抗生素类药品无菌检查方法研究进展

无菌检查法是无菌药品检查的法定检验方法,其中薄膜过滤法因易操作、风险低和准确度高等优点比直接接种法应用更广泛。无菌药品剂型种类繁多,其中抗生素类药品因品种结构多变、抑菌性强和抗菌谱广等因素,一直以来是建立无菌检查方法的难点。本文就薄膜过滤法中的溶解、过滤、冲洗和培养等4个关键步骤展开讨论,通过对已建立的13类47个品种共61个抗生素药品无菌检查方法的综述,探讨建立无菌检查方法的基本策略,并对无菌检查方法和结果的局限性进行讨论,以期为建立抗生素类无菌药品无菌检查方法及正确认识无菌检查结果提供思路和参考。

不同生育期水分胁迫条件下宁夏枸杞果实的主成分分析与综合评价

以5年生"宁杞1号"枸杞为试验材料,在营养生长和盛花期、盛果期、秋果期进行水分胁迫处理,分析其外观品质、药用品质和营养品质的差异,利用主成分分析法建立综合评价模型进行品质综合评价。结果表明:不同时期水分胁迫条件下枸杞品质存在差异,将10个品质性状综合成3个主成分因子,在盛果期累计贡献率为82.356 0%,药用品质对枸杞果实品质的影响较大;在秋果期累计贡献率为85.234 7%,营养品质对枸杞果实品质的影响较大;综合评价结果表明在盛果期和秋果期均进行中度胁迫处理可以提高果实的综合品质。

基于化学计量学宁夏银柴胡红外指纹图谱及伪品判别分析

目的建立宁夏回族自治区银柴胡其及伪品的中红外、近红外光谱指纹图谱,并结合化学计量学分析比较两种光谱技术在银柴胡质量评价、真伪鉴定上的应用效果。方法分别利用傅里叶红外光谱仪和傅里叶变换近红外光谱仪,采集不同来源宁夏回族自治区银柴胡及伪品的中红外和近红外光谱图谱,借助Origin 2018软件对图谱进行预处理、图谱合成以及相似度评价、系统聚类分析等化学计量学分析。结果初步确定了27个银柴胡中红外图谱共有特征峰和11个近红外图谱共有特征峰;两种光谱图谱经二阶导数等预处理后,结合2种化学计量学分析方法均可以鉴别银柴胡伪品,其中近红外光谱结合系统聚类分析的效果最为显著,并可以有效区分不同来源银柴胡药材。结论近红外光谱结合化学计量学分析在银柴胡药材真伪优劣判别中的应用效果更好,且更符合实际生产需求。研究结果对建立快速的道地银柴胡溯源、真伪判别方法,进一步完善质量评价体系有积极的借鉴意义。

高效液相色谱法测定注射用更昔洛韦中鸟嘌呤杂质的方法学研究

目的建立高效液相色谱法测定注射用更昔洛韦有关物质的方法,并进行方法学研究。方法采用Partisil 10 SCX柱(4.6mm×250mm),流动相乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(50∶50),流速1.5mL·min^-1,检测波长254nm,柱温40℃。结果鸟嘌呤在0.242~4.840μg·mL^-1浓度范围内线性良好(r=0.9999),平均回收率为98.9%(RSD=0.87%)。结论本方法简便快速,结果准确,适用于注射用更昔洛韦中有关物质的测定。

宁夏枸杞根际土壤链霉菌Ⅱ-2-2-2的基因组测序和次级代谢产物分析

目的 分析链霉菌Ⅱ-2-2-2基因序列,挖掘潜在次级代谢能力生物合成基因簇。方法 采用IlluminaHiSeq+PacBio测序技术获得链霉菌Ⅱ-2-2-2的基因组草图序列,经antiSMASH(v6.0.1)平台分析次级代谢产物合成基因簇,采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术对发酵液进行网络化分析。结果 自宁夏枸杞须根附近的土壤中分离得到一株菌株Ⅱ-2-2-2,经鉴定其与缺乏研究的Streptomycesacrimycini CSSP430 16S rRNA基因序列的相似度达99.64%。其基因组草图序列4 409 970 bp,G+C含量占66.43%,3974个蛋白质编码基因,10个rRNA操纵子和72个tRNA。Anti SMASH分析基因序列至少包含5条次级代谢产物合成基因簇,可能编码线性含唑肽类、核糖体合成和翻译后修饰的肽、非核糖体肽、聚酮类和萜类化合物。获得82个正负模式的离子,并将二级碎片离子在全球天然产物交互分子网络平台进行聚类分析和数据库搜索,发现了24个化学结构。结论 链霉菌Ⅱ-2-2-2具有丰富的次级代谢能力并可能成为研究和开发新抗生素的重要资源。

鲜枸杞子浆质量标准研究

目的建立鲜枸杞子浆的质量标准。方法采用薄层色谱法对鲜枸杞子浆中的枸杞子进行定性鉴别;采用紫外-可见分光光度法测定枸杞多糖的含量,检测波长为490 nm;采用高效液相色谱法测定甜菜碱的含量,色谱柱为Merck Purospher@STAR NH2柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水溶液(85∶15,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为195 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果薄层色谱图中,斑点清晰,分离度好。D-无水葡萄糖的质量浓度在2.5060~18.7948μg/mL范围内与吸光度线性关系良好(r=0.9998,n=6);枸杞多糖的精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均低于2.0%;平均加样回收率为99.37%,RSD为0.54%(n=6)。甜菜碱的质量浓度在17.54~350.77μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9996,n=5);精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均低于2.0%;平均加样回收率为100.18%,RSD为0.53%(n=6)。结论该方法简便可行、重复性好,可用于鲜枸杞子浆的质量控制。

近红外光谱法对阿苯达唑片进行一致性评价的研究

目的建立阿苯达唑片参比制剂近红外一致性模型,快速考察和评估阿苯达唑片仿制制剂与参比制剂的相似性。方法建立6批参比制剂的一致性检验模型,用3个仿制厂家的样品近红外光谱作为验证光谱比对分析相似性,并采用体外4条溶出曲线进行比对验证。结果建立的阿苯达唑片参比制剂近红外一致性模型预测准确率高;应用所建立的一致性检验模型预测仿制制剂与参比制剂的差异,结果与体外溶出曲线的结果相对应。结论所建一致性检验模型可以区分参比制剂与仿制制剂,也可用于仿制药品质量与疗效一致性评价的快速比对分析。

HPLC法测定注射用苦参素中的有关物质及方法学研究

目的建立高效液相色谱法测定注射用苦参素中有关物质的方法,并进行方法学研究。方法采用PLATISIL C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为0.05mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH值为3.5):甲醇(82∶18),流速1.0mL·min^(-1),检测波长215nm,柱温30℃。结果氧化槐果碱在2.09～12.54μg·L^(-1)浓度范围内线性良好(r=0.9999),平均回收率为101.1%(RSD=0.7%)。结论本HPLC法测定注射用苦参素中的有关物质操作简便,结果准确可靠。

小儿感冒颗粒质量标准的改进研究

目的改进并完善小儿感冒颗粒的质量标准,为更好地控制其质量提供依据。方法建立薄层色谱法鉴别制剂中的地骨皮、菊花和白薇,HPLC梯度洗脱法测定制剂中连翘苷的含量。结果薄层色谱斑点清晰且阴性对照对照无干扰,连翘苷在7.10～35.50μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率101.5%,RSD%为1.98%(n=6)。结论改进后的质量控制方法简便可靠,有利于更好地监控小儿感冒颗粒的品质。

间苯三酚注射液细菌内毒素法的研究

通过干扰实验建立间苯三酚注射液细菌内毒素检查法的可行性,为替代热原检查法提供理论依据。方法采用细菌内毒素凝胶法,参照《中华人民共和国药典》2020版第四部及相关规定,使用两个不同厂家的鲎试剂对本品进行细菌内毒素方法学研究。结果 将间苯三酚注射液经过30倍稀释,用两个厂家的鲎试剂进行检测,结果符合规定。结论 建立的细菌内毒素凝胶法替代热原法对本品进行安全性检查,方法可行。

银柴胡本草考证

银柴胡与柴胡有着紧密且极易混淆的历史渊源。本文以银柴胡为考证主体,以历代中医药古籍中的相关记载和时间线索为依据,结合植物学、中药学等现代学科理论,对银柴胡的名称、功效、药用历史、基原、质量评价、采收加工等进行系统考证。经考证,银柴胡的发展经历了3个历史阶段,分别为唐代至元代、明清、民国至近现代,对应银柴胡与柴胡混用期、逐渐区分期、独立成熟期。随历史发展“银柴胡”一名逐渐由“银州产柴胡”发展为独立的药材名,银柴胡药材、功效和基原植物也与柴胡逐渐区分。此外,结合地方志和现代资源调查,对银柴胡在宁夏的道地产区分布进行考证,进一步明确了银柴胡的历史道地产区为陕西-内蒙古-宁夏毗邻区域,以及宁夏中部风沙干旱带及以北地区。为银柴胡正本清源、澄清混乱、保证用药安全提供了有效依据,对宁夏银柴胡产业发展和道地产区建设有积极推动作用。

UPLC-MS/MS法同时测定金莲清热胶囊中5种有效成分

目的建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定金莲清热胶囊中荭草苷、芒果苷、牡荆苷、毛蕊花糖苷和金丝桃苷的含量测定方法。方法采用Thermo Hypersil GOLD C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温35℃,流速0.2 mL·min^(-1)。电离方式为喷雾负离子模式(ESI-),多反应监测模式(MRM)用于定量分析。结果金莲清热胶囊中荭草苷等5种成分在考察浓度范围内呈现良好的线性关系(r>0.998);平均回收率(n=6)为98.3%~101.8%,RSD值为1.1%~1.8%。结论建立方法操作简便、准确度高、专属性强,可有效控制金莲清热胶囊的质量。

不同生育期水分胁迫对枸杞耗水特性及果实品质的影响

以枸杞‘宁杞1号’为试材,在营养生长和盛花期(StageⅠ)、盛果期(StageⅡ)、秋果期(StageⅢ)进行一定程度的水分胁迫处理,采用统计学方法,研究了不同水分胁迫处理对植株耗水特性以及果实药用和营养品质的影响,以期得到最优水分生产条件。结果表明:水分胁迫显著降低了枸杞耗水量,降低幅度随水分胁迫程度的增加而增大;与充分灌溉相比,StageⅡ轻度水分胁迫后,在StageⅢ随着胁迫程度的加剧,枸杞多糖、总黄酮、甜菜碱、β-胡萝卜素和脂肪含量均有所增加,维生素C和蛋白质含量降低;StageⅡ中度水分胁迫后,StageⅢ伴随胁迫程度的加剧,枸杞多糖、总黄酮、甜菜碱、β-胡萝卜素、维生素C和蛋白质含量增加,脂肪含量降低;StageⅡ重度水分胁迫后,在StageⅢ随着胁迫程度的加剧,枸杞多糖、甜菜碱、β-胡萝卜素、维生素C和蛋白质含量随之增加,总黄酮和脂肪含量则有所降低。综合分析认为,在StageⅡ和StageⅢ进行中度或轻度亏缺,可兼顾灌溉的效率以及生产效益。

枸杞子中甜菜碱含量测定方法的建立和提取方法的优化

目的:建立枸杞子中甜菜碱的含量测定方法,并优化其提取方法。方法:采用高效液相色谱法测定枸杞子中甜菜碱的含量,色谱柱为Waters Spherisorb NH2,流动相为乙腈-0.01 mol/L磷酸二氢钾水溶液(75∶25,V/V),流速为0.7 mL/min,检测波长为195 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。以甜菜碱含量为指标,在单因素试验的基础上,采用L(934)正交试验设计对枸杞子中甜菜碱超声提取的甲醇体积分数、提取时间、料液比进行筛选并进行验证。测定10批枸杞子中甜菜碱的含量,并与2015年版《中国药典》收录的薄层色谱法测定结果进行比较。结果:甜菜碱检测质量浓度的线性范围为2.035~2035.04μg/mL(R2=0.9993);检测限、定量限分别为0.410、2.051μg/mL,平均加样回收率为97.41%~98.86%(RSD为0.8%~1.4%,n=3),精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均不大于1.2%。最优提取方法为料液比1∶30(g/mL)投料、甲醇超声提取45 min。3次验证试验所得提取液中甜菜碱的平均含量为2.30%(RSD=0.43%,n=3)。10批枸杞子中甜菜碱的含量为1.91%~2.55%,与薄层色谱法的测定结果(1.88%~2.60%)无明显差异(相对误差为-1.92%~2.7%)。结论:成功建立了枸杞子中甜菜碱的含量测定方法,并优化了其提取工艺。

枸杞子中4种类胡萝卜素成分含量测定一测多评法的建立

目的 建立同时测定枸杞子中玉米黄质、β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸酯含量的方法。方法 枸杞子药材经正己烷-无水乙醇-丙酮-甲苯(10∶6∶7∶7,V/V/V/V)超声提取后,采用高效液相色谱法进行测定。以YMC C30为色谱柱,以甲醇-乙腈-水(81∶14∶5,V/V/V)为流动相A、二氯甲烷为流动相B进行梯度洗脱,柱温为20,流速为1.0 mL/min,检测波长为450 nm,进样量为20μL。以玉米黄质为参照物,计算β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸酯的相对校正因子,再以此计算上述成分的含量,并与外标法测定结果进行比较。结果 玉米黄质、β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸酯检测质量浓度的线性范围分别为0.119 4~2.983 8、0.121 7~1.521 6、0.285 9~5.718 8、8.460 5~211.513 3μg/mL(R^(2)均大于0.999);精密度、重复性、稳定性(16 h)试验的RSD均小于4%;平均加样回收率分别为103.34%、107.37%、105.64%、96.16%(RSD<5%,n=9)。β-胡萝卜素、β-隐黄素棕榈酸酯、玉米黄素双棕榈酸酯的平均相对校正因子分别为1.109、1.390、1.158;一测多评法与外标法所测上述成分含量的相对误差均在±1%之内。结论 本研究所建立的高效液相色谱法联合一测多评法准确、稳定,可用于枸杞子中4种类胡萝卜素成分的含量测定及质量控制。

气相色谱-质谱法测定美白祛斑类化妆品中的苯酚和氢醌

目的建立测定美白祛斑类化妆品中苯酚和氢醌的气相色谱-质谱方法。方法样品经甲醇超声提取,离心,微孔滤膜过滤,采用气相色谱-质谱法法测定。结果苯酚和氢醌在10～200μg·mL^(-1)浓度范围内线性良好(r=0.9999),检出限为氢醌0.01mg·kg^(-1)、苯酚0.03mg·kg^(-1),平均回收率为88.7%～104.6%,RSD为2.15%～4.09%。结论本法简便快速,结果准确可靠,可用于美白祛斑类化妆品中苯酚和氢醌的测定。

喉痛灵制剂中重金属及有害元素与禁用农药残留量测定

目的 检测喉痛灵片和喉痛灵颗粒中重金属及有害元素与禁用农药残留量。方法 采用电感耦合等离子体-质谱(ICP-MS)法测定喉痛灵制剂中铅、镉、砷、铜、钙元素,采用原子荧光(AFS)法测定制剂中汞元素,采用气相色谱串联质谱法(GC-MS/MS)和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法测定制剂中33种禁用农药残留量。结果 喉痛灵片和喉痛灵颗粒中均含有微量铅、砷、镉、铜、汞、钙,均未检出33种禁用农药。结论 喉痛灵片中重金属及有害元素均在安全限度范围内;部分批次喉痛灵颗粒中汞元素超出安全限度范围,有一定安全隐患,应引起重视。2种喉痛灵制剂中农药残留安全风险较低。

气相色谱法同时测定桑菊感冒片中α-蒎烯、β-蒎烯、(-)-薄荷酮和薄荷脑含量

目的建立GC-FID法同时测定桑菊感冒片中α-蒎烯、β-蒎烯、(-)-薄荷酮和薄荷脑的含量。方法采用HP-5石英毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm,0.25μm)程序升温,流速1.5 mL·min^(-1),分流比30∶1,进样量1μL。结果α-蒎烯、β-蒎烯、(-)-薄荷酮和薄荷脑分别在质量浓度0.256 8～25.68 mg·L^(-1)(r=0.999 5)、1.040～104.0 mg·L^(-1)(r=0.999 5)、1.643～164.3 mg·L^(-1)(r=0.999 5)和2.302～230.2 mg·L^(-1)(r=1.000)内线性关系良好,平均回收率分别为96.1%、96.4%、96.8%和96.7%,RSD分别为1.7%、1.9%、1.2%和2.3%。结论本方法可为桑菊感冒片的质量控制提供科学依据。

正相高效液相色谱法测定L-甲砜霉素

目的建立甲砜霉素原料及制剂中对映异构体L-甲砜霉素含量的测定方法。方法采用正相高效液相色谱法对甲砜霉素原料及制剂中对映异构体L-甲砜霉素含量进行测定。结果该方法专属性良好,片剂和胶囊剂中辅料无干扰,甲砜霉素与L-甲砜霉素的分离良好,L-甲砜霉素的检测限为0.1μg·mL-1,定量限为0.5μg·mL-1,在0.54~54.42μg·mL-1(r2=1.0000)范围内与峰面积呈良好的线性关系。结论本方法经方法学验证,操作简便、专属性好、准确度高,可有效控制L-甲砜霉素的含量。

HPLC法测定石龙清血颗粒中莫诺苷和马钱苷的含量

目的建立HPLC法同时测定石龙清血颗粒中莫诺苷、马钱苷的含量。方法采用Phenomenex Gemini C18(0.46×25 cm,5μm)色谱柱,乙腈-0.3%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长240 nm,柱温40℃,流速1.0 mL/min。结果莫诺苷和马钱苷的线性范围分别为0.062~0.776μg(r=0.9999)、0.070~0.878μg(r=1.0000);平均回收率(n=6)分别为100.8%、101.6%,RSD分别为2.85%、2.66%。结论此方法操作简便、准确,灵敏度高,重复性好,能有效控制石龙清血颗粒中山茱萸的质量。