硫酸胆固醇对桥本氏甲状腺炎小鼠模型的治疗效果及相关机制研究

目的观察硫酸胆固醇(CS)对桥本氏甲状腺炎小鼠的治疗效果。方法选取NOD.H-2^(h4)雌性小鼠饮0.05%碘化钠水持续不同时间,并通过持续2周腹腔注射CS对诱导小鼠进行治疗。HE染色观察淋巴细胞浸润情况并进行甲状腺炎症程度评分;测定血清抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)以及甲状腺功能水平;免疫荧光染色流式细胞仪分析B淋巴细胞、调节性T细胞(Treg)、Th17、Th1、Th2细胞比例的变化。结果HE染色结果显示,在8周组和16周组中,经过CS的腹腔注射后,小鼠甲状腺组织炎性评分显著下降(P<0.05)。而在64周组中,治疗组与诱导组之间无显著差别(P=0.31)。血清学分析显示,经过CS干预后,高碘溶液诱导8周和16周的小鼠体内TgAb、TPOAb水平均显著降低(P<0.05),而小鼠的甲状腺功能(TSH、T4水平)仅在16周组出现显著变化。流式细胞术分析显示,在8周组中,经过CS干预后,小鼠体内B淋巴细胞以及Th1、Th2、Th17和Treg细胞比例均出现显著变化(P<0.05)。结论CS对于桥本氏甲状腺炎早中期的疾病进展具有明显的治疗及缓解效果。

白藜芦醇对于小鼠败血症休克的保护作用及其作用机制的研究

目的从动物休克模型和细胞水平上研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对败血症的调节作用及其分子药理学作用机制。方法通过建立小鼠盲肠结扎穿孔诱导的败血症休克模型(CLP),研究白藜芦醇给药后的小鼠的存活率。然后利用体外培养的心肌细胞建立LPS损伤模型,采用反转录PCR(RT-PCR)、Real-time PCR检测细胞内源性TNF-α、SIRT1等的mRNA的表达水平,Western blot分析NF-κB重要亚基的蛋白表达水平。结果与单纯休克模型组相比较,腹腔注射白藜芦醇(1和5 mg·kg-1·d-1)治疗明显增加败血症休克小鼠的存活率;白藜芦醇处理明显促进SIRT1、SIRT6和SIRT7的mRNA表达,抑制LPS诱导的NF-κB核转位。结论适当剂量的白藜芦醇可能通过上调SIRT家族成员,并抑制NF-κB炎症反应通路,对败血症休克具有潜在的药理学保护作用。

Ghrelin拮抗LPS诱导的肝细胞损伤的保护作用

目的研究Ghrelin对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)肝损伤的保护作用,并探讨潜在的分子药理学作用机制。方法体外培养肝细胞L-O2细胞株,建立LPS损伤模型,采用Reverse Transcription-PCR评价细胞内源性Ghrelin前体原及其受体GHSR1a的mRNA表达水平,外源性Ghre-lin处理细胞后,Western blot检测评价NF-κB蛋白的核转位情况,Hoechst染色方法检测细胞凋亡。结果 5 mg.L-1的LPS处理肝细胞L-O2可诱导内源性Ghrelin及其受体GH-SR1a的表达上调。5 mg.L-1的LPS刺激2.5 h诱导肝细胞核内NF-κB的含量增高,刺激24 h诱导大量肝细胞凋亡,而10 nmol.L-1的Ghrelin预处理明显降低肝细胞核内NF-κB的含量,抑制LPS的促凋亡作用。结论 LPS诱导肝损伤时,内源性Ghrelin及其受体GHSR1a均表达上调,而外源性Gh-relin通过抑制LPS诱导的NF-κB的核转位拮抗其诱导的细胞凋亡,提示感染性肝损伤时,Ghrelin及其受体信号的上调可能通过抑制NF-κB介导的炎症反应,从而实现肝细胞的保护作用。

葫芦素I(JSI-124)通过p53信号通路诱导HepG2细胞凋亡

目的研究葫芦素I(cucurbitacin I,JSI-124)诱导HepG2人肝癌细胞凋亡的机制。方法用(0.01、0.10、1.00、10.00)μmol/L JSI-124分别处理培养的HepG2细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞增殖,Hoechst33258染色法观察细胞核形态变化,克隆形成实验观察集落形成能力变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时定量PCR检测p53及其下游Bax、Fas、鼠双微体基因2(MDM2)的mRNA表达变化,Western blot法检测P53及活化caspase-3的蛋白表达变化。结果JSI-124呈浓度和时间依赖性地抑制HepG2细胞的增殖。Hoechst33258染色法显示JSI-124呈剂量及时间依赖性引起HepG2细胞核染色质的凝集。与对照组相比,流式细胞术检测结果表明1μmol/L JSI-124处理的HepG2细胞凋亡率明显增加。JSI-124显著增强p53及受其调控的下游促凋亡因子Bax和死亡受体Fas mRNA的表达,而与p53结合并抑制p53功能的MDM2的mRNA表达变化不明显。JSI-124处理HepG2细胞48 h后,p53及活化的caspase-3蛋白显著增加。结论 JSI-124通过p53及其下游的促凋亡因子诱导HepG2人肝癌细胞发生凋亡。

microRNA-193b和microRNA-141在脓毒血症休克小鼠基因启动子区的甲基化状态

为了探究microRNA-193b和microRNA-141在脓毒血症休克小鼠的受累器官的基因启动子区甲基化及病理生理学意义,利用盲肠结扎穿刺(CLP)小鼠脓毒血症休克晚期模型,采用多导生理仪检测心功能,自动生化仪检测血糖和血乳酸水平,亚硝酸氢盐测序(BSP法)分别检测小鼠心脏、肝脏、肺及小肠的microRNA-193b和microRNA-141的基因启动子区甲基化。microRNA-193b基因克隆测序结果表明,休克晚期小鼠心脏组织其CpG岛的甲基化程度明显升高,甲基化频率为23.9%,高于正常组1.9%(P<0.05);microRNA-141基因克隆测序结果显示,休克晚期小鼠肺、小肠组织其CpG岛的甲基化程度明显升高,甲基化频率分别为31.2%和36.9%,高于正常组织3.4%(P<0.01)和4.6%(P<0.01)。结果表明在脓毒血症休克时,小鼠出现心功能障碍和代谢紊乱,microRNA-193b和microRNA-141的基因启动子区CpG岛甲基化,这可能是microRNA-193b和microRNA-141的表达水平变化的原因,并提示它们可能通过调节下游炎症相关靶蛋白的表达,继而调节感染性休克的病理生理过程。microRNA-193b和microRNA-141可能为感染性疾病早期诊断、治疗的新标志物和新靶点。

雌激素受体α36影响他莫昔芬治疗乳腺癌的分子机制研究进展

雌激素受体α(ERα)36是相对分子质量为36×103的ERα的一种亚型。它缺失转录活性区1(AF-1)和转录活性区2(AF-2),在生物学功能上与ERα66有很大不同。ERα36主要位于细胞膜和细胞质中,主要参与膜介导的非基因组信号通路。它能抑制ERα66介导的传统基因组信号通路,引起不同蛋白的层级磷酸化反应,增加乳腺癌和子宫内膜癌细胞及其干细胞的耐药性、迁移能力和浸润能力。研究显示ERα36与乳腺癌采用他莫昔芬治疗耐药有密切关系。对ERα36的深入研究有助于深化乳腺癌发生发展的理论知识,为内分泌治疗药物选择提供可能的理论依据。

microRNA-193b和microRNA-141在脓毒血症休克小鼠组织中的表达变化及意义

目的:探究microRNA-193b和microRNA-141在脓毒血症休克模型小鼠受累器官的表达变化及病理生理学意义。方法:利用盲肠结扎穿刺诱导小鼠发生脓毒血症休克晚期模型,采用多导生理仪检测心功能,自动生化仪检测血糖和血乳酸水平,Real-time PCR检测小鼠心脏、肝脏、肺及小肠的microRNA-193b和microRNA-141的表达水平变化。结果:与对照组小鼠相比较,脓毒血症休克晚期时小鼠心功能发生显著障碍,血糖水平明显降低,血乳酸水平明显增高;microRNA-193b在心脏组织的表达明显下降,而在肝脏和肺组织的表达明显增加;microRNA-141在肺和小肠组织的表达均明显增加。结论:在脓毒血症休克疾病时,小鼠发生心功能障碍和代谢紊乱,microRNA-193b和microRNA-141的表达水平在受累组织发生明显变化,提示它们可能通过调节下游炎症相关因子的表达,参与感染性休克的病理生理调节。microRNA-193b和microRNA-141可能成为感染性疾病治疗的新靶点。

中介素对器官保护作用的研究进展

中介素（IMD）又称肾上腺髓质素2（ADM2），是降钙素基因相关肽（CGRP）家族的新成员［1-2］。近年来研究发现， IMD可以通过对抗长期氧化应激、抑制细胞凋亡等多种机制［3］，减轻心、脑、肾等器官缺血/再灌注（I/R）损伤，并具有稳定血管内皮屏障、减轻血管渗漏等活性［4］。上述发现为I/R损伤以及血管内皮损伤所致器官功能障碍的治疗提供了新的理论依据和方向。现从IMD的生物学特性、实验研究进展及潜在的临床应用前景等方面进行总结，以期对关注器官保护的研究者及临床医生提供一定的帮助。

小鼠垂体中叶素对异丙肾上腺素诱导的小鼠心脏肥大的保护作用研究

目的利用异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心脏肥大模型研究小鼠垂体中叶素(IMD)拮抗心脏肥大的药理学作用和机制。方法建立小剂量ISO皮下注射诱导心脏肥大的小鼠模型,研究IMD给药后的小鼠血流动力学指标和心质量/体质量比,然后利用心脏组织切片评价心肌细胞横截面积、凋亡和纤维化。采用荧光实时定量PCR法检测心脏组织的心钠素(ANP)、脑钠肽(BNP)、内源性IMD及其受体系统的mRNA表达水平。结果与ISO诱导的小鼠心脏肥大模型组相比较,腹腔注射IMD治疗明显降低ISO处理所增加的心质量/体质量比和心肌细胞横截面积、心脏肥大标志物ANP及BNP的mRNA水平,以及心肌细胞凋亡率和心肌组织纤维化率。同时,改善心脏功能,左室压力、等容收缩期左心室内压力上升的最大和下降的最小速率、每搏排血量、心输出量和射血分数明显增加,而左心室舒张末期压力显著降低。此外,ISO处理明显诱导心脏组织内源性IMD及其受体的表达。结论 ISO诱导心脏组织内源性IMD及其受体的表达,外源性给与IMD治疗可能通过ISO活化的IMD受体系统实现其拮抗心脏肥大的药理学保护作用。

三甲氧苄嗪对脂肪来源间充质干细胞氧化应激损伤的影响及机制研究

目的研究三甲氧苄嗪(TMZ)对脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)氧化应激凋亡的影响及其机制。方法使用双酶消化获得SD大鼠脂肪组织的ADSCs,进行流式细胞学鉴定和多向分化潜能评估;应用过氧化氢(H_2O_2)诱导的ADSCs损伤凋亡模型,使用不同浓度的TMZ(250μmol/L、500μmol/L)干预氧化应激损伤的过程;Hoechst 33342染色定性分析凋亡细胞形态;JC-1线粒体膜电位染色和线粒体电镜检测观察TMZ作用下线粒体损伤逆转情况;Western blot检测TMZ对线粒体凋亡通路蛋白的影响;通过检测活性氧簇(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平评价TMZ对ADSCs抗氧化能力的作用。结果获取的ADSCs,阳性表达CD29和CD90抗原,低或不表达CD34、CD45及CD31;ADSCs能够成功被诱导分化为脂肪细胞和骨性细胞;H_2O_2处理ADSCs,细胞凋亡数量增加,线粒体膜电位降低,线粒体结构破坏崩解,保护性凋亡蛋白(Bc12)表达下降,凋亡蛋白(Bax、Bad、Caspase3)表达上调;胞内ROS含量与MDA的质量摩尔浓度上升,SOD的活性和GSH的质量摩尔浓度降低。TMZ对ADSCs有浓度依赖性的保护作用,可降低H_2O_2诱导的细胞凋亡,逆转线粒体低电位,减轻H_2O_2对线粒体结构的损伤,提高Bc12的表达和下调Bax、Bad及Caspase3的表达,减低过量的ROS和MDA,恢复SOD和GSH的抗氧化系统功能。结论 TMZ通过调控保护性蛋白的表达和提高内源性抗氧化能力,提高ADSCs的存活率,从而逆转氧化应激损伤。

自噬在疾病中的双重作用

自噬是细胞的一种正常的生理活动,参与细胞内损伤的蛋白质和亚细胞器经溶酶体途径降解的过程。自噬可以抵御外界的不良环境,在多种疾病中起着重要作用。近年来,大量研究表明自噬在细胞新陈代谢和生理功能上有双重作用,在疾病发生的不同时期,自噬起到不同的作用。通常情况自噬可以及时的清除细胞内损伤的蛋白质,作为一种细胞的保护机制,但是自噬的持续活化,导致细胞内大量蛋白质的降解,使细胞无法维持其基本结构,最终将导致细胞坏死或凋亡。自噬、凋亡和坏死的转化,很有可能受到p53、Bcl-2、Beclin-1、ATG5、TG2及p62等信号分子调控。肝脏和心脏是维持人体生命活动的重要器官,自噬在脂肪肝、肝硬化、心肌梗塞及心脏衰竭等疾病中扮演着重要的角色。本文总结了自噬、凋亡及坏死的相互关系,自噬在疾病中的双重作用,并重点介绍自噬在肝脏和心脏疾病中的作用。

Sirt1和Sirt3在阿霉素诱导的心脏损伤中的作用

蒽环类化疗药物,如阿霉素是目前许多肿瘤的重要治疗手段之一,但是此类化学药物容易产生心脏毒性。阿霉素治疗引起的急性或长期的心脏毒性受到了临床极大的关注。阿霉素诱导的线粒体功能障碍是阿霉素心脏毒性作用的重要机制,进而诱导活性氧增多、心肌细胞凋亡增加和心脏功能下降。Sirtuins是蛋白质去乙酰化酶,在低能量水平状态下,可被激活并活化相关转录因子,促进能量生成、改善心脏能量代谢。此外,Sirtuins还具有拮抗细胞氧化应激损伤的作用。Sirt1和Sirt3在心肌细胞中高水平表达,通过调节心脏线粒体功能在心力衰竭中起着重要的保护作用。现总结和讨论主要的Sirtuins家族成员Sirt1和Sirt3维持心血管稳态、拮抗阿霉素心脏毒性的作用,探讨Sirt1和Sirt3活化缓解蒽环类化疗药物的心脏毒性而不影响其抗肿瘤活性的可能性。

Ghrelin通过诱导细胞自噬加剧H9c2细胞缺氧-复氧损伤

用CoCl_2诱导H9c2细胞缺氧损伤24 h后,再将培养基换成新鲜培养基,以模拟心肌细胞体外缺血-再灌模型,并在此基础上通过ghrelin对细胞自噬的调节来评价ghrelin对心肌细胞缺氧-复氧损伤的调节作用.用流式细胞技术和LDH活性检测细胞凋亡和坏死.WST-1检测细胞活力;DCFH2-DA探针评估细胞内活性氧水平;用Western blotting检测细胞自噬.研究结果表明ghrelin处理的缺氧-复氧损伤细胞活力降低、LDH活性、细胞凋亡、ROS含量及自噬增加,用3MA处理后可明显抑制细胞自噬,并伴随细胞活力的显著升高,因此,ghrelin通过加强细胞自噬加剧了CoCl_2诱导的H9c2细胞缺氧-复氧损伤.