诺明、强力霉素和羧苄青霉素耐药。

红尾副鳅耗氧率和窒息点的初步研究

用封闭流水式装置测定了红尾副鳅的耗氧率变化及窒息点。结果表明,红尾副鳅耗氧率随着体重的增加而减小,红尾副鳅其耗氧率昼夜变化差异显著(P<0.05)。在水温14.0℃时,平均体重4.0 g的红尾副鳅的平均耗氧率为0.1659 mg/(g·h),日平均耗氧率为0.1389 mg/(g·h),夜间其平均耗氧率为0.1930 mg/(g·h);平均体重为7.9 g的红尾副鳅的平均耗氧率为0.1175 mg/(g·h),日平均耗氧率为0.1099 mg/(g·h),夜间其平均耗氧率为0.1251 mg/(g·h);平均体重9.5 g的红尾副鳅平均耗氧率为0.0534 mg/(g·h),日平均耗氧率为0.0509 mg/(g·h),夜间平均耗氧率为0.0559mg/(g·h),窒息点为1.137 mg/L。本研究表明红尾副鳅为耗氧率和窒息点较高的鱼类。

链球菌毒力因子溶血素S的研究进展

链球菌溶血素S(Streptolysin S,SLS)是链球菌产生的重要毒力因子之一。化脓链球菌、海豚链球菌、咽峡炎链球菌等多种人和动物致病性链球菌均含有该毒力因子,化脓链球菌是人类主要的病原菌,其致病机制备受关注。SLS是一个由sagA-sagI 9个连续基因编码修饰的多肽性细胞溶素,具有帮助致病菌渗透上皮屏障、造成组织损伤、抵抗宿主免疫细胞吞噬、与其他毒力因子相互作用的功能;SLS可作为细胞群体感应的信号分子,参与调节其他毒力因子的表达。本文对SLS的结构和在致病过程中的生物学功能作一综述。

7种二氧化氯制剂对嗜水气单胞菌的杀灭效果比较研究

以嗜水气单胞菌为试验菌株,研究了7种不同生产厂家和同一厂家不同生产批次的稳定性一元二氧化氯对嗜水气单胞菌的杀灭效果。结果表明,该7批次产品对嗜水气单胞菌均有不同程度的杀灭作用,浓度越高,杀菌效果越好。不同生产厂家的二氧化氯杀菌效果参差不齐,以1,3,5,7号厂家二氧化氯杀菌效果最好,而2,4号厂家产品效果最差。且对嗜水气单胞菌的杀菌效果不受距离出厂日期的长短影响。

斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的特性研究

为了研究嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的酶学特性,本实验检测了不同的修饰剂、温度、pH、EDTA及Ba2+、Co2+、Cd2+、Ca2+、Mn2+、Hg2+、Cu2+及Mg2+等金属离子对酶活的影响,结果表明Ch-T、NBS和2-ME能显著抑制酶活性,而N-AI、PMSF和PCMB对酶活的影响不大,说明蛋氨酸残基、色氨酸残基和二硫键是酶活性的必需基团,而酪氨酸残基、丝氨酸残基和巯基与酶活性无直接关系。酶的最适温度为20℃,在pH为9.0时酶活最高,EDTA能显著影响酶活性,Ca2+、Hg2+、Cu2+能显著降低酶活性,而Co2+能使酶活增强,证实该酶为一种金属蛋白酶。同时检测了该酶的致病性,结果表明,该酶对小鼠及斑点叉尾鮰具有明显的致死作用,其LD50分别为4.33μg/g体重和3.49μg/g体重。

丁香酚对斑马鱼麻醉效果的研究

采用丁香酚对斑马鱼(0.36±0.03 g)进行了麻醉效果和急性毒性研究。麻醉试验的结果显示:水温28±1℃下,丁香酚对斑马鱼的理想麻醉浓度为20 mg·L^(-1),麻醉时间为2.25±0.028 min,复苏时间为0.94±0.048 min;麻醉时间11 min内,复苏率均为100%。急性毒性试验的结果显示:水温28±1℃下,丁香酚对斑马鱼96 h的LC_(50)为5.97 mg·L^(-1),95%可信范围为5.36~6.66 mg·L^(-1),安全浓度(SC)为0.60mg·L^(-1)。试验结果表明,作为一种鱼用麻醉剂,丁香酚在一定的范围内有效,生产试验使用中应进一步关注其有效性、安全性和潜在影响。

裂腹鱼的生物学及养殖

裂腹鱼对生态环境要求较高,营养好,价格高,加之多年的酷渔滥捕和生态环境恶化,野生资源日趋衰退。综述了雅鱼的分类分布、生物学特性,讨论了养殖中应注意的问题,分析了其养殖前景。

不同硒水平对幼鲤生产性能和免疫功能的影响

选择体重约10.4 g的健康幼鲤960尾,随机分为8组,每组3个重复,每个重复40尾,分别饲喂添加硒(亚硒酸钠,分析纯)0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mg/kg的8种不同饵料,试验期90 d。结果表明:随着饵料中硒添加水平的增加,幼鲤的增重和成活率提高,饵料系数降低,添加硒0.4mg/kg时,幼鲤生产性能最佳(P<0.05);添加0.3～0.5 mg/kg硒,可显著提高幼鲤头肾和脾脏重及其体指数,增加血液红细胞数量,降低白细胞数量,提高血清IgM水平和攻毒后成活率、血清溶菌酶活力及血清凝集抗体效价(P<0.05),从而增强幼鲤免疫功能和对疾病的抵抗力。幼鲤体增重、饵料系数、头肾重量、脾脏重量、血清溶菌酶活力和IgM抗体水平与饵料硒添加量呈显著的二次曲线相关。根据上述指标确定的最适硒水平为0.396～0.529 mg/kg。

一例乌苏里拟鲿体表溃疡症的病理学诊断

为了确定乌苏里拟鲿(Pseudobagrus ussuriensis)体表溃疡症的病因,在无菌操作下从发病鱼的溃疡灶边缘、脾、肾中分离病原菌;利用湿片法对鳃组织、体表黏液和肠道内容物压片,观察寄生虫寄生;利用病理学技术观察病鱼的病理损伤特点,分析病因。结果发现,采用BHI培养基作为该病例的首次分离培养基效果不佳,未见细菌生长。该病损伤的主要靶器官为皮肤肌肉、脾脏、头肾和体肾,所有鱼均主要表现为溃疡性坏死性皮炎和脂膜炎,脾炎和间质性肾炎。还可见轻微的灶性坏死性鳃炎。眼、脑、肝脏、心脏、消化道、鳔等未见明显病理改变。将病变组织的石蜡切片进行吉姆萨染色,在肌肉组织内可发现大量细长、可弯曲,犹如"乱发样"细菌。此外,在病灶内还可见少量真菌菌丝。综上结果,判定该病为细菌和真菌共同感染引起。证明了病理学技术在该病诊断中的重要作用。