木瓜蛋白酶天然抑制剂筛选及在护肤品中的应用研究

选取化妆品常用的22种活性原料,分别利用紫外分光光度计法和SDS-PAGE法进行体外抑制木瓜蛋白酶活性实验;利用Franz扩散池和人体功效测试检验纤连蛋白透皮过程与抗皱功效,间接证明对木瓜蛋白酶的抑制效果。结果表明,金缕梅提取物抑制酶解反应获得的纤连蛋白浓度最高,其他依次为无患子提取物、海茴香提取物、燕麦提取物、高山火绒草提取物、卡瓦胡椒提取物,对纤连蛋白的透皮与改善眼角皱纹有显著性差异。

常压室温等离子体快速诱变选育丙酮酸高产菌株

本研究以产丙酮酸的光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)Tp19为出发菌株,采用常压室温等离子诱变系统(ARTP)进行诱变,根据CaCO3筛选平板透明圈与菌落直径比以及100孔板产酸量快速筛选丙酮酸高产突变株。最后通过摇瓶发酵复筛,选育出一株遗传稳定的突变株A214,丙酮酸产量达到37.43g/L,比出发菌株提高了13.69%。

重组角质细胞生长因子(KGF)的原核表达及优化

[目的]在原核表达系统中进行重组人角质细胞生长因子(KGF)的表达及优化。[方法]选取缺失N端23个氨基酸残基的KGF片段作为目的基因,按照大肠杆菌的密码子偏好性,将其进行密码子优化。使用BL21(DE3)菌株表达KGF(ΔN23)、SUMO融合的SUMOKGF(ΔN23)和Fh8-SUMO融合的Fh8-SUMO-KGF(ΔN23),并测试不同表达温度(37、23℃)对KGF(ΔN23)表达结果的影响。[结果]在BL21(DE3)菌株中,37℃表达时KGF(ΔN23),SUMO-KGF(ΔN23)和Fh8-SUMO-KGF(ΔN23)的表达量都较高,其中可溶性蛋白表达量KGF(ΔN23)<SUMO-KGF(ΔN23)<Fh8-SUMO-KGF(ΔN23)。降低诱导温度为23℃后,3种KGF的表达量都显著降低,但是可溶性蛋白的占比显著提高,均接近100%。[结论]降低诱导温度能够促进KGF的可溶性表达,但是总蛋白的表达水平显著下降;与可溶性标签蛋白融合表达能够提高KGF在37℃表达时可溶性蛋白占比,其中融合Fh8-SUMO标签的KGF表达量和可溶性蛋白占比较高。

小微企业上市融资障碍及上市前的财会准备

发展小微企业对调整国民经济结构、统筹城乡发展以及改革金融体制具有重要意义。本文对小微企业上市所面临的问题进行了剖析,从财会角度提出了上市前所应做的准备工作,以期对小微企业的上市融资提供借鉴。

人源磷脂酶PLA2异源可溶表达纯化及酶学分析

为实现人源磷脂酶A2的原核异源可溶表达,并对其进行纯化和初步的酶学性质分析。通过检索NCBI确定人源PLA2(PLA2G10),并将其构建于载体pET28a+上,并以麦芽糖结合蛋白(MBP)为促溶标签,成功构建载体pET28a-MBP-PLA2,转化E.coli BL21(DE3)后,经PTG低温诱导表达,SDS-PAGE鉴定后,确认其在上清中大量表达。根据蛋白的性质建立了一整套蛋白纯化工艺,包括Q柱洗脱,硫酸铵盐析,Phenyl柱纯化,Amylose柱纯化,分离纯化获得重组酶,SDS-PAGE测定该酶纯度大于90%。以卵磷脂为底物,酸碱滴定法测定其比活为127.04 U/mg,纯化得率48.8%,纯化倍数为10.3倍。酶学性质研究表明,该酶的分子量为56.5 kDa,最适反应温度为40℃,最适反应pH为8.0,是钙离子依赖酶,对PC亲和能力最强,Km值为12.2 mmol/L,V(max)为0.19 mmol/L/min。本试验建立的磷脂酶A2的异源表达、纯化体系,为其进一步的理论和工业研究奠定了基础。

重组人汗腺抗菌素蛋白的异源可溶表达、发酵优化及分离纯化研究

目的:实现人汗腺抗菌素(Dermcidins,DCD-1L)的原核异源可溶表达,并进行纯化及活性分析。方法:首先检索NCBI确定人DCD-1L的序列,构建载体并转化E.coli ER2566,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS-PAGE电泳进行鉴定。其次,通过单因素实验,对不同温度、转速和补料速度等发酵条件进行研究与优化,根据DCD-1L蛋白特性优化蛋白纯化工艺。最后采用质谱和牛津杯法对纯化的蛋白进行分子量和抗菌活性鉴定。结果:经SDS-PAGE凝胶检测,在上清中分子量处检测到条带,证明采用原核表达系统可实现人DCD-1L的可溶表达;通过单因素实验获得最佳DCD-1L的发酵条件为:37℃培养,转速400 r/min,开启蠕动泵以50 mL/30 min补料速度自动加入发酵罐中;研究还建立了包括超滤、Q柱洗脱和分子筛在内的一整套优化的蛋白纯化工艺,获得的产品纯度大于96%,总回收率18.4%;最后,通过牛津杯法检测,纯化的重组人DCD-1L在浓度为50μg/mL时,对表皮葡萄球菌这类革兰氏阳性菌较大肠杆菌具有更明显的抑菌活性。结论:本研究对重组人DCD-1L蛋白实现了原核可溶表达,并建立了稳定可靠的发酵、纯化工艺,并进行了初步的抗菌活性鉴定,为后续重组人DCD-1L蛋白的应用研究奠定了基础。

嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶在枯草杆菌中的表达及酶学性质

首先根据Thermopolyspora flexuosa的内切-1,4-β-木聚糖酶基因设计了引物,PCR扩增成功后进行酶切消化,连接载体质粒pHT43,经大肠杆菌DH5α扩增后,挑选阳性克隆,经菌体PCR及测序验证后,将基因序列测序正确的质粒大量抽提,经过转化导入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilius WB800N宿主,培养并经过1 mmol/L IPTG诱导表达后,发酵胞外上清经SDS-PAGE电泳证明重组蛋白质成功获得表达。其相对分子质量为27 kD,最适反应温度为80℃,最适反应pH为6.0。由此得知,分泌表达的嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶的枯草芽孢杆菌工程菌株构建成功,这为未来该酶的产业化生产奠定了基础。

基因共表达对人源LysoPLD异源可溶性表达、纯化及酶学性质的影响

目的:为实现人源溶血磷脂酶D(LysoPLD)的原核异源可溶性表达。方法:通过NCBI检索,确定人源LysoPLD基因序列(GenBank:L46720.1)。采用密码子优化后的序列,克隆至pET-28a表达载体中,采用共表达麦芽糖结合蛋白融合标签(MBP)和共表达促蛋白正确折叠分子伴侣触发因子Trigger factor(tig)两种方式提高LysoPLD蛋白在大肠杆菌中的异源可溶性表达,建立对应蛋白的纯化工艺包括离子柱纯化,硫酸铵盐析,疏水柱纯化,淀粉树脂柱(Amylose Resin)纯化,分离纯化获得的重组酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定蛋白纯度,以对羟基棕榈酸酯为底物对比两种蛋白的酶学性质。结果:成功构建载体pET28a-MBP-LysoPLD和pET28a-pTF16-LysoPLD,并获得工程菌BL21(DE3)-pET28a-MBP-LysoPLD和BL21(DE3)-pET28a-pTf16-LysoPLD。BL21(DE3)-pET28a-MBP-LysoPLD经0.6 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导过夜可获得上清表达的MBP-LysoPLD蛋白;BL21(DE3)-pET28a-pTf16-LysoPLD在含有0.5μg/mL L-Arabinose的LB培养基中培养,经0.1 mmol/L IPTG低温诱导表达,可获得可溶性表达的LysoPLD蛋白,经纯化,酶纯度可大于80%。以对羟基棕榈酸酯为底物,对比两种方法得到的蛋白的酶学性质,发现二者催化反应的最适温度、最适pH、最适Ca2+浓度、比酶活基本一致。结论:两种基因共表达方式都可实现人源LysoPLD的在大肠杆菌中的可溶性表达,且酶学性质基本相同。

化妆品常用增稠剂对表皮葡萄球菌和头状葡萄球菌生长的影响

考察了化妆品中增稠剂对2种皮肤常驻菌生长的影响。用拭子取样法在志愿者面部进行采样,16S rRNA测序进行菌落鉴定,用筛选出的头状葡萄球菌和购买的表皮葡萄球菌作为测试菌,用化妆品中7种常用增稠体系对测试菌进行抑菌测试。结果表明,不同增稠体系对2种菌的影响呈现不一致性,其中Aristoflex AVC、Aristoflex BLV和SEPIMAX ZEN体系对表皮葡萄球菌和头状葡萄球菌生长无显著性影响,汉生胶T和HEC体系能够明显促进2种菌的生长,Carbopol®Aqua SF-1 Polymer和ULTREZ 30体系对2种菌生长均有不同程度的抑制作用,其中ULTREZ 30抑制作用最强。以上7种增稠剂各有特色,可以根据产品的需求,选择性应用于不同的产品配方中。

来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶的分离纯化与酶学性质

耐热纤维素酶具有广泛的应用前景,本研究室在利.用大肠杆菌表达来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶基础上,建立了包括热处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子层析的纯化工艺,分离纯化获得单一组分的重组极端耐热β-1,4-内切纤维素酶(EGPh),SDS-PAGE测定该酶纯度大于90%,以CMC-Na为底物,DNS法测定比活22.3 U/mg,活性收率为73.3%,纯化倍数为45倍.酶学性质研究表明,该酶的分子量为43 KD,等电点(PI)为5.3,催化CMC-Na最适反应温度为95℃,最适反应pH为6.0,Km值为3.61±0.26 mg/ml.酶学稳定性研究表明EGPh在pH4.0～9.0、温度85℃下稳定.纯化的EGPh表现了极好的热稳定性,95℃时半衰期为8 h.

纺织用嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶在大肠杆菌中的重组表达、纯化与酶学性质

首先从Pyrococcus horikoshii中克隆出编码热稳定性的内切纤维素酶基因,以载体pet21a为表达质粒,构建重组质粒pet21a-1171,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys中进行表达,目的基因得到明显的可溶性表达,通过加热变性处理和离心后,重组酶纯度达到80%以上,随后对加热处理后的粗酶液进行简单酶活测定,结果表明,最适反应温度为95℃,与国外文献报道相一致,嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶成功得到重组可溶性表达。

补料技术在大肠杆菌高密度培养中的研究进展

补料技术是大肠杆菌高密度培养的重要技术.本文对补料技术在大肠杆菌高密度培养中应用的研究进展进行了综述,主要包括补料技术的种类、各类技术的优缺点等.

乙酰基四肽-11防脱发作用的研究

将乙酰基四肽-11应用于小鼠进行脱发研究。通过对C57BL/6雌性小鼠背部进行脱毛处理,实验组连续涂抹3个质量浓度梯度(10,20和30μg/mL)的乙酰基四肽-11水溶液18天,对照组涂抹生理盐水,观察小鼠背部毛发生长情况,HE染色进行组织学分析,并初步进行了志愿者试用评估。结果表明,一定质量浓度的乙酰基四肽-11可以预防小鼠脱发,避免毛囊微型化,同时可以维持小鼠表皮紧致。志愿者试用评估表明测试样品对所有志愿者都有防脱发效果,85%志愿者反馈头发密度变大。

AIMP1衍生肽的护肤功效研究

皮肤糖化反应是导致肤色暗黄、色斑、老化的一个重要因素,针对皮肤糖化问题,开发了一种生物活性多肽并进行护肤功效验证。AIMP1衍生肽(AdP)是由氨基酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白质1(AIMP1)衍生而来的寡肽,具有类AIMP1的多种生物活性。采用牛血清白蛋白(BSA)糖化和羰基化体系研究AdP的抗糖化效果,并对含AdP的样品进行了临床功效测试。结果表明:AdP可减缓BSA与葡萄糖的糖基化反应,减少蛋白质羰基的生成,具有浓度依赖性;皮肤角质层含水量显著提高27.32%,TEWL降低12.77%,R2值提高10.34%,ITA°值提高14.25%,皱纹面积减少12.14%,AdP可有效抑制蛋白糖化,具有提升屏障功能、祛黄提亮抗皱的功效。

嗜热内切-β-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达

首先通过引物设计扩增嗜热内切-β-1,4-葡聚糖酶基因,然后采用Not I和Xho I双酶切目的基因与载体pPICZα-A,通过T4连接酶连接后转化DH5α菌株,挑取阳性克隆进行测序,测序正确阳性克隆放大培养,大量提取质粒,并采用限制性内切酶Sac I线性化质粒,电转化感受态酵母细胞,经培养后挑选转化子分别对应点种到MM、MD平板,并利用ZeocinTM获得多拷贝重组子,最后经甲醇诱导,并于48、54 h取样,经SDS-PAGE分析,结果表明整合嗜热内切-β-1,4-葡聚糖酶的毕赤酶母工程菌株构建成功.

化妆品中薏苡仁提取物的功效及应用

人们在调理皮肤时,比较推崇使用安全性较高、温和无刺激且具备相应功效的提取物,将其加入化妆品中已是开发新品的关键。薏苡仁提取物的抗氧化、防晒、清除自由基、抑制酪氨酸酶活性、抗炎等功效显著,故此,本文就薏苡仁提取物的概述和主要成分,分析薏苡仁的使用功效,提出化妆品制作中使用薏苡仁提取物的具体应用及功效,意在为进一步研究化妆品中薏苡仁提取物的具体功效给予参考。

产异丁醇关键基因在大肠杆菌中表达的研究

【目的】改造大肠杆菌缬氨酸合成途径,使其能够代谢合成异丁醇。【方法】将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)1.2829的2-酮异戊酸脱羧酶基因(kivD)和醇脱氢酶基因(adhA)串联克隆到大肠杆菌DH5α宿主中表达。【结果】经过改造的宿主菌发酵24 h后异丁醇产量为0.12 g/L。酶活测定实验发现,kivD和adhA基因在宿主菌中均得到表达,但由于KivD的低表达量导致宿主菌最终的异丁醇合成能力偏低。通过研究温度和pH对KivD和AdhA酶活的影响,最终选定二者的最适温度为30°C,最适pH为6.5。【结论】通过向宿主菌导入外源异丁醇合成基因能够改造其自身代谢途径,从而合成异丁醇。

郑春阳:促进国产化妆品品牌高质量发展

2022年全国两会期间,全国政协委员、中国农工民主党党员、天津强微特生物科技有限公司董事长赴京参会,并向大会提交了“促进国产化妆品品牌高质量发展”的提案。郑春阳表示,国家统计局数据显示,2021年全国化妆品类消费品零售额增长14.0%,创九年来最大增幅。为满足人民对美好生活的向往,增强文化自信,进一步提升国产品牌对消费的拉动作用,有必要多措并举,促进国产品牌高质量发展。