热休克蛋白90对hERG-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)对人类ether-a-go-go相关基因(hERG)-A561V通道蛋白转运及通道功能影响的研究。方法构建野生型(WT)、突变型(A561V)、杂合型(WT/A561V)细胞模型,采用蛋白质印迹法检测各组细胞hERG及Hsp90蛋白表达差异。转染减表达空载(Itf NC)、Hsp90减表达(Hsp90-)、过表达空载(Ovp NC)或Hsp90过表达(Hsp90+)质粒至各细胞模型(即Itf NC组、Hsp90-组、Ovp NC组、Hsp90+组),另设不加载体的对照(Ctl)组,采用蛋白质印迹法检测各组细胞调控Hsp90前后hERG及Hsp90蛋白表达差异。采用免疫荧光法检测Hsp90调控前后杂合型细胞模型hERG及Hsp90蛋白定位表达情况。采用全细胞膜片钳技术检测调控Hsp90前后杂合型细胞模型hERG通道激活电流及尾电流密度。结果突变型、杂合型细胞模型Hsp90及hERG(135 kDa)蛋白表达水平均较野生型明显升高(均P<0.05)。野生型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)、hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),突变型细胞模型Hsp90+组hERG(135 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05),杂合型细胞模型Hsp90+组hERG(155 kDa)蛋白表达水平较Ctl组、Ovp NC组均明显升高(均P<0.05)。融合Hsp90和hERG蛋白后,Ctl组hERG表达于细胞膜、细胞质,Hsp90-组细胞膜上hERG蛋白表达减少,Hsp90+组细胞膜上hERG蛋白表达增多。与Ctl组比较,Hsp90+组Ikr曲线左移14.709,斜率因子k值未见明显变化。杂合型细胞模型Ctl组、Hsp90-组、Hsp90+组激活电流及尾电流密度均在50 mV处达到最高;杂合型细胞模型Hsp90+组在20、30 mV处的激活电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05),在30、40 mV处的尾电流密度均明显高于Ctl组、Hsp90-组(均P<0.05)。结论Hsp90在hERG-A561V通道蛋白折叠转运中起作用,而上调Hsp90可促进WT/A561V hERG的折叠转运,进而影响通道功能。

舒洛地特联合羟苯磺酸钙治疗高血压合并2型糖尿病肾病患者的效果及对碳水化合物反应元件结合蛋白和分泌型卷曲相关蛋白5水平的影响

目的探讨舒洛地特联合羟苯磺酸钙治疗高血压合并2型糖尿病肾病患者的效果及对碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)、分泌型卷曲相关蛋白5(Sfrp5)水平的影响。方法选取于2017年1月—2019年1月收治的高血压合并2型糖尿病肾病患者330例为研究对象,采用随机数字表法分为舒洛地特治疗组(1粒/次,2次/d)、羟苯磺酸钙治疗组(0.5 g/次,3次/d)及联合治疗组(舒洛地特胶囊1粒/次,2次/d和羟苯磺酸钙胶囊0.5 g/次,3次/d)3组,每组各110例,3组患者均在常规降血压、降血糖和基础性治疗基础上分别给予舒洛地特胶囊、羟苯磺酸钙胶囊以及两种药物联合治疗。连续治疗3个月后,比较3组患者临床疗效,同时比较各组患者治疗前后血压及血糖、肾功能、氧化应激指标、炎症因子水平、血管内皮功能以及ChREBP、Sfrp5表达水平变化情况。结果治疗后,联合治疗组患者临床治疗总有效率高于舒洛地特治疗组、羟苯磺酸钙治疗组(91.8%比72.7%比75.5%,χ^(2)=14.659,P=0.001)。治疗后,3组患者收缩压、舒张压以及空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、餐后2 h血糖(2hPBG)明显降低(P<0.05),3组患者肾功能明显改善,尿素氮、血肌酐、24 h尿白蛋白定量(24hUAE)下降,估算的肾小球滤过率(eGFR)上升;且联合治疗组上述指标改善程度高于羟苯磺酸钙治疗组、舒洛地特治疗组(P<0.05),舒洛地特治疗组上述指标改善优于羟苯磺酸钙治疗组(P<0.05)。治疗后,3组患者抗氧化能力(T-Aoc)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)上升;联合治疗组上述指标高于羟苯磺酸钙治疗组、舒洛地特治疗组,舒洛地特治疗组上述指标高于羟苯磺酸钙治疗组(均P<0.05)。治疗后,3组患者血清高敏C反应蛋白(hsCRP)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平下降;联合治疗组上述指标低于舒洛地特治疗组和羟苯磺酸钙治疗组,且苯磺酸钙治疗组低于舒洛地特治疗组(均P<0.05)。治疗后,3组患者ChREBP表达水平下降,Sfrp5表达水平上升;血流介导的血管舒张功能(FMD)升高,全血黏度降低(均P<0.05);且联合治疗组改善程度优于舒洛地特治疗组和羟苯磺酸钙治疗组,羟苯磺酸钙治疗组改善程度优于舒洛地特治疗组(均P<0.05)。结论舒洛地特联合羟苯磺酸钙治疗高血压合并2型糖尿病肾病患者可能通过有效改善患者血清ChREBP、Sfrp5表达水平以及炎症因子水平而改善患者肾功能,延缓血管病变。