IL-2淋巴间隙给药对宫颈癌荷瘤机体特异性T细胞免疫功能的影响

目的 :通过宫颈癌小鼠爪垫注射IL - 2及 5 -Fu后检测T细胞功能 ,探讨淋巴间隙给药在肿瘤细胞因子生物治疗中的效应。方法 :传代培养的小鼠宫颈癌细胞 (U14 )接种于Balb/c小鼠的左腋部皮下 ,构建荷瘤小鼠动物模型。荷瘤小鼠随机分为IL - 2组、 5 -Fu、IL - 2 +5 -Fu组及生理盐水对照。治疗 10天后分离小鼠脾脏细胞检测CTL细胞杀伤活性、淋巴细胞转化及IL - 2产生情况。结果 :CTL活性分别为 :对照组 :17 6 3±3 75 % ;IL - 2组 :2 7 34± 6 15 % ;5 -Fu组 :19 6 2± 5 17% ;IL - 2 +5 -Fu组 :2 4 0 1± 6 2 3%。淋巴细胞转化指数分别为 :对照组 :0 94± 0 13;IL - 2组 :1 92± 0 2 1;5 -Fu组 :1 30± 0 18;IL - 2 +5Fu组 :1 78± 0 2 8;IL- 2活性分别为 :对照组 :8± 2 1;IL - 2组 :12± 2 2 ;5 -Fu组 :9± 2 5 ;5 -Fu +IL - 2组 :13± 3 2。结论 :宫颈荷瘤小鼠爪垫注射细胞因子能显著性提高荷瘤机体的特异性细胞免疫功能。

妊娠期肝内胆汁淤积症母-胎间免疫耐受的探讨

目的初步探讨ICP发病机制中的母—胎间的免疫耐受现象。方法采用单向混合淋巴细胞反应法对照研究20例ICP患者(研究组)及正常孕妇(对照组)的母体淋巴细胞对已灭活的胎儿单个核细胞(PBMC)反应的增殖情况。结果母体淋巴细胞与已灭活的胎儿脐血中的单个核细胞单向混合淋巴反应中,ICP患者组的母体淋巴细胞的增殖程度显著高于正常组。结论(1)在ICP患者中母-胎间的免疫抑制较正常孕妇是减弱的。(2)ICP患者母-胎间免疫耐受失衡可能是ICP发病的重要机制之一。

雪旺细胞复合细胞外基质凝胶移植对神经元逆行性死亡保护作用的研究

目的 雪旺细胞 (SC)和细胞外基质 (ECM)凝胶复合 ,修复周围神经缺损 ,研究 SC的成活和对背根神经节内神经元逆行性死亡的保护作用。 方法 1将 SC制成 1× 10 8/ ml的 ECM凝胶后 ,置入 PL A中空纤维管中 ,修复大鼠 10 mm坐骨神经缺损 ,以单纯 ECM凝胶组和生理盐水组作为对照。术后 8、 12周 ,组织学检测 ,评价其效果。 2将Brd U标记的 SC复合 ECM凝胶后 ,置入 PL A中空纤维管中 ,修复大鼠坐骨神经缺损 ,术后 3、6周取材 ,Brd U免疫组织化学染色 ,观察 SC存活情况。 结果 1SC和 ECM凝胶复合移植 ,多数细胞可存活至 3周 ,部分细胞可存活至 6周。2 SC和 ECM凝胶复合组、ECM凝胶组 ,L5背根神经节内成活的神经元数量分别是健侧的 83.5 %和 81.3% ,显著高于单纯生理盐水组的 72 .9% (P<0 .0 5 )。 结论 SC和 ECM凝胶复合移植 ,多数细胞能成活并能使背根神经节内 83.5

TAP和HLA-Ⅰ类抗原在人肝细胞癌中的表达

为探明肝细胞癌 (HCC)组织中抗原Ⅰ类递呈途径的存在状况 ,采用免疫组织化学技术对 3 0例HCC和2 8例癌旁组织中TAP与HLA -Ⅰ类抗原的表达进行了检测。结果显示 ,HCC和癌旁组织基本上都有较强的TAP和HLA -Ⅰ类抗原的表达 ,两者无明显差异 (x2 <0 0 2 ,P >0 0 5 ) ,这表明HCC中抗原Ⅰ类递呈途径可能基本正常 ,胞毒性T细胞 (CTL)能够杀伤HCC细胞 。

艾灸对实验性类风湿关节炎滑膜细胞原癌基因c-fos和c-myc mRNA表达的影响

目的 观察艾灸对实验性类风湿关节炎滑膜细胞原癌基因 c- fos、c- myc m RNA表达的影响 ,初步探讨艾灸对 RA滑膜细胞内分子信号传导的调控。方法 在日本大耳白兔右后足踝关节部皮内注射福氏完全佐剂造模 ,经过艾灸治疗 ,通过半定量 RT- PCR测定 c- fos和 c- myc m RNA的表达量。结果 治疗组 c- fos和 c- myc m RNA表达量显著低于造模组 (P<0 .0 1 )。结论 艾灸治疗能够降低 c- fos和 c- myc m RNA的表达 ,影响生长因子信号传导系统。

人黑素细胞培养最佳条件的选择和生物学鉴定

观察人黑素细胞分离培养的最佳条件,为研究色素性疾病奠定基础。采用改良的胰蛋白酶消化法培养黑素细胞;用多巴染色、Fontana银染、S-100免疫组化染色鉴定黑素细胞;用透射电镜观察黑素细胞超微结构。用改良的黑素细胞培养法,可得到较多的黑素细胞,未见成纤维细胞、角质形成细胞污染,鉴定结果表明为黑素细胞。超微结构显示黑素细胞内与合成功能有关的细胞器非常丰富。采用改良的胰蛋白酶消化法分离表皮和真皮,用MCDB153培养液,添加适当浓度的生长因子,能在体外成功地培养黑素细胞,且方法简单,成功率高。

马拉色菌与人角质形成细胞株共同培养液对培养人黑素细胞生长及酪氨酸酶mRNA表达的影响

目的:观察不同马拉色菌与人角质形成细胞株共同培养液对培养人黑素细胞生长及酪氨酸酶mRNA表达的影响,探讨花斑癣的色素改变是否与马拉色菌的不同菌种有关。方法:将球形、钝形、糠秕、合轴马拉色菌分别与人角质形成细胞株共同培养,24 h后收集上清液,按一定比例加入黑素细胞培养体系中继续培养24 h:①用四甲基偶氮唑兰比色法观察对黑素细胞生长的影响;②用实时荧光定量PCR法测定黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达。结果:各共同培养液对黑素细胞生长无明显影响,但除球形马拉色菌与人角质形成细胞共同培养液可上调黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达(P<0.05)外,未见其它种马拉色菌与人角质形成细胞株共同培养液对黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达有影响。结论:球形马拉色菌与人角质形成细胞株共同培养液刺激黑素细胞后,能提高酪氨酸酶mR-NA的表达,该菌可能与花斑癣的色素沉着有关。

小鼠黏附分子nepmucin在内皮细胞内循环机制的探讨

目的探讨nepmucin分子在内皮细胞内的循环途径。方法采用共聚焦荧光显微技术进行内在化实验,分别用4种细胞器标记蛋白抗体[Rab5/胞内体、LAMP-1/溶酶体、γ1-adaptin/外侧高尔基网络(TGN)以及LDLR/分选与循环胞内体]与抗nepmucin抗体双染色转染内皮细胞,观察nepmucin分子内在化后的分布情况。结果 Nepmucin分子出现在胞内体、TGN、溶酶体和分选与循环胞内体中。结论 Nepmucin的循环途径可能是经分选胞内体运输至TGN或循环胞内体,然后回到细胞膜;或是进入溶酶体被降解。

胎儿淋巴细胞在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用

目的:探讨胎儿淋巴细胞在ICP发病机制的可能作用。方法:采用单向混合淋巴细胞反应法对照研究20例ICP患者(研究组)及正常孕妇(对照组)的胎儿淋巴细胞对母体外周血的单个核细胞(PBMC),蜕膜组织可溶性抗原的增殖情况。结果:(1)胎儿脐血中的淋巴细胞与母体已灭活的单个核细胞单向混合淋巴反应中胎儿淋巴细胞的增殖程度显著高于正常组;(2)ICP患者胎儿脐血中的淋巴细胞对母体蜕膜组织的增殖反应程度显著高于正常组。结论:(1)胎儿淋巴细胞可能是ICP发病过程中主要的效应细胞之一。(2)ICP患者母-胎间免疫耐受失衡可能是ICP发病的重要机制之一。

小鼠nepmucin与CD31在内皮细胞内定位和循环途径的比较

目的:研究nepmucin和CD31分子在转染内皮细胞内的分布和循环,探讨nepmucin分子的循环机制。方法:采用激光扫描共聚焦荧光显微技术进行循环实验和内化实验,在nepmucin转染细胞(WT-F2)上,用特异性荧光标记抗nep-mucin抗体和抗CD31抗体检测循环和内化的nepmucin和CD31分子。结果:小鼠nepmucin与CD31分子一样地在内皮细胞内发生循环,但速率明显降低;两种分子在细胞内的分布不同,CD31分子主要沿细胞膜分布,而nepmucin则主要分布在胞质深处及少量分布在细胞膜上。结论:小鼠nepmucin与CD31分子在内皮细胞内的分布和循环机制截然不同。

DC-SIGN与病原感染

DC-SIGN是相对限制地表达于树突细胞上的膜分子,能结合人类免疫缺陷病毒、猴免疫缺陷病毒和Ebola病毒等,并且介导这些病毒在体内的感染,在病毒致病中发挥重要作用;同时它还可以作为ICAM-2、ICAM-3的受体,介导树突细胞在体内的转运和免疫突触的形成;最后,它还可以作为抗原识别受体,参与抗原呈递.最近报道,无鞭毛体利什曼原虫、登革病毒、结核分枝杆菌也能结合人类树突细胞DC-SIGN或DC-SIGN转染的细胞,进一步确立了DC-SIGN在树突细胞介导免疫反应中的关键作用.

常染色体显性高度近视一家系连锁定位分析

目的通过连锁定位分析，探讨一个中国原发性高度近视家系的致病基因与已报道高度近视相关连锁位点的关系。方法选择一个连续3代发病的常染色体显性高度近视家系，选取位于18p11．31，12q21-23，7q36，17q21-23，4q22-27，2q37．1，7p15．3，15q12-13，10q21.1这9个已报道的常染色体显性高度近视致病基因连锁位点的18个多态性微卫星标记物进行srR基因分型，采用两点法进行连锁分析。结果本家系受累者皆为高度近视，屈光度从-6．00D到-20．00D不等，符合常染色体显性遗传特征。分析显示此9个遗传标记位点与该家系致病基因均不连锁，比值比均〈-1。结论该家系存在一个新的致病基因连锁位点，需进一步实施全基因组多态性微卫星标记连锁分析以确定该家系致病基因的染色体定位。

曲尼司特对CsA慢性肾毒性大鼠AngⅡ和ET-1的影响

研究曲尼司特对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠的肾脏保护作用,发现曲尼司特能减低环孢素A慢性肾毒性大鼠血浆和肾组织中AngⅡ的含量,并下调肾组织中ET-1的表达.结果表明曲尼司特可能通过下调环孢素A慢性肾毒性大鼠血浆和肾组织中AngⅡ的的水平以及肾组织中ET-1的表达,减轻肾脏病理损害,发挥其肾脏保护作用.

抗细胞膜DNA抗体与其他自身抗体的检测及相关分析

目的分析抗细胞膜DNA(m DNA)抗体与其他自身抗体的相关性,评价其对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断意义。方法收集2015年1月-8月就诊的254例自身免疫性疾病患者血清,包括SLE 106例,类风湿关节炎(RA)80例,混合性结缔组织病(MCTD)32例,干燥综合征(SS)29例,多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)7例;另再收集20例正常对照者血清。分别用间接荧光免疫法检测抗m DNA抗体、抗双链DNA(ds DNA)抗体、抗核抗体(ANA)及抗角蛋白抗体(AKA),酶联免疫吸附测定法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,速率散射比浊法检测类风湿因子(RF),免疫印迹法检测抗Sm抗体。结果抗m DNA抗体在SLE中的阳性率为72.6%(77/106),显著高于RA[5.0%(4/80)]、MCTD[18.7%(6/32)]、SS[14.7%(4/29)]、PM/DM[0.0%(0/7)]以及健康对照组[0.0%(0/20)],差异有统计学意义(P<0.001);抗m DNA抗体对SLE诊断的灵敏度、特异度和诊断效率分别为72.6%、91.7%和84.3%;抗m DNA抗体与ANA、抗ds DNA抗体及抗Sm抗体显著相关(P<0.001),与抗CCP抗体、AKA及RF无相关性(P>0.05)。结论抗m DNA抗体与SLE相关自身抗体密切相关,对SLE诊断具有高度灵敏度和特异度。

Nutlin-3对人A375黑素瘤细胞生物学行为的影响及可能机制

目的 观察顺式咪唑啉衍生物nutlin-3对人A375黑素瘤细胞生物学行为的影响,研究其机制.方法 将A375细胞分为实验组和对照组,实验组细胞接受2.5、5、10 μmol/L nutlin-3处理,对照组细胞采用二甲基亚砜处理.分别于作用24、48、72 h后,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况;Western印迹检测p53蛋白表达的改变;流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞凋亡;Transwell法检测迁移性变化.采用重复测量的方差分析进行统计学检验.结果 2.5、5、10μmol/L nutlin-3处理A375细胞24、48、72 h后,MTT法显示不同时间点间的增殖抑制率差异有统计学意义（F=67.43,P＜ 0.01）,不同浓度间的抑制率差异有统计学意义（F=135.58,P＜ 0.01）,浓度越高抑制率越高;时间和浓度之间有交互作用（F=26.95,P＜0.01）.Western印迹、流式细胞仪、Transwell法检测显示,不同时间点之间A375细胞的p53表达、G2期细胞百分率、凋亡率、迁移抑制率差异均有统计学意义（F值分别为1255.00、831.38、809.45、1100.00,均P＜0.01）,除p53外,时间越长各项指标值越高;不同浓度间各项指标值差异均有统计学意义（F值分别为9196.00、267.99、723.83、1667.00,均P＜0.01）,浓度越高各项指标值越高;时间与浓度之间交互作用有统计学意义（F值分别为826.79、21.602、44.48、313.09,均P＜ 0.01）.结论 Nutlin-3可能通过p53蛋白积累途径抑制人A375细胞的增殖和迁移,促进细胞周期停滞和细胞凋亡.

p53在黑素细胞对抗紫外线或H2O2诱导的氧化应激中的作用

目的通过紫外线照射（UVR）或过氧化氧（H2O2）对人黑素细胞p53的表达影响，并使川p53激活剂顺式咪唑啉衍生物-3（nutlin3）和p53抑制剂（PFT-α）对人黑素细胞UVR或H2O2的氧化应激脱氧核糖核酸（DNA）损伤的影响，探讨p53在人黑素细胞对抗氧化应激中的作用。方法Western印迹法测定UVR、不同浓度H2O2、nutlin3和PFT-α处理后的人黑素细胞p53表达；单细胞电泳实验（彗星分析）测定nutlin-3或PFT-α对人黑素细胞UVR或H2O3氧化成激DNA损伤的影响；7-H2AX免疫荧光实验测定nutlin-3对人黑素细胞UVR氧化应激DNA损伤的影响。结果Western印迹结果屁示UVR、H2O2可以增加人黑素细胞总p53的表达，并且足伴随着15丝氨酸磷酸化t）53的增高而增高，nutlin-3和PFT—α分别增加和减少人黑索细胞内p53表达；墙壁分析显示．预先使用nutlin-3可以明显减少UVR或H2O2造成的DNA损伤的尾素，PFT—α明娃增加UVR或H2O3造成的DNA损伤的尾素，差异具有统计学意义（P〈0．05）；流式细胞仪分析最示预先使用nutlin-3可以减少UVR造成的7H2AX表达。结论p53在人黑素细胞对抗UV或H2O2诱导的氧化应激中起着重要的作用。

小鼠新型黏附分子nepmucin的研究进展

小鼠nepmucin是一种新型黏附分子，胞外区含有一个典型的粘蛋白样结构域和一个V型免疫球蛋白（Ig）结构域，广泛表达于除派氏结（PPs）外的外周淋巴组织和实质性器官，优先表达于各种组织的小血管内皮细胞。该分子可与淋巴细胞归巢的重要分子L-选择素（L—selectin）结合，分别通过粘蛋白样结构域和Ig结构域介导L—selectin依赖的淋巴细胞在血管内皮上的滚动、附着，促进淋巴细胞穿越（TEM）高内皮微静脉（HEV）内皮细胞。小鼠nepmucin与CD31分子在淋巴结HEY内皮细胞的分布相似，且同样发生循环，但其循环机制以及分子循环所发挥的生物学作用尚不清楚。

全反式维A酸对UVB照射的A375细胞酪氨酸酶代谢及铜锌超氧化物歧化酶的影响

目的 探讨全反式维A酸（ATRA）对中波紫外线（UVB）照射的人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶及铜锌超氧化物歧化酶（Cu/ZnSOD）的影响.方法 将培养的A375细胞分为6组：ATRA＋UVB组：A375细胞照射UVB后加入全反式维A酸；氢醌＋UVB组：照射UVB后加入氢醌；UVB组：仅照射UVB;ATRA组：A375细胞加入ATRA；氢醌组：A375细胞加入氢醌；阴性对照组：A375细胞只加入相应溶媒,既不照射UVB,也不加入药物.分别培养,于24 h、48 h和72 h测定黑素含量及酪氨酸酶活性；于培养24 h,Western印迹检测酪氨酸酶蛋白的变化,实时定量PCR法分别检测酪氨酸酶和Cu/Zn SOD在mRNA水平的变化.结果 UVB照射的A375细胞加入全反式维A酸后24 h、48 h、72 h黑素含量及酪氨酸酶活性均下降.UVB照射A375细胞后24 h酪氨酸酶蛋白及mRNA测定值分别为0.72±0.070、1.400±0.135,加入全反式维A酸24 h后酪氨酸酶蛋白及mRNA值分别为0.42±0.056（P＜ 0.01）、0.810±0.062（P＜ 0.01）；UVB照射A375细胞后24 h Cu/ZnSOD mRNA水平为0.323±0.066,加入全反式维A酸后Cu/ZnSOD在mRNA水平增高为0.625±0.103（P＜ 0.01）.结论 全反式维A酸能够通过酪氨酸酶途径抑制UVB辐射导致的A375细胞黑素含量增加,并可提高Cu/ZnSOD水平.