理筋手法调控兔骨骼肌损伤修复中瘢痕形成的作用机制

背景:理筋手法能够促进骨骼肌修复,治疗骨骼肌损伤。但骨骼肌损伤在修复过程中的纤维化形成、瘢痕组织增生等与损伤修复质量密切相关。开展理筋手法对纤维化形成、瘢痕组织增生的调控作用研究,有利于阐述理筋手法提高骨骼肌损伤修复质量的相关机制。目的:探索理筋手法提高兔骨骼肌损伤后修复质量的作用机制,为临床治疗提供科学依据。方法:45只健康成年日本大耳白兔随机分为空白组、模型组、理筋组,每组15只。其中模型组和理筋组均进行腓肠肌打击造模;造模后理筋组于第3天开始进行理筋手法干预,1次/d,15 min/次。各组在造模后的第7,14,21天分别处死5只兔进行观察。苏木精-伊红染色法观察腓肠肌形态及炎性细胞量,Masson染色法观察腓肠肌胶原纤维量,ELISA法检测腓肠肌白细胞介素6和白细胞介素10的表达量,Western blot和RT-PCR检测配对盒基因7、成肌分化因子、肌细胞生成素、肌动蛋白α、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白及mRNA表达,免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果与结论:①苏木精-伊红染色及Masson染色结果显示,与模型组比较,理筋组各观察点炎性细胞浸润减少,胶原纤维量减少(P<0.01),肌纤维逐渐愈合;②ELISA结果显示,与模型组比较,理筋组白细胞介素6表达持续降低(P<0.05),而白细胞介素10在造模后第7天时升高(P<0.05),随后呈下降趋势(P<0.05);③Western blot和RT-PCR结果显示,与模型组比较,理筋组造模后第14天配对盒基因7、成肌分化因子、肌细胞生成素的蛋白及mRNA表达量均显著升高(P<0.05),而第21天时却较之前下降(P<0.05);理筋组各观察点肌动蛋白α、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白及mRNA表达量相较于模型组均显著降低(P<0.05);④免疫组化结果显示,理筋组各观察点Ⅰ型胶原蛋白的表达量相较于模型组均显著降低(P<0.05);⑤结果表明,理筋手法能够通过抑制炎症、促进肌卫星细胞的增殖分化、减少纤维化的生成,从而提高兔骨骼肌损伤的修复质量。

理筋手法减轻兔损伤骨骼肌纤维化的作用机制

背景:理筋手法能够减少纤维化瘢痕增生,促进骨骼肌修复。但不恰当的激活Wnt/β-catenin信号通路,能加剧损伤骨骼肌纤维化,对骨骼肌修复过程产生不利影响。开展理筋手法对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用研究,有利于阐述理筋手法减少纤维化瘢痕增生、促进骨骼肌损伤修复的相关机制。目的:探讨理筋手法促进兔骨骼肌损伤修复的作用机制。方法:45只普通级健康成年日本大耳兔随机分为空白组、模型组和理筋组,每组15只。模型组和理筋组均进行腓肠肌打击造模,理筋组于造模后第3天开始进行理筋手法治疗,1次/d,15 min/次。各组在造模后第7,14,21天分别取5只进行取材。苏木精-伊红染色观察腓肠肌一般形态结构,Masson染色观察腓肠肌胶原纤维含量,Western blot检测腓肠肌Wnt3a、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、TCF、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白表达,RT-PCR检测腓肠肌Wnt3a、β-catenin、TCF mRNA表达,免疫荧光法检测腓肠肌β-catenin的表达,免疫组化法检测腓肠肌Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与结论:①苏木精-伊红染色及Masson染色结果显示:与模型组比较,理筋组各观察点炎性细胞浸润减少,胶原纤维量减少(P<0.001),肌纤维逐渐愈合;②Western blot结果显示:与模型组比较,理筋组各观察点Wnt3a、β-catenin、TCF、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的蛋白表达量均显著降低(P<0.05),而p-GSK3β/GSK3β比值较模型组则明显升高(P<0.05);③RT-PCR结果显示:与模型组比较,理筋组各观察点Wnt3a、β-catenin、TCF的mRNA表达量均显著降低(P<0.001);④免疫荧光结果显示:与模型组比较,理筋组各观察点β-catenin核表达荧光强度明显降低,且逐渐与空白组相近(P<0.001);⑤免疫组化结果显示:理筋组各观察点Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达量相较于模型组均显著降低(P<0.01)。结果表明:理筋手法能够抑制Wnt/β-catenin信号通路的异常激活,减少纤维化瘢痕增生,从而达到促进损伤骨骼肌修复的目的。

温针灸干预慢性疲劳综合征大鼠骨骼肌PINK1/Parkin通路的变化

背景:研究发现慢性疲劳综合征患者线粒体的功能异常,给予辅酶后可改善症状,温针灸是治疗该病的重要方法之一,但其作用机制尚不明确。目的:采用温针灸干预慢性疲劳综合征大鼠骨骼肌PINK1/Parkin通路,明确温针灸对慢性疲劳综合征的治疗机制。方法:将32只雄性SD大鼠适应性喂养3 d后随机分为正常组、模型组、温针灸组和辅酶组,每组各8只,除正常组外,其余各组大鼠以游泳力竭、慢性束缚及禁食多因素方法制备慢性疲劳综合征模型。造模成功后正常组、模型组大鼠采取相同固定及灌胃操作,温针灸组大鼠选用关元、中脘、足三里(双)穴进行治疗,1次/d,进针后将艾柱置于针柄点燃,每次治疗3壮,共15 min;辅酶组按照1 mg/kg进行灌胃,1次/d,共治疗14 d。记录实验期间各组大鼠体质量、力竭游泳时间及治疗期间的食物利用率。治疗结束后,取各组大鼠双侧腓肠肌,苏木精-伊红染色法观察各组大鼠腓肠肌病理形态,透射电镜观察各组大鼠腓肠肌线粒体形态结构及自噬体,免疫组化法检测各组大鼠骨骼肌中微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅱ蛋白表达水平,Western blot法检测各组骨骼肌中PINK1、Parkin、LC3蛋白的表达。结果与结论:①与正常组相比,模型组腓肠肌细胞核固缩、凝聚,数目增多,细胞排列紊乱,腓肠肌纤维排列紧密;温针灸组和辅酶组腓肠肌纤维排列间隙较模型组增加,细胞核减少,细胞排列较模型组整齐。②与正常组比较,模型组骨骼肌线粒体肿胀、融合及空泡化,线粒体膜断裂,基质较多溶解,嵴断裂、消失;存在自噬现象。与模型组比较,温针灸组及辅酶组线粒体数量增多,排列相对整齐,线粒体空泡化及线粒体嵴断裂情况改善,膜结构相对完整;存在自噬现象。③与正常组相比,模型组骨骼肌中PINK1蛋白表达上调(P<0.05)、而Parkin、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达稍有上调(P>0.05);与模型组相比,温针灸组和辅酶组骨骼肌中PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显上调(P<0.05),温针灸组蛋白表达上调更为显著。④结果说明,温针灸可能通过激活PINK1/Parkin通路,上调LC3Ⅱ表达,形成线粒体自噬体,促进降解受损线粒体的相关内容物,改善线粒体质量,从而发挥治疗慢性疲劳综合征的作用。

理筋手法干预兔骨骼肌损伤修复中炎症及细胞凋亡的作用机制

背景:骨骼肌细胞的过度凋亡将破坏肌细胞数量的动态平衡,导致骨骼肌病理性损伤。理筋手法治疗骨骼肌损伤疗效确切,但是否能抑制细胞凋亡从而促进损伤骨骼肌的修复尚未可知。目的:探究理筋手法对兔骨骼肌损伤修复过程中减少炎症和细胞凋亡的作用机制。方法:选用45只成年健康日本大耳兔,随机分为空白组、模型组和理筋组。其中空白组不做处理,模型组和理筋组均造成腓肠肌损伤模型;造模后模型组不予治疗,理筋组于第3天开始对损伤腓肠肌进行理筋手法操作,1次/d,15 min/次。各组兔分别于造模后的第7,14,21天取材,苏木精-伊红染色观察腓肠肌一般形态,透射电镜观察腓肠肌超微结构,TUNEL染色观察腓肠肌细胞凋亡情况,ELISA检测腓肠肌白细胞介素1β、白细胞介素6和白细胞介素10的表达,Western blot检测腓肠肌BAX、BCL-2、Caspase3的蛋白表达,RT-PCR检测BAX、BCL-2 mRNA的表达。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色结果显示:与模型组比较,各观察点理筋组炎性细胞减少、肌细胞数量增多、肌组织逐渐愈合;(2)透射电镜结果显示:与模型组比较,各观察点理筋组肌纤维排列逐渐整齐、线粒体逐渐完整、Z线排列逐渐趋于规则,游离核糖体聚集;(3)TUNEL染色结果显示:与模型组比较,各观察点理筋组细胞凋亡率逐渐降低(P <0.05);(4)ELISA结果显示,与模型组比较,理筋组白细胞介素1β、白细胞介素6表达持续降低(P <0.05),而白细胞介素10在造模后第7天时升高,随后呈下降趋势(P <0.05);(5)Western blot结果显示:理筋组各观察点BCL-2/BAX蛋白的表达相较于模型组显著升高(P <0.05);Caspase3的蛋白表达均显著降低(P <0.001),且逐渐与空白组相近;(6)RT-PCR结果显示:理筋组各观察点BCL-2/BAX mRNA的表达较模型组均显著升高(P <0.05);(7)结果说明:理筋手法能够抑制炎症、减少细胞凋亡,促进损伤骨骼肌的修复。

枸杞多糖联合奥沙利铂可逆转结肠癌干细胞的耐药

背景:结肠癌临床主要采用以氟尿嘧啶、伊立替康及奥沙利铂为基础的治疗方法,研究发现这些药物的转运与ABC转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette transport protein of G2,ABCG2)等膜转运蛋白相关,然而当患者对这些化疗药物产生耐药后,ABCG2的高表达致使治疗效果明显下降,引起了结肠癌的耐药问题。临床急切需要新的药物及治疗方法来提高疗效,枸杞多糖具有广泛的生物学活性,将多糖作为抗肿瘤药物,可以克服化疗和放疗过程中杀死肿瘤细胞的同时对机体正常细胞的损伤。目的:通过体外实验探索枸杞多糖联合奥沙利铂对结肠癌干细胞耐药的逆转作用,进而探讨枸杞多糖逆转结肠癌耐药的可能分子机制。方法:选用结肠癌细胞株HCT116以及奥沙利铂耐药细胞株HCT116-OXR进行体外实验,采用CCK8检测细胞增殖情况确定枸杞多糖和奥沙利铂的最适干预浓度和干预时间,进一步分为HCT116对照组,HCT116-OXR空白处理组,枸杞多糖组(2.5 mg/mL枸杞多糖),奥沙利铂组(10μmol/L奥沙利铂),枸杞多糖+奥沙利铂组(2.5 mg/mL枸杞多糖+10μmol/L奥沙利铂),流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫荧光和Western blot检测磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)和ABCG2的表达,Western blot检测PI3K,AKT,Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果与结论:①HCT116-OXR相较HCT116对枸杞多糖更敏感(P<0.05);②与HCT116-OXR空白处理组比较,奥沙利铂联合枸杞多糖促进了HCT116-OXR细胞凋亡(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达明显上调(P<0.05),ABCG2、PMI、PI3K、AKT的蛋白表达明显下调(P<0.05);③结果表明枸杞多糖通过抑制PMI/PI3K/AKT通路逆转结肠癌耐药,为研究枸杞多糖增敏化疗作用的分子机制奠定了基础。

基于数据挖掘探讨穴位注射治疗中风后偏瘫的选穴规律

目的:基于数据挖掘探讨穴位注射治疗中风后偏瘫的选穴规律,为选穴组方提供参考。方法:检索中国知网、万方数据库、维普中文期刊数据库和Pubmed 2000年1月—2023年5月关于穴位注射治疗中风后偏瘫的相关文献,并建立数据库,利用SPSS Modeler18.0和SPSS Statistics27.0软件对数据进行腧穴频次统计、关联分析以及聚类分析等。结果:最终纳入文献55篇,涉及腧穴86个。曲池、足三里(11.49%、10.70%)使用频率最高。特定穴7种,五输穴使用频率最高。经脉15条,排前3位的依次为手、足阳明经和足少阳经。关联分析示,共16组腧穴组合符合要求,排前3位的依次为曲池-足三里,曲池-肩髃,曲池-肩髃-足三里。高频腧穴聚类分析后得到5组穴位组合;谱系图将排前20位的腧穴分为两类,足三里-曲池为一类,属重点要穴。共28种注射液,丹参注射液、复方丹参注射液、维生素B_(1)和B_(12)注射液使用频率最高。结论:穴位注射治疗中风后偏瘫的经脉循行以阳明经为主,选穴以五输穴为主,多采用足三里和曲池穴,并与近端取穴配伍治疗。

基于IL-6/JAK2/STAT3通路探讨化瘀消痞汤对胃癌前病变大鼠胃黏膜损伤的作用及机制

目的基于白细胞介素6(IL-6)/Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路探讨化瘀消痞汤对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃黏膜损伤的作用及机制。方法随机选取10只大鼠作为空白组,其余50只大鼠作为造模组,采用多因素综合造模。将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、叶酸组(0.002 g·kg^(-1))及化瘀消痞汤低、中、高剂量组(6.2、12.4、24.8 g·kg^(-1))。灌胃给药,每日1次,连续干预3个月。观察大鼠一般状况并测定体质量、3 h进食量;采用HE染色法观察胃组织病理变化;ELISA法检测血清中IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β水平;免疫荧光法检测胃组织中B细胞淋巴瘤/白血病-xL(Bcl-xL)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平;WesternBlot法检测胃组织中IL-6、p-JAK2、p-STAT3、细胞周期素D1(CyclinD1)、原癌基因(c-Myc)蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、3 h进食量明显降低(P<0.05);胃黏膜明显变薄且不完整,腺体排列紊乱且数量减少,部分区域可见胃上皮细胞肠化的杯状细胞及炎性细胞浸润;血清IL-6、TNF-α、IL-1β水平明显升高(P<0.05);胃组织中Bcl-xL、VEGF、IL-6、p-JAK2、p-STAT3、CyclinD1、c-Myc蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组比较,化瘀消痞汤中、高剂量组大鼠的体质量、3 h进食量明显升高(P<0.05);胃黏膜损伤有不同程度改善,腺体排列趋于整齐,胃上皮细胞肠化情况有所改善,炎性细胞较少;血清IL-6、TNF-α、IL-1β水平明显降低(P<0.05);胃组织中Bcl-xL、VEGF、IL-6、p-JAK2、p-STAT3、CyclinD1、c-Myc蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论化瘀消痞汤能明显改善PLGC大鼠的胃黏膜病理损伤,可能与其抑制炎症反应及调控IL-6/JAK2/STAT3通路抑制细胞增殖有关。

UMU+BOPPPS混合教学模式探索——基于“中医外科学”皮肤性病章节

目的:探讨“UMU+BOPPPS”混合教学模式的课堂效果。方法:按班级将学生分为传统教学组和“UMU+BOPPPS”教学组,对“中医外科学”皮肤性病章节的内容分别进行两种不同模式的授课,在授课结束后进行章节考试及课堂效果问卷调查,对两组学生的学习成绩及学生体会进行统计分析。结果:“UMU+BOPPPS”混合教学模式能够有效提高学生学习的积极性和参与度,提高课堂教学效果,提高学习成绩。结论:“UMU+BOPPPS”混合式教学模式在激发学生学习兴趣、构建知识体系、培养中医思维等方面效果突出,值得进一步推广。

黑水城出土文献TK187“16-3右与16-5左”考释

沈澍农先生等对编号TK187的俄藏黑水城文献缀接研究发现:16-3右与16-5左两部分文字存在缀接关系并认为其大约是1个药酒方。经分析,本文判断TK18716-3右与16-5左缀接后的内容应是两首方,前者①~⑨的内容为药酒方;后者为养生食疗方。通过对养生食疗方中所用药物等的详细考证,发现文献中杏仁、川椒、马芹子、茴香、白芷、川芎均属于药食同源之品,几种同用具有预防外感并调理中焦的养生作用,制作时采用在瓮中油浸并密封日晒发酵的方法,极为符合日常制作酱类或腌菜类调味用品的特点。按照两方所制的成品为一酒一酱,既有防病保健之效,又可日常食用。两方同处于TK187文献养生分组之中,都反映了西夏人对健康长寿的追求。

基于文献计量学的中药治疗眼病可视化分析

目的:基于文献计量学分析中药治疗眼病的研究热点和发展趋势。方法:检索并整理自1955年12月17日至2022年12月1日中国知网(CNKI)和Web of Science (WOS)核心数据库中收录的中药治疗眼病的相关中英文文献,运用CiteSpace、VOSviewer软件从文献产出情况、研究机构、研究作者、研究热点等方面对文献进行计量学分析。结果:共纳入2106篇中文文献,56篇英文文献。中药治疗眼病的研究目前处于波动式增长阶段。中国中医科学院在该领域研究的文献产出量最多。近年来,湖南中医药大学在该领域的文献产出明显增加。该领域内各机构和研究团队之间合作交流较少。中药治疗糖尿病视网膜病变是现阶段的研究热点,干眼病及黄斑水肿将是未来研究的热点。结论:中药治疗眼病还需要从基础研究、临床研究、产品研发多个方向进行深入挖掘,以期为中药治疗眼病的进一步发展提供参考和借鉴。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨温针灸改善膝关节骨关节炎兔软骨损伤的机制

目的:观察温针灸对膝关节骨关节炎(KOA)兔关节软骨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路及炎性因子表达的影响,探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法:将新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组、药物组,每组12只。采用右后肢管型石膏伸直位固定法制备KOA兔模型。温针灸组选取“内膝眼”“外膝眼”“鹤顶”“足三里”予温针灸治疗15 min,药物组给予双氯芬酸钠溶液(0.35 mg/kg)灌胃,均每日1次,治疗4周。采用Lequesne MG量表对各组兔进行行为学评价;HE染色法观察膝关节软骨组织病理改变并进行Mankin评分;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的含量;Western blot法检测膝关节软骨组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3和MMP-9蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色示膝关节软骨膜破损,表层细胞排列紊乱,Lequesne MG、Mankin评分及血清IL-6、TNF-α、MMP-9含量和膝关节软骨组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值和MMP-9蛋白表达水平均升高(P<0.01)。与模型组比较,温针灸组和药物组HE染色示膝关节软骨表面分布层次较清晰,Lequesne MG、Mankin评分及血清IL-6、TNF-α、MMP-9含量和膝关节软骨组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值和MMP-9蛋白表达水平均降低(P<0.01,P<0.05)。与药物组比较,温针灸组HE染色示膝关节软骨表面分布层次清晰,潮线结构完整,Lequesne MG、Mankin评分及血清IL-6、TNF-α、MMP-9含量和膝关节软骨组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值降低(P<0.01,P<0.05)。结论:温针灸可能通过抑制JAK2、STAT3及MMP-9蛋白表达,调控JAK2/STAT3信号通路,降低促炎因子分泌,减轻软骨损伤,发挥治疗作用。

中药骨伤凝胶贴剂的经皮渗透性研究

目的探讨药粉目数及透皮吸收促进剂对中药骨伤凝胶贴剂经皮渗透作用的影响。方法以羟基红花黄色素A和血竭素为评价指标,采用桨碟法评价凝胶贴剂的体外释放行为,采用Franz扩散池法考察药粉目数及透皮吸收促进剂对凝胶贴剂透皮吸收的影响。结果与氮酮和薄荷脑相比,肉豆蔻酸异丙酯对于羟基红花黄色素A和血竭素的促渗作用最好,其最佳用量为3%,200目的药粉相对于80目在体外释放及有效成分的经皮吸收方面没有明显影响。结论药粉目数对凝胶贴剂经皮渗透作用的影响不显著,肉豆蔻酸异丙酯透皮吸收促进剂能显著提高凝胶贴剂的透皮吸收。

甘松饮改善细胞外基质堆积延缓糖尿病肾病的研究

研究甘松饮(Gan-song Yin,HGY)对糖尿病肾病(diabetic kidneys disease,DKD)大鼠(Rattus norvegicus)肾脏FN、Col1α1和Col4α1基因及蛋白表达的影响。制备糖尿病肾病大鼠模型,分为正常对照组(Normal)、DKD模型组(DKD)、格列喹酮对照组(DKD+Gli,10 mg/kg)、HGY高剂量组(DKD+HGY,10 g/kg)及HGY低剂量组(DKD+HGY,5 g/kg)。采用Western Blot法、免疫组化法检测DKD大鼠肾脏组织FN、ColⅠ、ColⅣ的表达蛋白水平,实时荧光定量PCR法检测DKD大鼠肾脏FN、Col1α1和Col4α1基因表达水平。与DKD比较,HGY可以显著降低DKD模型大鼠肾脏组织FN、ColⅠ、ColⅣ的表达蛋白水平以及FN、Col1α1、Col4α1的基因表达水平(P<0.05),且HGY与格列喹酮的调控作用基本接近。说明HGY可以下调早期DKD大鼠肾脏组织FN、ColⅠ、ColⅣ的表达蛋白水平以及FN、Col1α1、Col4α1的基因表达水平,可能是通过改善肾脏细胞外基质(extracellular matrix,ECM)堆积从而延缓DKD发展。

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨浓缩当归丸对缓解卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的影响

目的:探讨浓缩当归丸改善卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的作用及机制。方法:36只成年雌性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、雌二醇(E2)/地屈孕酮片组、浓缩当归丸高、中、低剂量组,每组6只。除正常组外,其余各组大鼠每日腹腔注射乙烯基环己烯(VCD)80 mg·kg^(-1)造模,连续14 d。从第15天起,模型组灌胃生理盐水2 mL·kg^(-1);雌二醇/地屈孕酮片组灌胃芬吗通0.3 mg·kg^(-1);浓缩当归丸高、中、低剂量组灌胃浓缩当归丸2.08、4.16、8.32 g·kg^(-1),每日1次,连续给药28 d。测定大鼠卵巢指数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中相关激素E2、促卵泡激素(FSH)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)和抗缪勒管激素(AMH)水平,以及血清过氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)含量;硫代巴比妥酸(TAB)法检测血清丙二醛(MDA)含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察卵巢形态学变化;免疫组化法(IHC)检测卵巢组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶^(-1)(HO^(-1))、SOD2、SOD1的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织中Nrf2、HO^(-1)、SOD2、SOD1蛋白的相对表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠卵巢中生长卵泡明显减少、卵泡颗粒层排列松散;大鼠体质量、卵巢指数和血清AMH、E2水平显著下降,LH、FSH水平均显著升高(P<0.01);SOD和GSH水平显著下降(P<0.01),MDA水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,E2/地屈孕酮片组和浓缩当归丸各组卵巢指数均明显增加(P<0.05,P<0.01),血清中E2水平明显升高(P<0.05,P<0.01),FSH、AMH、LH水平明显降低(P<0.05,P<0.01);卵巢内生长卵泡数量增多;血清中SOD活性增强,GSH含量升高,MDA含量明显下降(P<0.05,P<0.01);卵巢组织中Nrf2、HO^(-1)、SOD2、SOD1蛋白表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:浓缩当归丸能够调节血清激素水平,且增加卵巢组织中Nrf2、HO^(-1)、SOD2、SOD1因子的表达,提高卵巢组织抗氧化能力抵抗氧化应激损伤,从而改善卵巢储备功能。

槲皮素对中波紫外线诱导的黄褐斑模型豚鼠皮肤黑色素合成的影响及调控机制

目的:探究槲皮素(quercetin, Que)对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导的黄褐斑模型豚鼠皮肤黑色素合成的影响及其分子机制。方法:制备高、中、低剂量槲皮素软膏和0.25%熊果苷软膏。将35只雌性豚鼠随机分为空白组,模型组,基质组,槲皮素低、中、高剂量组及熊果苷阳性对照组。空白组不做处理,其余各组均在用药后行总量为6 500 mJ·cm^(-2)的UVB辐照诱导建立黄褐斑豚鼠模型(10 min·d^(-1),隔天一次)。连续治疗36 d后取材,拍照观察豚鼠皮肤颜色变化;HE和Masson-Fontana染色检测皮肤黑色素沉积情况;ELISA检测皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达;免疫组织化学法检测皮肤组织中黑色素合成相关调节因子(MITF、TYR、TYRP1)的表达;Western blot检测皮肤组织中P38MAPK-ERK信号通路关键蛋白(P38MAPK、p-P38MAPK、ERK、p-ERK)及MITF、TYR的蛋白表达。结果:槲皮素能够增加豚鼠皮肤组织中SOD、CAT、GSH-Px的表达(P<0.05)。低剂量槲皮素可减少豚鼠皮肤黑色素沉积,下调MITF、TYR、TYRP1、p-P38MAPK(P<0.05),上调p-ERK表达(P<0.05)。中、高剂量槲皮素可增加豚鼠皮肤黑色素沉积,升高MITF、TYR、TYRP1表达(P<0.05);同时,高剂量槲皮素可上调p-P38MAPK、下调p-ERK表达(P<0.05)。结论:低剂量槲皮素对UVB诱导的黄褐斑模型豚鼠黑色素沉积有一定改善作用,高剂量槲皮素会加重黑色素的沉积,其机制可能与槲皮素双向调节P38MAPK-ERK信号通路关键蛋白及下游黑色素合成相关因子的表达有关。