天津市畜间炭疽防控存在的问题及对策建议

炭疽是人畜共患细菌性传染病,是几千年来一直危害人类和动物的一种古老疾病,有作为生物恐怖袭击武器的风险,它的存在大大影响着人身安全和身体健康。基于此,本文就炭疽病的概念、天津市防控中存在的问题及对策建议进行探讨,以期为炭疽病的防控提供参考。

天津市生猪产业发展现状与对策建议

养猪业是天津畜牧业的主导产业,养猪业产值占畜牧业产值近1/2,为农业增效、农民增收、市场保供做出了重要贡献。受非洲猪瘟疫情影响,2019年天津生猪产能出现断崖式下跌,天津市综合施策,全力推进生猪稳产保供,取得显著成效。本文从天津生猪产业发展成效入手,分析当前形势,提出促进天津市生猪产业高质量发展的建议。

2型猪链球菌天津分离株的鉴定及其遗传特征分析

为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定其生长曲线、并按照文献方法进行溶血性试验、黏附/侵入试验和对小鼠的致病性试验,分析该SS2分离株特性。结果显示,TJS75菌株经TSB培养6 h~15 h可达对数生长期,对绵羊血红细胞(RBC)具有崩解效果,可黏附并侵入PK-15细胞(黏附率和侵袭率分别为5.16%和7.90%),且感染TJS75株的BALB/c小鼠出现不同程度的行动迟缓、呼吸急促、精神萎靡和神经症状等,经测定其LD50为2.15×107cfu/mL。进一步采用高通量测序,并预测其毒力基因,分析该菌株的遗传特征,结果显示,TJS75菌株基因组全长2368195 bp,GC含量40.88%,含有2299个编码基因,其中有1822、1830和1077个基因分别注释于GO、COG和KEGG数据库,携带的16S r RNA基因序列与国内分离的SS强毒株98HAH33和05ZYH33的亲缘性较近,毒力基因的预测结果显示该菌株携带499种毒力相关基因(编码173种毒力相关因子),依据功能分类,这些毒力基因参与SS2的黏附和侵袭、溶血、促进铁转运、自溶酶的合成、降解胶原酶、唾液酸的合成等。本研究首次分离到携带MRP毒力因子的ST25型SS2,为深入开展SS2 TJS75株的致病机制研究提供了科学依据。

饲喂复合益生菌对湖羊粪便微生物多样性的影响研究

为研究饲喂复合益生菌对湖羊粪便微生物多样性影响,试验选取4月龄、体重(34.6±0.65)kg的湖羊40只,按照“体重相近”原则随机分为对照组(CG组)和益生菌组(EG组),每组20只。CG组和EG组分别饲喂全混合日粮,全混合日粮+复合益生菌,试验期60 d。试验结束后,每个处理随机选取10只湖羊,采集直肠末端粪样,利用16S rDNA技术进行测序分析。结果表明:(1)饲喂复合益生菌可以显著降低湖羊的腹泻率(P<0.05)。(2)按OTU聚类分析,EG组OTU(599个)高于CG组(466个),且EG组的Ace指数、Chao1指数和Shannon指数均显著高于CG组(P<0.05),Simpson指数两组差异不显著(P>0.05)。(3)门水平上,EG组厚壁菌门、拟杆菌门、螺旋菌门、疣微菌门和纤维杆菌门的相对丰度高于CG组,变形菌门低于CG组,但差异不显著(P>0.05);属水平上,两组优势菌属为UCG_005菌属、未分类的毛螺菌属、理研菌科RC9粪肠属和拟杆菌属,EG组高于CG组,但差异不显著(P>0.05)。(4)LEfSe分析结果显示,EG组较CG组有显著差异的7个,以颤螺菌属和理研菌科为主。综上所述,在本试验条件下,饲喂复合益生菌可以有效改善肠道微生物群落结构,促进肠道微生物的代谢功能。

基于WGCNA挖掘天津猴鸡裸颈性状相关基因

天津猴鸡是中国珍贵的裸颈鸡遗传资源,为在全基因组范围内探究其裸颈发育相关基因,本研究采集天津猴鸡杂交F_(1)代裸颈鸡和常羽鸡颈部皮肤组织用于转录组测序。加权基因共表达网络分析(WGCNA)结果显示,识别到的10个基因模块中只有蓝绿色(turquoise)和蓝色(blue)基因模块与裸颈表型显著相关,共计583个基因;GO功能富集分析富集到脂滴组织、甘油三酯储存负调控以及肌肉收缩等脂肪和肌肉相关生物学过程等条目;KEGG通路分析也富集到多条脂肪代谢相关通路,包括PPAR信号通路和甘油酯代谢等;蛋白质互作网络分析结果显示ACTN2基因编码的蛋白质的连通性最高,其次是MYL10基因编码的蛋白质,另外,还发现多个密切参与毛囊发育的基因,包括SOX9和PPARGC等。本研究结果将为进一步揭示并完善鸡裸颈的形成和发育奠定基础,同时对天津猴鸡的保护、开发和利用具有重要意义。

不同出生季节对天津地区荷斯坦牛泌乳性能的影响

旨在研究出生季节对荷斯坦牛泌乳性能的影响。本研究收集筛选天津市2020—2023年5个牧场9 515头奶牛的128 346条DHI测定记录,包括出生日期、胎次、日产奶量、乳脂率、乳蛋白率、305天产奶量等数据,运用SPSS22.0软件中的一般线性模型分析不同出生季节、不同胎次、不同场、出生年份等效应对泌乳性能的影响;使用wood模型拟合不同出生季节不同胎次的泌乳曲线,以出生季节为自变量,以泌乳曲线拟合所得参数计算二级参数:泌乳高峰日、高峰产奶量、泌乳持续力为因变量,运用单因素方差分析法分析不同出生季节对各胎次奶牛泌乳性能的影响。不同出生季节、不同胎次、出生季节×胎次互作对泌乳性能均有极显著影响(P<0.01);冬季出生牛只1胎及2胎时日产奶量较其它季节出生牛只高,差异显著(P<0.05);夏季出生牛只不同胎次时平均乳脂率及平均乳蛋白率较其它季节出生牛只高,2胎、3胎及以上时差异显著(P<0.05);冬季出生牛只1胎次时305天产奶量和成年当量显著高于其它季节出生牛只(P<0.05),秋季出生牛只2胎次及3胎次时305天产奶量和成年当量显著高于其它季节相应胎次牛只(P<0.05);秋季出牛只不同胎次时泌乳高峰日到来最早,秋季出牛只2胎、3胎及以上牛只高峰奶量最高。天津地区荷斯坦牛出生季节、胎次、出生场及出生季节×胎次互作效应对泌乳性能均有极显著影响;秋季出生牛只2、3胎次时305天产奶量最高、泌乳高峰到来最早、高峰奶量最高。

富马酸与肉桂醛联用调节产肠毒素型大肠杆菌诱导猪肠上皮细胞氧化应激的分子机制

本试验旨在研究富马酸(FA)与肉桂醛(CA)联用调节产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)K88诱导猪肠上皮细胞IPEC⁃J2氧化应激的分子机制。试验选用IPEC⁃J2细胞建立氧化损伤模型,用不同浓度FA和CA处理IPEC⁃J2细胞12和24 h,并用CCK⁃8法检测细胞活力,确定最佳处理浓度和时间;以最佳处理浓度的FA和CA预处理细胞,ETEC K88感染细胞3、6、12和24 h,检测其活菌黏附率,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞因子含量和抗氧化指标,并用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定热休克蛋白70(Hsp70)和核因子-κB(NF⁃κB)信号通路相关基因mRNA相对表达量。结果表明:1)FA和CA的最佳处理浓度分别为1.00 mg/mL和1.00μL/mL,最适培养时间为12 h。2)添加FA和CA可有效抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,当ETEC K88感染细胞3 h时其黏附率显著下降(P<0.05),6、12和24 h时极显著下降(P<0.01)。3)添加FA和CA可极显著降低ETEC K88感染细胞中促炎性细胞因子白细胞介素-8(IL⁃8)和肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)含量(P<0.01),极显著提高抗炎性细胞因子白细胞介素-10(IL⁃10)和转化生长因子-β(TGF⁃β)含量(P<0.01)。4)ETEC K88通过激活NF⁃κB信号通路诱导IPEC⁃J2细胞氧化损伤,添加FA和CA可上调Hsp70 mRNA相对表达量并抑制NF⁃κB信号通路缓解IPEC⁃J2细胞氧化应激。5)添加FA和CA可显著提高ETEC K88感染细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性(P<0.05),极显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0.01)。综上所述,FA与CA联用可调节炎性细胞因子和氧化应激蛋白平衡并抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,其可能是通过上调Hsp70抑制NF⁃κB信号通路,增强IPEC⁃J2细胞的抗氧化和抗炎能力,从而缓解ETEC K88诱导的IPEC⁃J2细胞氧化应激。

敌草快诱导肉鸡氧化损伤模型的建立及其分子机制研究

旨在建立敌草快诱导的肉鸡氧化损伤模型,并初步揭示其分子机制。将160只1日龄肉鸡随机分为4组,对照组(C)、低剂量组(T1)、中剂量组(T2)和高剂量组(T3)组,每组4个重复,每个重复10只。在第16日龄(第一阶段)时,每个重复抽取5只鸡,第37日龄(第二阶段)时抽取剩余5只鸡,称取肉鸡体重,计算每组平均体重,腹腔注射敌草快。T1、T2和T3组分别腹腔注射5、10、20 mg·kg^(-1)的敌草快,对照组注射相应剂量的生理盐水。两次注射后的当天和第5天,每个重复抽取2只,采血并取样。结果表明:两次注射敌草快后,与对照组相比,1)试验组肉鸡精神沉郁、饮食减少,T3组注射后6 h有2只鸡出现死亡,注射后72 h和96 h试验组肉鸡体重均极显著降低(P<0.01);2)T2和T3组血清中二胺氧化酶(DAO)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性均极显著(P<0.01)升高;3)T2和T3组血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均极显著降低(P<0.01),丙二醛(MDA)水平均极显著升高(P<0.01),第二阶段T3组血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.05);4)试验组各组血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量均极显著升高(P<0.01);5)试验组出现炎性细胞浸润,部分肝细胞空泡样变,细胞质疏松明显,且各肠段绒毛脱落较为严重;组织学评分显示,与对照组相比,T2组与T3组肝脏和小肠评分均极显著升高(P<0.01),除第二阶段十二指肠评分外,T1组与对照组相比无显著差异;6)各试验组肉鸡肝脏和空肠中ZO-1和OCLDN mRNA表达量均极显著降低(P<0.01);7)肝脏中T2组HO-1 mRNA表达量显著低于T1组(P<0.05);空肠中T2组和T3组Nrf2和HO-1 mRNA表达量较T1组均极显著降低(P<0.01)。综上所述,本研究成功建立敌草快诱导的肉鸡氧化损伤模型,且以10 mg·kg^(-1)的注射剂量为建立氧化损伤模型最为适宜,同时发现敌草快可能通过Nrf2/HO-1信号通路来诱导炎症相关因子生成且抑制抗氧化酶的表达,引起肉鸡肠道屏障损伤,从而引起肉鸡炎症反应。

利用CRISPR/Cas9技术构建RAG1基因敲除免疫缺陷猪模型的研究

为了利用显微注射一步法构建RAG1基因敲除的免疫缺陷猪模型,试验利用CRISPR/Cas9技术针对猪的RAG1基因设计并筛选出高效的sgRNA,与体外转录的Cas9 mRNA按照4∶6比例混合后显微注射到猪体外受精的受精卵中,随后将基因编辑的受精卵移植到受体母猪输卵管内;仔猪出生后采集耳缘皮肤组织提取基因组进行PCR扩增、T7核酸内切酶Ⅰ酶切鉴定,以及利用Sanger法测序鉴定编辑后基因型;监测基因敲除的免疫缺陷仔猪在普通环境的生存周期;对死亡的仔猪进行剖检,采集胸腺和脾脏等免疫器官进行组织学分析。结果表明:通过在猪成纤维细胞系水平上进行RAG1基因敲除效率的筛选,筛选出针对猪RAG1基因第2外显子高效敲除的sgRNA序列,通过对猪受精卵胞质显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物,获得2头RAG1基因敲除免疫缺陷仔猪,经鉴定发现RAG1基因的第2外显子碱基序列中有1 bp插入,造成移码突变,破坏了RAG1基因功能,致使仔猪免疫系统缺陷。出生的2头免疫缺陷仔猪在普通饲养环境的存活时间分别为19 d和33 d。RAG1基因敲除的免疫缺陷仔猪胸腺缺失,脾脏发育不良,无法在正常饲养环境中长时间存活。脾脏结构紊乱,出现炎症细胞浸润等免疫系统异常。说明通过CRISPR/Cas9技术进行显微注射可获得RAG1基因敲除的免疫缺陷猪模型。

基因芯片在奶牛遗传育种中的应用

基因芯片是微阵列技术应用中的一种,可以用于检测待测基因的位置、含量、类型等,并具有高通量、高灵敏度和高特异性的特点。该文综述了基因芯片在奶牛遗传育种中的应用及其重要性,阐述了基因芯片在奶牛群体遗传学研究、全基因组关联分析及基因组选择等方面的研究进展,为奶牛群体遗传改良以及遗传资源的挖掘利用提供参考。

丁香酚对畜禽肠道健康的影响及其在畜禽生产中的应用

肠道是畜禽营养物质消化吸收以及发挥免疫作用的重要器官。肠道功能屏障是影响畜禽肠道健康的重要内因。近年来,营养干预逐步成为预防疾病和改善畜禽肠道健康的可持续方法。丁香酚作为一种天然植物提取物,具有抗炎、抗病毒、抑菌等生物活性。文章就丁香酚改善肠道功能屏障及其在畜禽生产中的应用进行综述,旨为阐明丁香酚在改善畜禽肠道健康、提高畜禽生产性能方面的作用。

天津地区芦苇营养成分变化规律研究

为探索天津地区芦苇的营养成分变化规律,为芦苇饲料化利用奠定基础,试验采集天津主要芦苇产地不同生长时期的芦苇,并对其常规营养成分进行测定。结果表明:从展叶期到枯叶期,天津各地芦苇的粗蛋白质(CP)、粗灰分、钙(Ca)和磷(P)含量呈下降趋势;干物质(DM)和酸性洗涤木质素含量呈上升趋势;中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维呈降低—升高的趋势;总能(GE)和粗脂肪(EE)含量呈下降—升高—下降的趋势。抽穗期芦苇的DM含量、CP含量、NDF含量、Ca含量和P含量与生长后期无显著性差异(P>0.05),EE含量和GE含量与开花期无显著性差异(P>0.05),且达到最高水平。综合芦苇的营养价值和适口性等因素分析,抽穗期芦苇饲料化开发利用的潜力最大。

卫矛醇通过调节Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路缓解脂多糖诱导的猪肠道上皮细胞损伤

本试验旨在通过构建猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)经脂多糖(LPS)刺激后细胞损伤模型,揭示卫矛醇(DUL)对LPS处理后的IPEC-J2细胞屏障受损和炎症损伤的缓解作用及其可能的分子机制。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测IPEC-J2细胞活力,以确定LPS造模浓度(150μg/mL)和最佳DUL处理浓度(200μmol/L)。试验设3个组:对照(CON)组、LPS组和DUL组。IPEC-J2细胞贴壁后,CON组先用完全培养基处理24 h,然后用DMEM培养基处理24 h;LPS组先用完全培养基处理24 h,然后用含有150μg/mL LPS的DMEM培养基处理24 h;DUL组先用含有200μmol/L DUL的完全培养基处理24 h,然后用含有150μg/mL LPS的DMEM培养基处理24 h。观察各组IPEC-J2细胞生长状态,划痕试验评价细胞的迁移和增殖能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测屏障和炎症相关基因的mRNA和蛋白相对表达水平。结果表明:1)在IPEC-J2细胞上,确定200μmol/L的DUL为最佳处理浓度,150μg/mL的LPS为有效致炎浓度。2)相较于LPS组,DUL预处理缓解了细胞密度降低、细胞空泡增多、细胞边界不清晰的情况。3)相较于LPS组,DUL预处理显著增加了细胞迁移距离和细胞迁移面积(P<0.05)。4)相较于LPS组,DUL预处理显著升高了屏障相关基因闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(OCLN)、封闭蛋白1(CLDN1)的mRNA和蛋白相对表达水平及黏蛋白2(MUC2)、大肿瘤抑制激酶1(LATS1)、YES相关蛋白1(YAP1)的mRNA相对表达水平(P<0.05)。5)相较于LPS组,DUL预处理显著降低了通路相关基因髓样分化因子88(Myd88)、核因子-κB抑制蛋白-α(IκB-α)、核因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA和蛋白相对表达水平和Toll样受体4(TLR4)的蛋白相对表达水平以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-18(IL-18)的mRNA表达相对表达水平(P<0.05)。由此可见,DUL通过下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路相关蛋白表达,调节炎症因子分泌,提高紧密连接相关基因表达,缓解LPS引起的IPEC-J2细胞屏障损伤和炎症反应。

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究

为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示:Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48~72 h病毒滴度达到峰值108.625 TCID_(50)/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD_(50)为103.000 TCID_(50)/0.2 mL。以10^(7.676) TCID_(50)的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^(7.676) TCID_(50)/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD_(50)的Y17215-1株进行攻毒,活毒和灭活疫苗的保护率均为100%。以上结果表明:Y17215-1株具有很好的体外增殖特性和免疫原性,可以作为候选疫苗毒株。

花椒籽对蛋鸡生产性能、血清指标及蛋品质的影响

试验旨在研究饲粮中添加花椒籽对蛋鸡生产性能、血清指标和蛋品质的影响。试验选择42周龄的京粉6号蛋鸡360只,随机分为2组,每组6个重复,每个重复30只。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组(ZBMS组)饲喂使用2%花椒籽替代基础饲粮中的玉米的饲粮。预试期7 d,正式试验期28 d。结果显示:与CON组相比,ZBMS组第1~14、15~28、1~28 d的平均蛋重显著提高(P<0.05),软破蛋率显著降低(P<0.05);ZBMS组蛋鸡血清谷草转氨酶(AST)活性及白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)水平均显著降低(P<0.05),白细胞介素-4(IL-4)水平、总抗氧化能力(T-AOC)均显著提高(P<0.05)。与CON组相比,ZBMS组第28 d时的蛋黄色泽显著提高(P<0.05);ZBMS组鸡蛋中棕榈油酸、亚油酸、α-亚麻酸、山嵛酸和二十二碳六烯酸(DHA)的含量均显著提高(P<0.05),肉豆蔻酸、十七碳酸、硬脂酸、反油酸、油酸、二十碳一烯酸、附子酯酸和花生三烯酸的含量均显著降低(P<0.05)。研究表明,使用2%花椒籽替代玉米可增强蛋鸡免疫力和抗氧化能力,提高蛋重,降低软破蛋率,提升蛋黄色泽和蛋黄比率,增加鸡蛋中多不饱和脂肪酸的含量。

京津冀地区猪繁殖与呼吸综合征流行特点及防控建议

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine respiratory and reproductive syndrome,PRRS)俗称“猪蓝耳病”,临床以母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪群呼吸道症状为主要特征。该病1987年在美国东南部首次报道,之后迅速扩散至美国主要养猪地区和加拿大。1990年和1991年该病相继在欧洲和亚洲暴发和流行。

PEDV、TGEV与PDCoV S蛋白表位基因三联疫苗的构建及其鉴定

[目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T细胞表位进行预测分析,构建新的表位肽段,命名为PPT,通过ExPASy、VaxiJen、TMHMM、SOPMA、SOLpro和AlphaFlod2等在线软件对PPT进行生物信息学分析,并利用C-IMMSIM在线软件对其免疫反应进行模拟。通过T2A将PPT与PEDV的COE序列、TGEV的SAD序列及PDCoV的CTD序列连接并构建至真核表达载体pEGFP-N1,经PCR和双酶切鉴定正确后,将获得的重组质粒转染HEK293A细胞,经DAPI染色、CCK8、RT-PCR及Western blotting试验验证重组质粒在体外表达情况。[结果]构建的表位蛋白PPT由17条表位肽段组成,经生物信息学软件分析,该蛋白为非跨膜蛋白,结构稳定,具有抗原性和可溶性,亲水性高,无过敏性。C-IMMSIM结果显示,PPT能引起机体树突状细胞(DC)增加,B、T细胞免疫反应,刺激免疫球蛋白IgG、IgM和细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平升高。重组质粒经PCR和双酶切鉴定结果显示,分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp出现特异性目的条带,与预期相符;重组质粒转染HEK293A细胞后,可见绿色荧光;RT-PCR扩增分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp处获得与目的基因大小相符的条带;CCK-8检测结果表明,重组质粒对细胞均无明显毒性作用;Western blotting检测结果显示,分别在31.7、16.1、37.9和27.5 ku处出现与目的蛋白分子质量大小一致的条带,重组质粒成功在HEK293A细胞中表达。[结论]本研究基于计算机软件分析设计的PPT表位蛋白成功构建三联疫苗,且在体外表达,为评价PEDV-TGEV-PDCoV三联表位疫苗的免疫效果提供依据。

鸡传染性支气管炎和禽衣原体病的多表位DNA疫苗构建及其免疫原性研究

试验旨在设计和构建基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白和鹦鹉热衣原体(Cps)主要外膜蛋白(MOMP)的抗原多表位DNA疫苗,并分析其免疫原性。研究利用免疫信息学方法筛选出IBV S1蛋白和Cps MOMP蛋白的优势抗原表位,设计多表位基因M,并利用多种生物信息学软件对其进行预测分析;将M基因、S1和MOMP串联基因分别连接至真核表达载体pEGFP-N1并转染至DF-1细胞,利用Western blot检测目标蛋白的表达情况。将上述重组质粒肌内注射7日龄雏鸡,四免后检测免疫鸡血清中特异性抗体IgG、细胞因子及T淋巴细胞含量。结果显示:构建的表位蛋白结构稳定、免疫原性较好且无副作用;重组质粒pEGFP-M和pEGFP-S1-MOMP与预期大小相符;与pEGFP-N1组和PBS组相比,四免后,pEGFP-M免疫组鸡血清中抗IBV IgG和抗Cps IgG抗体水平极显著升高(P<0.01),与pEGFP-S1-MOMP组相当;pEGFP-M组鸡血清中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平,T淋巴细胞抗原CD3+、CD4+和CD8+含量均极显著高于pEGFP-N1组和PBS组(P<0.01)。结果表明,构建的多表位DNA疫苗pEGFP-M能够激发鸡的体液免疫和细胞免疫反应,为研制同时预防鸡传染性支气管炎和禽衣原体病的多表位疫苗奠定基础。

褪黑素缓解双酚A诱导的猪卵母细胞氧化应激的作用机制研究

本研究旨在探究褪黑素(MT)缓解双酚A(BPA)诱导的猪卵母细胞氧化应激的作用机制。将猪未成熟的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)分为3组,其中,对照组在常规培养液中体外成熟培养44 h,BPA组在含有75μmol/L双酚A的培养液中体外成熟培养44 h,BPA+MT组的COCs先在含BPA的常规培养液中体外成熟培养18 h,再转入含10-7 mol/L MT的体外常规培养液中继续培养至44 h。成熟培养结束后,检测各组卵子成熟质量和卵子内抗氧化基因和蛋白表达等相关指标。结果显示:与对照组相比,BPA组极体率降低(P<0.05),线粒体分布不均匀(P<0.05),抗氧化酶活力下降(P<0.05),细胞成熟相关基因表达下降(P<0.05),ROS、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平上升(P<0.05),Nrf2和HO-1蛋白水平和基因表达水平上调(P<0.05)。与BPA组相比,BPA+MT组的极体率提高(P<0.05),ROS和MDA水平降低(P<0.05),抗氧化酶活力提高(P<0.05),Nrf2和HO-1的蛋白和基因表达水平下调(P<0.05)。由以上结果可知,MT通过Nrf2/HO-1通路发挥作用,减缓了BPA诱导的猪卵母细胞氧化应激损伤。

富马酸和肉桂醛及其联合添加对817肉鸡生长性能、血清指标和肠道健康的影响

本试验旨在研究富马酸和肉桂醛及其联合添加对817肉鸡生长性能、血清指标和肠道健康的影响。选取600只1日龄健康817肉鸡,随机分为4个组,每组10个重复,每个重复15只。对照组(CON组)饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮的基础上添加600 mg/kg富马酸(FA组)、400 mg/kg肉桂醛(CA组)以及600 mg/kg富马酸+400 mg/kg肉桂醛(FC组)的饲粮。试验期42 d。结果表明:1)21~42日龄,与CON组相比,FA组和CA组肉鸡末重(FBW)和平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),FC组FBW和ADG极显著提高(P<0.01),FA组、CA组和FC组平均日采食量(ADFI)显著提高(P<0.05);1~42日龄,与CON组相比,FA组和CA组ADG显著提高(P<0.05),FC组ADG极显著提高(P<0.01)。2)与CON组相比,CA组和FC组肉鸡血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性显著降低(P<0.05),且FC组血清ALT和AST活性显著低于CA组(P<0.05)。3)与CON组相比,各试验组肉鸡血清免疫球蛋白M(IgM)和谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性显著均提高(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);其中,FC组血清MDA含量显著低于FA组和CA组(P<0.05),血清IgM和GSH含量以及SOD活性显著高于FA组和CA组(P<0.05)。4)21和42日龄时,与CON组相比,CA组和FC组肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度显著提高(P<0.05)。5)与CON组相比,各试验组肉鸡盲肠菌群Chao1指数均显著提高(P<0.05),CA组和FC组盲肠菌群ACE指数显著提高(P<0.05)。在门水平,各试验组肉鸡盲肠拟杆菌门相对丰度显著提高(P<0.05),盲肠变形菌门相对丰度显著降低(P<0.05);在属水平上,与CON组相比,各试验组盲肠乳杆菌属相对丰度显著提高(P<0.05),且FC组盲肠乳杆菌属相对丰度显著高于CA组和FA组(P<0.05)。综上所述,饲粮单独添加富马酸或肉桂醛及二者联合添加可以提高肉鸡ADG和抗氧化能力,提高血清IgM含量,改善盲肠菌群结构;饲粮单独添加肉桂醛及富马酸与肉桂醛二者联合添加还可以降低血清ALT和AST活性,改善肠道组织形态;与单独添加相比,富马酸与肉桂醛联合添加的效果更佳。