基于有效性完整表达的白芍质量标志物研究

目的:基于中药质量标志物(Q-marker)有效性原则,采用“性-效-物”三元论研究思路,从药性(味)和药效角度揭示白芍Q-marker。方法:采用液相色谱-质谱联用法(LC-MS),解析白芍、炒白芍、赤芍化学物质组;在此基础上,通过分子对接方法,选择白芍中各结构类型代表化合物为配体小分子,通过与苦、酸味受体进行分子对接实验,预测白芍潜在药性(味)物质基础;采用网络药理学方法,通过SwissTargetPrediction、中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)等数据库预测化合物潜在作用靶点,并进行生物信息学分析,构建化合物-靶点-信号通路-药理作用-功效网络,进一步以体外抗炎药效筛选模型,验证白芍及关键化合物的抗炎药效作用,明晰基于药效的白芍物质基础,进而基于有效性完整表达结果确定白芍Q-marker。结果:共解析出白芍中42个成分、炒白芍中41个成分、赤芍中34个成分。其中单萜及其苷类化合物可能为白芍最主要的苦味物质基础,带有没食子酰基的鞣质类化合物可能为白芍最主要的酸味物质基础。网络药理学结果发现,白芍中17个成分通过作用于191个潜在靶点干预了165条相关通路,可发挥促进骨髓造血功能、抑制子宫收缩、抗炎、镇痛、保肝、抗高血压和抑制汗腺分泌等作用;验证实验表明,白芍中8个主要成分可通过下调白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α和一氧化氮等炎症因子的表达发挥抗炎作用。结论:初步确定芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷、儿茶素、五没食子酰葡萄糖及没食子酸为基于有效性完整表达的白芍Q-marker。

中药防治痔病作用机制研究进展

痔病是以肛门黏膜静脉丛发生曲张为主要特征的慢性疾病,随着病程延长会伴有肿胀疼痛、黏液流出等病理表现,临床上表现为患处瘙痒、作痛、便血等。手术是治疗痔疮的有效方法之一,能够缓解病人痛苦,根治性较高。但手术费用昂贵,术后容易出现出血、肛门狭窄等不适。中药可通过多靶点、多途径发挥治疗痔病的作用,其作用机制主要是调控机体内外炎症反应、减轻脂质过氧化反应、抑制基质金属蛋白酶表达、调控血管生成和上调纤维蛋白的表达等。目前,对痔病的机制研究正逐渐深化,但尚未系统性阐述痔病发病及中药改善的作用机制,综述相关研究对防治痔病具有十分重要的意义。

基于消肿定痛功效的三七粉质量标志物研究

目的探究三七粉发挥消肿定痛功效的质量标志物。方法首先,采用小鼠醋酸扭体实验,将ICR小鼠随机分成模型对照组、阳性对照阿司匹林组(0.12 g·kg^(-1))、三七粉低(1.1 g·kg^(-1))、中(2.2 g·kg^(-1))、高(4.4 g·kg^(-1))剂量组、三七总皂苷低(0.25 g·kg^(-1))、中(0.5 g·kg^(-1))、高(1.0 g·kg^(-1))剂量组,连续给药3天每日1次,第3天给药1 h后腹腔注射1%醋酸溶液,记录15 min内扭体次数。进一步采用LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型,探讨三七粉中的三七总皂苷及14个代表性单体成分对细胞上清液中NO、TNF-α和IL-6的含量影响。结果实验表明,与模型组比较,三七粉及三七总皂苷中、高剂量组均能显著减少扭体反应次数(P<0.05,P<0.01);三七总皂苷及14个化合物均能显著降低细胞上清液中NO、TNF-α、IL-6含量(P<0.05)。结论三七粉具有良好的抗炎、镇痛作用,其发挥消肿定痛的药效物质基础可能为三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷F2、人参皂苷Rk1、槲皮素、三七素。

三七粉质量标志物研究

三七为常用中药材,具有散瘀、止血,消肿定痛的功效。三七粉作为三七市场应用的主要形式之一,市场逐年增大。现行标准难以评价和控制三七粉“多重功效”的质量特点。本课题组在系统辨识三七粉化学物质组及其传递规律的基础上,采用网络药理学和体内、体外模型,研究并阐明了三七粉的活血、心肌与血管保护、止血以及消肿定痛的药效物质基础;进一步结合成分的特有性分析,确定了三七粉的质量标志物;在此基础上,建立了基于质量标志物的三七粉的指纹图谱及“一测多评”的多指标含量测定方法,为建立三七粉整体质量控制方法提供了理论与实验证据。

基于活血作用的三七粉质量标志物研究

目的探索三七粉活血作用的质量标志物。方法采集家兔血浆,采用体外凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)检测试剂盒观察三七粉主要成分对凝血系统的影响;收集家兔富含血小板血浆,以二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集,观察三七粉主要成分对血小板聚集率的影响;取家兔主动脉条,置于体外组织灌流系统中,以去氧肾上腺素诱导血管条收缩,观察三七粉主要成分对血管平滑肌收缩功能的影响。结果以蒸馏水溶解的三七总皂苷(PNS),与水溶剂组比较,可显著延长TT、APTT、PT,降低FIB含量(P<0.05、P<0.01),降低ADP诱导的血小板聚集率(P<0.01)。以5%二甲基亚砜(DMSO)溶解的单体成分,与5%DMSO溶剂组比较,人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、人参皂苷Rk1、三七皂苷R1、人参皂苷Rg_(2),可显著延长TT(P<0.05,P<0.01);人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rg_(2)、人参皂苷Rb1、槲皮素可延长APTT(P<0.05);人参皂苷Re、槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rb_(3),可显著延长PT(P<0.05);槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb_(3)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg_(2)可显著降低血浆FIB含量(P<0.05);人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rg_(2)、三七皂苷R1、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Rd和人参皂苷Rb1可显著降低ADP诱导的血小板聚集(P<0.05);人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd、三七皂苷R1、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg_(2)可明显扩张血管动脉条(P<0.05,P<0.01)。结论三七粉活血作用表现在抗凝、抗血小板聚集、扩血管等方面,人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rg_(2)、人参皂苷Rg_(3)、三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg_(1)、槲皮素等可能为三七活血作用的物质基础,可作为三七粉活血作用的质量标志物进一步研究。

基于止血作用的三七粉质量标志物研究

目的探索三七粉止血作用的质量标志物。方法兔血浆中分别加入三七素样品,采用凝血记录仪,依据试剂盒说明书,测定凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB);在兔富含血小板血浆中加入三七素药物样品后,再加入诱导剂二磷酸腺苷(ADP),采用比浊法,测定血小板聚集率;取离体兔主动脉条,体外组织灌流,以去氧肾上腺素诱导动脉条收缩,分别加入三七素、人参皂苷Rb_(2),观察血管条张力变化值。结果三七素500-1000μM可显著降低血浆TT、APTT;100-1000μM显著缩短血浆PT;50-2000μM可显著增加FIB含量;1000-2000μM时可显著增加血小板聚集率;三七素处于1μM浓度时,人参皂苷Rb_(2)在25μM浓度时可显著收缩血管动脉条。结论三七素是三七促凝、促血小板聚集,发挥止血作用的物质基础;三七素、人参皂苷Rb_(2)是三七缩血管发挥止血作用的物质基础。

基于心血管保护作用的三七粉质量标志物研究

目的探索三七粉心血管保护作用的质量标志物。方法采用CoCl_(2)制备心肌细胞(H9C_(2))损伤模型,观察三七粉主要成分对心肌细胞成活率、LDH、MDA、SOD的影响;采用H_(2)O_(2)制备人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤模型,观察三七粉中主要成分对内皮细胞存活率、LDH、ACP的影响。结果人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rg_(3)、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rk_(1)、人参皂苷Rh_(1)、三七素能够显著增加H9C_(2)细胞存活率(P<0.05,P<0.01),多个成分能够减少LDH、MDA,增加SOD;三七皂苷R1、人参皂苷Rb_(2)、人参皂苷Rb_(3)、槲皮素、人参皂苷F_(2)、人参皂苷Rk_(1)、人参皂苷Rh_(1)、三七素可显著提高HUVEC细胞存活率(P<0.05,P<0.01),多个成分能够减少LDH、ACP。结论三七粉发挥心血管保护作用的药效物质基础包括多种皂苷类成分、三七素,以及黄酮类成分槲皮素。

三七粉血清药物化学研究

目的 采用超高效色谱-电喷雾/四级杆飞行时间串联质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)技术对三七粉中主要化学成分和血中移行成分进行准确快速鉴定。方法 采用Waters Xevo G2 Q-Tof高分辨质谱、Waters Acquity UPLC液相色谱系统、Waters Acquity UPLC?BEH C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下采集数据,通过与对照品的保留时间及质谱信息对比,并结合文献报道及质谱数据库中相同成分或同类成分的精确分子质量、质谱裂解规律进行匹配,对三七粉中化学成分和血中移行成分进行快速准确识别。结果三七粉中共鉴定得到54个化学成分,包括原人参二醇皂苷类36个,原人参三醇皂苷类14个,黄酮类1个,糖类1个,氨基酸类1个和酯类化合物1个。在给药大鼠血浆中共鉴定得到18个三七粉相关的外源性化合物,包括14个吸收原型药物成分和4个代谢物。结论 利用建立的定性分析方法快速准确地识别三七粉中主要化学成分和血中移行成分。明确了三七粉体外化学成分组-体内血行成分组的药效物质基础传递-转化过程,为三七粉的质量标志物确定与质量控制提供依据,也为其深入分子作用机制研究奠定基础。

基于质量标志物的三七粉质量标准提升研究

目的基于三七粉质量标志物的研究结果,完善三七粉质量标准,为其质量标准的修订提供科学依据。方法利用高效液相色谱技术,结合“一测多评”等分析方法,对三七粉质量标志物进行含量测定,对不同厂家三七粉及不同商品规格原料药材进行质量标志物差异分析。建立指纹图谱,采用新的相似度计算模型-等同系数法和模式识别对三七粉及原料药材进行质量一致性评价。结果不同厂家三七粉中三七素含量存在差异,收集到的白云山和黄中药三七粉中三七素含量均高于其余厂家,提示三七素可能为白云山和黄中药三七粉的优势指标。原料药材中三七素和皂苷含量与头数不具相关性,但与季节、部位具有相关性。皂苷方面表现为冬三七>春三七,芦头>主根>须根>筋条;三七素方面表现为冬三七>春三七,须根>芦头>筋条>主根。应用等同系数法计算指纹图谱相似度实现了不同厂家三七粉的区分,进一步结合化学模式识别实现了不同规格原料药材的区分。结论建立的含量测定及指纹图谱方法稳定可行,专属性强,对于控制三七粉质量具有显著意义。与2020年版《中国药典》相比,该文修订了三七粉含量测定项,增加了HPLC指纹图谱项,可为三七粉的质量标准提升及其原料药材的选择提供科学依据。

中药五味药性理论的现代研究进展

五味作为中药药性理论的核心内容,近年来有许多学者从不同方面对中药五味理论进行一系列的研究。由于传统中医药理论与现代药学思维方式和认识途径存在差异,导致人们对于中药五味药性理论的认识不尽相同。从中药五味的源流,哲学思想对五味属性的推演以及四气、归经、升降浮沉、功效与五味的联系对中药五味药性理论的脉络进行梳理,进一步从真实滋味和功效属性两方面对中药五味药性的现代研究进行探讨,通过探究五味的真实滋味的标定及五味物质基础与功效的关联关系,对其进行客观的描述,以期寻求一种更加科学化的现代方法阐明中药五味药性理论。

三七的研究进展及其质量标志物预测分析

三七是我国常用的大宗中药材,其中化学成分类型丰富,包括三萜皂苷、黄酮、氨基酸、多糖、挥发油等类成分,传统认为三萜皂苷类成分为其主要药效成分。从化学成分和药理作用等几个方面对三七的研究现状进行综述,在此基础上,根据中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)理论,探究人参属药用植物亲缘关系,结合三七生源途径、传统功效、传统药性等研究对三七Q-Marker进行预测分析,预测三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rd、三七素可作为Q-Marker的选择,以期为三七的质量控制和新标准的制定提供科学依据。

姜黄的研究进展及质量标志物(Q-Marker)的预测分析

姜黄首载于《新修本草》,具有破血行气、通经止痛的功效,常见于活血止痛的方剂中,在中国、印度、泰国传统医学被广泛应用,我国主要分布于四川、福建、广东、广西等地区。姜黄来源于姜科植物姜黄Curcuma longa的干燥根茎,主要含有姜黄素类与萜类成分,具有抗凝血、抗炎、抗肿瘤与止痛等药理作用,但姜黄素类成分的生物利用度较低。对姜黄的本草考证、化学成分、药理作用与药动学的研究进展进行归纳总结,并预测姜黄素类成分姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素以及萜类成分芳姜黄酮、姜黄酮、姜黄烯、姜烯等为姜黄的质量标志物(quality marker,Q-Marker),以期为姜黄的质量控制研究提供参考。

基于质量传递与溯源的中药质量标志物(Q-Marker)的发现策略及应用

中药形成产业链长且行业跨度大,横跨一、二、三产业,药物成分经过多环节的传递与变化,最终体内的效应成分与原料药中原有成分的构成已大不相同,因此,中药质量控制应着眼于中药形成的全过程,而中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)的应用价值在于建立全程质量控制体系。针对目前中药质量研究存在的问题,提出"以中药Q-Marker为核心,从质量要素的传递与溯源"的基本研究模式,以中药形成的全过程及质量要素的传递规律为基础,为经典名方的质量控制及中药大品种质量标准的提升提供了新的思路和视角,有利于提升中药产品质量,为中药标准化建设提供新的思路,促进中药产业的健康发展。

“伤科要药”三七在骨伤与创伤中的研究进展

三七是临床伤科疾病的常用中药,有散瘀止血、消肿定痛之效,历代中医古籍对其性味归经、功效主治的论述大同小异,现代研究发现三七具有活血、止血、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等药理活性,主要活性成分为皂苷类。伤科疾病是指人体因跌打坠堕、扭伤劳损、碰撞闪挫等原因而引起的皮肉、筋骨、脏腑、气血等损伤,主要包括挫伤、创伤、软组织损伤、骨折及内伤等临床常见疾病。通过整理历代本草和现代文献中关于三七“伤科要药”功效的相关记载,对其在骨损伤修复、活血化瘀、止血、抗炎镇痛、伤口愈合等方面的药理作用及机制进行归纳梳理,为其深入开发和临床应用提供参考。

儿泻康贴膜对功能性腹痛幼龄大鼠药效作用及机制研究

目的 研究儿泻康贴膜对功能性腹痛幼龄大鼠的影响,并探讨其疗效机制。方法 将出生1 d的SD大鼠随机分为对照组和模型组,采用母婴分离联合冰水应激的方法建立功能性腹痛大鼠内脏高敏感模型。选取造模成功的大鼠随机分为模型组、丁桂儿脐贴组,儿泻康贴膜(1/24、1/12、1/6贴)组。各组大鼠腹部贴剂给药,连续7 d,对照组、模型组腹部给予空白模拟贴。观察给药后大鼠粪便Bristol分级评分、粪便含水率及腹壁撤退反射(AWR)评分结果;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清和结肠组织中5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定结肠组织中囊性纤维化跨膜转运调节体(CFTR)、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)m RNA表达水平;Western blotting法检测CFTR、CRF蛋白表达水平。结果 与模型组相比,儿泻康贴膜各剂量组大鼠粪便Bristol评分明显降低,粪便含水量显著减少,不同注水体积下的AWR评分均显著降低,血清和结肠组织中致痛致泻相关因子5-HT、SP、TNF-α的表达均得到显著抑制,结肠组织中CFTR和CRF mRNA和蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05、0.01、0.001)。结论 儿泻康贴膜对功能性腹痛大鼠有显著的治疗效果,其通过调节血清和结肠组织中腹痛腹泻相关因子的含量以及结肠组织中相关蛋白的表达以显著降低大鼠粪便Bristol评分和粪便含水量以及大鼠的内脏敏感性。

基于神经网络分析的疏风解毒胶囊抗炎作用谱效关系研究

目的构建疏风解毒胶囊抗炎作用谱效关系网络模型,探究其发挥抗炎作用的潜在物质基础。方法在建立疏风解毒胶囊不同配比样品指纹图谱分析方法的基础上,采用均匀设计法对疏风解毒胶囊中8味中材随机采样得到不同配比组,测定各配比样品对脂多糖(LPS)诱导的RAW264. 7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)的抑制率,将中效信息与各样品MS指纹图谱化学信息用BP人工神经网络分析得出各色谱峰对抗炎活性的影响程度,建立谱效关系。结果通过建立的最佳神经网络模型,计算得到14个特征峰与疏风解毒胶囊抗炎活性显著相关。结论通过谱效研究,推测疏风解毒胶囊发挥抗炎作用的中效物质基础可能为包括大黄酸、大黄素、马鞭中苷、毛蕊花糖苷、松脂素-β-D-葡萄糖苷、连翘酯苷A、虎杖苷等在内的14个化合物。

夏天无HPLC指纹图谱及多指标含量测定研究

目的建立夏天无HPLC指纹图谱及多指标成分测定方法,为夏天无药材质量标准提升提供科学依据。方法采用HPLC法,Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(三乙胺调pH 6.0)为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;进样量10μL;检测波长280 nm;建立15批夏天无药材的指纹图谱,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)进行评价,聚类分析和主成分分析将15批药材分为2类,同时测定原阿片碱、黄藤素、荷包牡丹碱和延胡索乙素4种成分的含量。结果建立了夏天无药材的HPLC指纹图谱,共标定了10个共有峰;原阿片碱、黄藤素、荷包牡丹碱和延胡索乙素线性关系良好,r均大于0.999 9,平均回收率分别为97.12%、100.09%、98.53%、99.71%。结论 HPLC指纹图谱结合多指标成分测定可为夏天无药材质量评价提供参考。

疏风解毒胶囊疏风解表的谱效关系研究

目的明确疏风解毒胶囊发挥疏风解表作用的潜在物质基础。方法利用LC-MS建立疏风解毒胶囊22个不同中材配比样品的MS谱库;采用与疏风解表相关的M3型乙酰胆碱受体高表达的中国仓鼠卵巢癌细胞CHO-K1/M3为体外中效筛选模型,检测22个样品对M3受体的激动活性;以22个样品特征峰的相对峰面积为自变量,以对M3受体的激动率为因变量,采用BP-神经网络算法进行谱-效关联分析。结果通过建立的最佳神经网络模型,计算得到16个特征峰与疏风解毒胶囊对M3受体的激动活性显著相关。结论通过谱效研究,推测疏风解毒胶囊发挥疏风解表的中效物质基础可能为包括二氢败酱苷、大黄素、大黄酸、连翘苷、连翘酯苷E、柴胡皂苷d、虎杖苷、毛蕊花糖苷等在内的16个化合物,为其质量标志物的确定提供了依据。

基于网络药理学的疏风解毒胶囊抗炎和免疫调节作用机制研究

目的探索疏风解毒胶囊抗炎和免疫调节的网络调控机制。方法选取疏风解毒胶囊中的28个化合物为研究对象,依据反向药效团匹配方法预测化合物的作用靶点,借助MAS 3.0生物分子功能软件及京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对获得靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析、信号通路分析,利用Cytoscape软件构建网络药理图。结果 28个化合物可通过127个靶点作用于112条通路,其中41个蛋白靶点和22条通路与抗炎和免疫调节相关,得到疏风解毒胶囊化合物-靶点-通路-病理过程网络图。结论疏风解毒胶囊通过作用于HRAS、MAP2K1、AKT1、MME和PTPN1等关键蛋白,干预了多个与抗炎和免疫调节相关的生物过程,初步揭示了其作用机制。

基于网络药理学的疏风解毒胶囊配伍合理性研究

目的探究疏风解毒胶囊治疗上呼吸道感染的配伍合理性。方法实验采用网络药理学的方法,对疏风解毒胶囊中清热解毒组、解表组和甘草组的32个化合物的作用靶点和通路进行预测和筛选,通过数据整合分析,剖析该方的作用特点及配伍规律。结果 32个化合物可作用于94个相关靶点和34条相关通路,主要涉及炎症反应、细菌脂多糖反应、免疫反应等相关过程。3组既有共同的作用靶点群及通路群,又各有偏重,协同发挥治疗作用。结论清热解毒组通过干预炎症反应、细菌脂多糖反应、防御反应和免疫反应等相关过程发挥治疗作用;解表组除可与清热解毒组协同发挥药效外,亦可通过多途径作用于发汗解热过程;甘草组从抗炎、增强机体免疫等方面起到辅助治疗作用,体现了疏风解毒胶囊的配伍合理性。