DNA条形码在中药破壁饮片物种鉴定的应用

目的:建立中药破壁饮片的DNA条形码鉴定方法。方法:通过提取15个品种的中药破壁饮片的基因组DNA,并利用DNA条形码鉴定技术中的ITS2和psb A-trnH两个片段进行物种鉴定。结果:ITS2可以成功地对这15个品种进行鉴定;psbA-trnH也可对大部分的样品进行鉴定。结论:说明DNA条形码技术在中药破壁饮片的物种鉴定上可以得到很好的应用;同时也验证了以ITS2为主,psbA-trnH为辅助的药用植物DNA条形码鉴定思路的正确性和可行性。另外,psbA-trnH的数据库也可能存在不足,需补充完善更全面的物种序列信息,以供日后的物种鉴定提供更全面的基因模板信息作为参考和对照。

改进的CTAB法提取32种中药破壁饮片DNA及物种鉴定

中药破壁饮片是由传统中药饮片经过气流破壁技术加工而成,已失去了原药材原有的外观性状特征,传统的鉴别方法已很难鉴别其真伪。本研究选用ITS2序列作为DNA条形码对32个中药破壁饮片品种进行研究,验证DNA条形码技术应用于中药破壁饮片上的可行性。通过提取32个品种的DNA、PCR扩增及双向测序获得ITS2序列,在中药材DNA条形码鉴定系统和NCBI数据库中进行比对。实验结果表明:32个品种通过改良的CTAB法均能成功提取DNA,PCR扩增及测序后均能得到高质量的ITS2序列。因此,基于ITS2序列的DNA条形码技术可有效地鉴定中药破壁饮片,为中药破壁饮片真伪鉴别提供有效手段。

黄芪破壁饮片的DNA条形码鉴别与黄酮类成分HPLC指纹图谱研究

目的:利用DNA条形码技术对黄芪破壁饮片进行物种鉴定,再建立其黄酮类成分HPLC指纹图谱,为其质量控制和鉴定提供依据。方法:提取15批样品的DNA进行序列分析和物种鉴定。物种鉴定后采用高效液相色谱法,色谱柱:Agilent ZORBAX SB-Aq C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.15%甲酸溶液梯度洗脱;流速0.6 m L/min;检测波长254 nm;柱温25℃;结果:经DNA条形码鉴定,实验所用的15批样品均被鉴定为蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao。在此基础上建立了15批样品的HPLC指纹图谱,标定11个共有峰,15批样品的相似度在0.9-1.0之间。结论:DNA条形码和指纹图谱两种方法可对黄芪破壁饮片进行物种鉴定和全面反映黄芪破壁饮片中的成分信息,可用于黄芪破壁饮片的真伪鉴定和批间一致性评价。

不同产地红景天破壁饮片、破壁粉体和传统饮片HPLC指纹图谱相关性研究

目的建立红景天破壁饮片(UGP)、破壁粉体(UP)及传统饮片(DP)的HPLC指纹图谱及其分析方法,为全面评价红景天破壁饮片的质量提供参考。方法通过HPLC采集10批次红景天传统饮片、破壁粉体及破壁饮片的指纹图谱,并对其进行相似度评价、主成分分析(PCA)和系统聚类分析(HCA)。结果建立了红景天破壁饮片、破壁粉体和传统饮片的HPLC指纹图谱,确定了18个共有峰;同一批次的红景天破壁饮片、破壁粉体及其传统饮片之间的指纹图谱相似度达0.99以上;通过PCA和HCA分析,可将不同产地红景天样品分为3类。结论所建立的指纹图谱分析方法稳定、可靠、重复性好,可为红景天破壁饮片的质量控制及评价提供参考依据。

黄芪破壁饮片4种黄酮类成分分析及重金属含量测定

目的评价黄芪破壁饮片的有效性和安全性。方法利用高效液相色谱法建立一种可以同时测定黄芪破壁饮片中4种黄酮类成分(毛蕊异黄酮葡萄糖苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素)含量的方法,同时采用电感耦合等离子体质谱法对黄芪破壁饮片中5种重金属(Cd、Cu、Pb、Hg、As)的含量进行监测。结果黄芪破壁饮片中4种黄酮类成分的线性关系良好(r≥0.999 5),加样回收率在98.6%~106.3%之间,方法的重复性和稳定性良好,表明该方法可用于黄芪破壁饮片的4种黄酮类成分含量的同时监测,可为黄芪质量控制提供更全面的参考;10批黄芪破壁饮片中5种重金属[镉(Cd)、铜(Cu)、铅(Pb)、汞(Hg)、砷(As)]的含量均符合相关限量规定。结论同时进行4种黄酮类成分分析及重金属含量测定,可以从有效物质基础和有害元素多个角度综合评价黄芪的质量和安全性。

黄芪破壁粉的粉体学性质

为尝试现代高分子材料科学的研究方法和技术,初步明确黄芪破壁粉粉体特性的表征指标及分析方法,以黄芪破壁粉为例,研究黄芪破壁粉粉体特性的表征指标及分析方法。制备10批次黄芪破壁粉,考察其粒径分布、堆密度、比表面积、休止角、色度的影响因素,确定黄芪破壁粉粉体指标测定的方法,建立黄芪破壁粉的粉体学指标。结果表明:建立的测定黄芪破壁粉粒径、比表面积、堆密度、流动性、色度的方法可以用于粉体测定,且最佳粒径分布在16.417~44.113μm之间,堆密度为0.17~0.28g/mL,比表面积为1.6448~2.5098m2/g,休止角平均值为48.87°,色度为87.22~89.57。

灯盏细辛破壁饮片指纹图谱研究

目的建立灯盏细辛破壁饮片的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,分析破壁饮片成品与其中间品、原料化学成分的相关性,为灯盏细辛破壁饮片整体质量评价提供依据。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇(A)-0.3%甲酸溶液(B),梯度洗脱;流速为0.6 mL·min^(-1);柱温为35℃;检测波长为335 nm。结果建立了含有13个共有特征峰的灯盏细辛破壁饮片指纹图谱。结论该方法专属性、精密度、稳定性、重复性较好,适用于灯盏细辛破壁饮片质量控制。