骨髓间充质干细胞自体移植治疗心肌梗死的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)移植至缺血心肌后的增殖分化情况,对缺血心肌细胞的修复重建能力及心功能改善情况。方法将20只新西兰白兔随机分为骨髓间充质干细胞移植组(MSCs组,n=10)和对照组(n=10),采用结扎冠状动脉左前降支(LAD)制备心肌梗死模型,2周后分别将Dil标记的1×106个细胞悬液400μl或等量L-DMEM培养基用微量注射器注入梗死灶边缘,于建模前、建模后2周、细胞移植后2、4周采用多普勒超声心动图检测左心室收缩期末内径(LVESD)、左心室舒张期末内径(LVEDD),计算左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)评价心脏收缩功能,同时进行心肌声学造影评价心肌组织的血流灌注情况。细胞移植后8周处死所有动物,病理学检查移植细胞在梗死区的生长状况。结果多普勒超声心动图检测结果显示:两组动物建模前、建模后2周LVEF、LVFS差异无统计学意义(0.72±0.08vs.0.71±0.04,0.56±0.11vs.0.55±0.09;0.35±0.06vs.0.35±0.04,0.24±0.08vs.0.23±0.03,P>0.05),细胞移植后2、4周MSCs组LVEF、LVFS值均明显高于对照组(0.71±0.05vs.0.60±0.05,0.72±0.07vs.0.62±0.08;0.34±0.03vs.0.29±0.01,0.35±0.06vs.0.27±0.05,P<0.05);病理学检查见自体MSCs移植8周后存活于梗死心肌中,表达肌细胞特异性标志,并且能显著增加瘢痕区毛细血管密度(38.6±7.6/mm2vs.21.4±3.9/mm2,P<0.05),心肌声学造影亦显示梗死局部血流灌注MSCs组较对照组明显改善。结论自体MSCs移植缺血心肌中可向心肌细胞分化,增加心肌血流灌注,改善心脏收缩功能。

自体心房细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的探讨自体心房细胞移植治疗心肌梗死的可能性。方法选实验用小型猪12头,结扎左前降支远端,制造心梗模型。同时取左心耳少量组织,酶解后体外培养扩增心房细胞。28d后将实验猪随机分为实验和对照两组。实验组将体外培养扩增的自体心房细胞移植至心梗区,对照组移植不含细胞的培养液。移植前和移植后4周,超声心动图分别测定两组的左室功能,进行统计学分析,同时检查心梗区移植细胞的存活情况。结果体外培养扩增得到的是包含心房肌细胞、平滑肌细胞、内皮细胞等的混合细胞,移植至心梗区后可显著提高射血分数值。心梗区免疫组化染色检查可见移植的心房细胞。结论自体心房细胞移植至心梗区可明显改善心功能,是较理想的心肌细胞移植备选细胞。

腹腔内应用重组人血管内皮抑制素治疗艾氏腹水瘤的实验研究

目的观察重组人血管内皮抑制素对艾氏腹水瘤(EAC)小鼠的治疗作用,并初步探讨其相关作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同终浓度的重组人血管内皮抑制素(0、5、10、20、40μg/ml)对体外培养的EAC细胞的抑制率;利用EAC细胞建立腹水瘤小鼠模型,将54只腹水瘤小鼠随机分为3组:A组(重组人血管内皮抑制素8 mg/kg,每12 h腹腔注射1次)、B组(重组人血管内皮抑制素8 mg/kg,每24 h腹腔注射1次)、C组即对照组(生理盐水0.2 ml/只,每12 h腹腔注射1次)。详细记录小鼠腹水量、体重及生存期;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠腹水血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2);并通过尾静脉注射伊文思蓝染液间接反映微血管通透性。结果体外实验显示,不同浓度的重组人血管内皮抑制素对EAC未见抑制作用;体内试验显示,重组人血管内皮抑制素组(A组和B组)小鼠的体重、腹水量及腹水中VEGF和MMP-2浓度均低于对照组,生存时间较对照组延长(P<0.05);3组小鼠血管通透性、A组与B组之间的各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论腹腔内给药治疗小鼠EAC疗效较好,其作用机制可能与抑制VEGF及MMP-2的生成有关,提示重组人血管内皮抑制素在临床上治疗恶性腹水有较好的应用前景。

CD4^+IL-9^+T细胞在实验性动脉粥样硬化中的作用

目的探讨CD^4+IL-9^+T细胞(Th9)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化模型中表达变化及意义。方法 8周龄ApoE^(-/-)小鼠高脂饮食饲养,同周龄C57BL/6对照小鼠普通饮食饲养,至32周龄后,测定血清中血脂含量;小鼠心脏主动脉根部石蜡切片,常规HE染色,观察动脉粥样硬化斑块的组织学特点;流式细胞术检测脾脏Th9细胞表达;ELISA法测定血清白介素(IL)-9和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的浓度。结果 32周龄时,ApoE^(-/-)小鼠血脂水平升高,主动脉根部出现明显脂质斑块,其脾脏Th9细胞表达率、血清IL-9和ox-LDL浓度均明显高于同周龄C57BL/6小鼠(P<0.01)。Th9表达率、IL-9浓度与ox-LDL浓度均呈显著正相关性(P<0.01)。结论 Th9细胞及其分泌的IL-9在动脉粥样硬化发生中发挥重要作用,Th9细胞可成为动脉粥样硬化发病机制研究和干预治疗的重要靶点。

基于PBL模式的实验诊断学多元化教学方法探讨

实验诊断学是连接基础医学与临床医学的重要桥梁课程,内容繁多、专业性强,是临床理论教学中的一个难点.传统多元化教学法在当前教学中具有较大弊端,忽视了学生学习的主观能动性,不利于学生临床思维和创新能力的培养.以问题为基础的学习法（PBL）是一种新型教学模式,强调学生的主动学习,可以弥补传统教学的缺点.

CD4^＋CD25^＋CD127^low识别人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的优势

目的:探索可用于检测人外周血中CD4+CD25+Treg细胞的最佳标记物。方法:以52名健康人和47名非血液系统肿瘤患者为研究对象,采用多色免疫荧光素标记和多参数流式细胞术同时检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞,并以经典指标CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+为标准,分析和比较CD4+CD25+CD127low作为识别CD4+CD25+Treg细胞的可行性及其优势。结果:健康人和肿瘤患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞占CD4+T细胞百分比分别为(1.769±0.682)和(2.958±1.392);(2.905±1.772)和(5.128±2.227)以及(5.396±1.306)和(7.175±2.565)。三者呈相同的趋势,即肿瘤患者组>健康人组,且三者之间呈显著正相关(P<0.05)。用两种不同标记法高纯度分选CD4+CD25high和CD4+CD25+CD127lowT细胞群后,FoxP3阳性率分别为90.9和92.7。结论:CD4+CD25+CD127low三标记法可以帮助识别CD4+CD25+Treg和部分激活的CD4+T细胞,提高CD4+CD25+Treg细胞的可检出数量,并且不影响细胞活性度,是反映CD4+CD25+Treg细胞更理想的指标。

维持血液透析患者微炎症与营养及血脂的关系

目的探讨维持血液透析(MHD)患者微炎症与营养及血脂的关系。方法 39例MHD患者按血超敏C反应蛋白(hs-CRP)分为高CRP组(≥12 mg/L,19例)和低CRP组(<12 mg/L,20例)。比较两组营养状况及血脂水平差异。结果①高CRP组血白蛋白水平较低CRP组低[(42.14±2.59)g/L vs(44.20±3.32)g/L,P<0.05];②高CRP组血总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较低CRP组高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平较低CRP组低(P<0.05);③hs-CRP与TC(rs=0.615 7,P<0.01)、TG(rs=0.595 6,P<0.01)、LDL-C(rs=0.433 1,P<0.01)呈正相关。结论 MHD患者微炎症与白蛋白水平、致动脉硬化脂代谢紊乱相关。

胃癌中DAPK基因启动子区CpG岛高甲基化的研究

目的:探讨死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)基因高甲基化与胃癌的发生以及临床病理特征之间的联系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)法分别检测66例胃癌患者的肿瘤组织、癌旁正常组织、手术前外周血浆以及37例术后血浆中DAPK基因启动子的甲基化状况,以20例健康人的外周血浆和胃镜活检正常胃组织作为对照。结果:胃癌组织中有66.7%(44/66)存在DAPK基因的异常甲基化,显著高于相应的癌旁正常组织[10.6%(7/66)],差异有统计学意义(P<0.001)。术前外周血浆中DAPK基因甲基化阳性率为16.7%(11/66);37例同时有胃癌根治术前后血浆标本的患者中,5例术前血浆甲基化阳性,术后全部转阴。而20例健康人的外周血浆和胃镜活检组织中均未检测到该基因甲基化。结论:DAPK基因在胃癌患者肿瘤组织和外周血浆中的高甲基化可能为胃癌的诊断以及临床预后评估提供有益的线索,手术后血浆中DAPK甲基化状态的变化可能与手术治疗有关。

397例急性白血病细胞遗传学与FAB分型相关性研究

本研究探讨急性白血病的细胞遗传学改变,了解染色体核型异常与急性白血病FAB分型的关系及其对预后因素的影响。397例急性白血病患者于治疗前抽取骨髓标本,采用短期细胞培养法制备染色体标本,应用G显带技术进行染色体核型分析。结果显示,397例急性白血病中78例无分裂相,319例可供染色体核型分析的患者中染色体核型异常175例(占54.9%)。在急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓系白血病(AML)和急性混合细胞白血病(AMLL)3种类型的白血病患者中,染色体核型异常分别为33/120例(占27.5%)、129/252例(占51.2%)和13/25例(占52.0%)。超二倍体41例(占23.4%),亚二倍体22例(占12.5%),正常二倍体112例(占64.0%)。AML染色体核型异常中与FAB分型相关的特异性染色体重排74/129例(占57.4%)。结论:大约55%左右的急性白血病存在克隆性染色体异常,一些特异性染色体异常改变是急性白血病的细胞遗传学特征,与急性白血病的FAB分型有明显相关性,染色体检查和分子遗传学方法相结合,对于白血病的诊断、分型、治疗和预后都具有重要意义。

免疫组化检测非小细胞肺癌ALK融合基因表达异常

目的探讨免疫组化(immunohistochemistry,IHC)在检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因表达异常的准确性,并观察ALK阳性患者的临床病理特征。方法收集NSCLC患者石蜡标本234例,使用兔单克隆D5F3抗体行ALK蛋白IHC检测,对其中ALK阳性标本采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测验证。结果 234例NSCLC中,IHC检测ALK融合基因蛋白阳性率为8.97%(21/234),经RT-PCR检测验证有14例存在ALK基因融合,阳性率为5.98%(14/234);与组织学类型、年龄、分期相关(P<0.05),与患者性别、吸烟史、肿瘤分化程度无关。21例标本进行RT-PCR验证,IHC(+)时二者符合率为0,当IHC()或组织化学评分>120时,二者符合率为100%。结论尽管IHC检测ALK融合基因蛋白表达存在一定假阳性,但当IHC()或组织化学评分>120时与其他辅助检查一致性高具有诊断价值,是较为可靠的ALK筛查方法。IHC筛查及随后RT-PCR检测验证是发现ALK阳性肺癌经济可行的辅助诊断。

不同糖耐量者外周血单核细胞中核因子-κB的活化及意义

目的比较不同糖耐量人群外周血单核细胞中核因子-κB(NF-κB)表达水平的变化,探讨2型糖尿病、糖调节受损与炎症的关系。方法按口服葡萄糖耐量试验结果,将研究对象分为正常糖耐量(NGT)组、糖调节受损组、A组(糖尿病病程<5年)和B组(糖尿病病程≥5年)。采用流式细胞仪、竞争性酶联免疫吸附法检测上述对象外周血单核细胞中NF-κB的表达水平,并与糖脂代谢指标、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)作相关性分析。结果外周血单核细胞中NF-κB的表达水平按分组顺序逐步升高,相关性分析显示,其与空腹血糖、糖负荷2h后血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、HOMA-IR呈正相关,与HOMA-β呈负相关。结论2型糖尿病在前期糖调节受损阶段就存在炎症状态,糖脂代谢异常及胰岛素抵抗可能参与了炎症发生发展。

脓毒症患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和Thl7细胞检测的临床意义

目的探讨脓毒症患者外周血辅助性T细胞（THelper，Th）17及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）表达的变化和检测的临床意义。方法将2008—01—2010—11在我医院ICU住院的脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为三组：脓毒症组14例、严重脓毒症组15例和脓毒症休克组11例。再将脓毒症患者根据28d预后分为死亡组（D，n＝11）和存活组（S．n=29）。所有人选的40例脓毒症患者在入选当天行流式细胞术检测血中Thl7细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例。比较脓毒症组、严重脓毒症组和脓毒症休克组患者血中Thl7细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例变化，以及生存组和死亡组上述指标的差异。分析CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和Thl7细胞免疫平衡紊乱与病情严重程度的关系。同时选取20例健康人为对照组。结果健康对照组Thl7细胞表达率为（0．91±0．38）％，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达率为（0．39±0．23）％；脓毒症患者较正常对照组这两项指标明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。其中脓毒症组分别为（2．09±0．53）％和（1．72±0．59）％；严重脓毒症组为（3．90±0．80）％和（2．72±0．22）％；脓毒性休克组为（1．85±0．35）％和（3.55±0．51）％。Thl7表达率严重脓毒症组最高，与其他两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。而脓毒症休克组与脓毒症组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达率脓毒症休克组最高，严重脓毒症组次之，脓毒症组最低，三组间两两比较差异有统计学意义（P〈0．05）。死亡组血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达率明显高于存活组[（3．03±0．91）％和（2．43±0．79）％，P〈0．05]，Thl7细胞表达率明显低于存活组[（2．01±0．66）％和（2．97±1．15）％，P〈0．05]。结论Thl7细胞和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在脓毒症的免疫发病机制中可能起着重要作用。检测脓毒症患者外周血．thl7细胞和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞能够反映机体的细胞免疫状态，对评估患者预后有重要临床价值。

慢性阻塞性肺疾病稳定期患者和肺功能正常吸烟者外周血中Th17细胞的表达及意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者和肺功能正常吸烟者外周血中Th17细胞的表达及意义。方法选取不吸烟肺功能正常者(A组)、吸烟肺功能正常者(B组)、轻中度(C组)及重度(D组)COPD稳定期患者为研究对象。流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞的百分比,ELISA检测血浆及PBMC刺激培养液中白介素(IL)-17的水平。结果 B、C和D组外周血Th17细胞、IL-17及均PBMC刺激培养液中IL-17水平高于A组(P<0.01);C组和D组外周血Th17细胞和IL-17均高于B组(P<0.01);D组外周血及PBMC刺激培养液中IL-17水平均高于C组(P<0.01);D组PBMC刺激培养液中IL-17水平高于B组(P<0.01)。C、D组血浆及PBMC刺激培养液中IL-17水平与第一秒钟用力呼气容积(FEV1)/预计值之间呈负相关;各研究组外周血和PBMC刺激培养液中IL-17水平均与外周血Th17细胞水平呈正相关;所有吸烟者外周血Th17细胞水平与吸烟年数呈正相关,C、D组外周血Th17细胞水平与吸烟年数无相关性。结论 Th17细胞及IL-17在COPD稳定期患者和肺功能正常吸烟者外周血中表达增加。肺功能正常吸烟者外周血Th17细胞水平与吸烟年数相关;COPD稳定期患者外周血IL-17与FEV1/预计值呈负相关,Th17细胞与FEV1/预计值及吸烟年数无相关性。

急性冠状动脉综合征患者外周Th17细胞水平检测及临床意义

目的探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中辅助性T细胞17(Th17)的异常与疾病的关系。方法采用流式细胞术检测18例胸痛综合征(CPS)、17例稳定性心绞痛(SA)、21例不稳定性心绞痛(UA)、20例急性心肌梗死(AMI)患者的外周血Th17细胞水平。应用酶联免疫吸附方法检测其外周血Th17相关细胞因子白细胞介素(IL)-17的表达。结果 AMI组和UA组外周血CD4+IL17+细胞占CD4+T细胞比例分别为(4.04±0.93)%、(3.07±0.50)%,明显高于SA组的(1.45±0.35)%和CPS组的(1.04±0.24)%(P<0.01),SA组的CD4+IL-17+细胞占CD4+T细胞比例较CPS组也有明显增加。AMI组和UA组IL-17水平分别为(55.91±5.13)pg/ml、(46.65±8.72)pg/ml,较SA组(17.13±4.13)pg/ml和CPS组(12.28±2.03)pg/ml明显增加。结论 ACS患者外周血Th17细胞水平增加,IL-17水平相应增加,Th17细胞可能参与动脉粥样硬化斑块不稳定和ACS的发病。

根皮苷对糖基化低密度脂蛋白诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表达乳脂肪球表皮生长因子8的影响

目的研究根皮苷(PHL)对糖基化低密度脂蛋白(gly-LDL)诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞(RMVEC)表达乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)的影响,探讨PHL治疗糖尿病视网膜病变(DR)的作用及其机制。方法体外培养大鼠RMVEC,分别进行不同浓度的gly-LDL与联合PHL+gly-LDL的处理。采用TUNEL方法观察不同处理条件下大鼠RMVEC的细胞凋亡。利用蛋白质免疫印迹方法(Western blotting)检测大鼠RMVEC表达MFG-E8的变化。结果与对照组相比,gly-LDL诱导大鼠RMVEC发生明显的细胞凋亡形态学变化,凋亡细胞的比例显著增多达到36.52%(P<0.01),预先经PHL(800μmmol/L)孵育后,细胞凋亡明显减少至20.45%(P<0.01);与对照组(蛋白表达灰度值0.290±0.008)比较,gly-LDL诱导组蛋白MFG-E8表达明显降低,并呈现浓度依赖性(蛋白表达灰度值分别为0.215±0.009、0.165±0.002、0.117±0.014与0.092±0.004,P<0.01);经PHL预处理后,gly-LDL诱导的MFG-E8表达明显升高,伴随PHL给药浓度的增加,MFG-E8的表达逐渐上调,差异有统计学意义(蛋白表达灰度值分别为0.343±0.008、0.373±0.002与0.404±0.006,P<0.01)。结论 PHL可能通过显著改善蛋白MFG-E8的表达,从而抑制gly-LDL诱导的大鼠RMVEC的细胞凋亡,实现对DR的保护作用。

小干扰RNA抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43的表达

目的:利用小干扰RNA(siRNA)抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43(Cx43)的表达和检测细胞间间隙连接通讯功能,探讨该技术在阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接和阴茎勃起功能研究中的应用。方法:利用Ambion公司设计软件,构建靶向人Cx43基因的siRNA重组质粒,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞48h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测Cx43基因和蛋白的相对表达水平、划痕标记荧光染料传输技术检测细胞间间隙通讯功能,并分别与siRNA阴性对照、空白对照组比较。结果:酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功。siRNA重组质粒转染细胞后的Cx43 mRNA和蛋白相对表达水平分别为(0.45±0.08)%、(0.56±0.06)%,与siRNA阴性对照组(0.72±0.04)%、(0.80±0.08)%和空白对照组(0.74±0.09)%、(0.77±0.11)%相比,差异均有显著性(P(0.05);转染后的细胞间间隙连接通讯功能也显著降低。结论:siRNA能有效抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞Cx43的表达和阻断间隙连接介导的间隙连接通讯功能。

sARMS-PCR检测非小细胞肺癌肿瘤组织中KRAS、BRAF基因突变研究

目的针对非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织标本鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因(KRAS)和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)驱动基因突变使用特异引物双扩增实时蝎形探针扩增阻滞突变系统(sARMS-PCR)检测的可行性;了解KRAS和BRAF基因突变患者临床病理特征,为NSCLC患者个体化治疗提供理论依据。方法收集89例NSCLC患者肿瘤组织甲醛固定石蜡包埋标本(FFPE),采用FFPE样品DNA分离试剂盒(离心柱型)提取DNA,使用sARMS-PCR同时进行KRAS及BRAF基因突变检测。结果1 KRAS基因突变21例(21/89);其中KRAS基因7种热点突变中,检出6种热点突变,均位于第12、13位密码子,1例同时检出存在G12D及G12V位点突变,1例同时检出存在G12C及G12V位点突变;未发现G12S突变型;2 BRAF基因突变1例(1/89),突变位点为V600E,为女性,黏液腺癌;3未见KRAS和BRAF基因同时突变现象。结论临床使用sARMS-PCR技术检测NSCLC患者KRAS和BRAF基因突变有较强敏感性,且石蜡组织标本取材方便,可以作为两种基因的临床检测方法;KRAS和BRAF基因突变与年龄、吸烟史、病理分型等均无明显相关性,KRAS基因突变与性别相关,男性高于女性;KRAS与BRAF基因是独立存在的。

异基因造血干细胞移植后CD4^+CD25^+调节性T细胞与移植物抗宿主病关系的研究

目的研究异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后患者CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)与急性移植物抗宿主病(aGVHD)、慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的关系。方法采用流式细胞术检测50例Allo-HSCT后患者及24例健康者外周血CD4+CD25+Treg在CD4+T细胞中的百分含量。结果50例患者均获得造血功能重建。正常对照组与无移植物抗宿主病(GVHD)组CD4+CD25高度敏感(CD4+CD25high)、CD4+CD25+CD127低度敏感(CD4+CD25+CD127low)T细胞百分比分别为(2.185±0.582)%和(6.365±2.155)%vs(2.320±2.813)%和(7.515±5.457)%(P>0.05)。aGVHD组为(1.270±1.385)%和(4.575±3.900)%,低于正常对照组与无GVHD组(均P<0.01);其中,Ⅱ~Ⅳ度aGVHD组显著低于Ⅰ度aGVHD组(P<0.01)。cGVHD组为(1.375±0.812)%和(5.620±1.770)%,低于无GVHD组(P<0.01);其中,广泛性cGVHD组低于局限性cGVHD组(P<0.05)。结论CD4+CD25+Treg的水平与Allo-HSCT后GVHD的发生及严重程度有密切关系;通过监测CD4+CD25+Treg水平对临床早期诊断GVHD及判断GVHD预后、指导免疫调节剂的应用具有重要意义。

人工关节假体周围感染与无菌性松动界膜组织中人β-防御素3的表达差异分析

目的探讨股骨颈骨折的滑膜组织、人工关节无菌性松动和假体周围感染的界膜组织中人β-防御素-3(HBD-3)的表达差异。方法 30例患者,其中因假体周围感染进行髋关节翻修的患者、因无菌性松动接受髋关节翻修的患者以及因股骨颈骨折接受髋关节置换的患者各10例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时定量聚合酶链反应(Realtime PCR)、免疫组化染色分析及免疫印迹分析(Western blot)进行假体周围界膜组织或滑膜组织中HBD-3表达水平的检测并进行统计学分析。结果 Realtime PCR发现,假体周围感染后界膜组织中HBD-3 m RNA的表达,明显高于无菌性松动界膜组织和股骨颈骨折滑膜组织中HBD-3的表达。与创伤性滑膜组织相比,细菌感染刺激引起界膜组织中HBD-3的释放增加约5倍以上;与非感染性的无菌性松动界膜组织相比,HBD-3的释放增加约2倍以上。免疫组化染色显示局部细菌炎症刺激条件下,与无菌性松动界膜组织相比,感染导致界膜组织中的成纤维细胞和成骨细胞分泌HBD-3增加。Westenblot显示,与非炎症组相比,葡萄球菌在局部定植引起组织中HBD-3蛋白水平显著提高。结论 HBD-3在感染性界膜组织和无菌性松动界膜组织之间表达差异显著。未来,HBD-3一个可行的临床应用可以通过术中界膜组织的病理活检,来区别人工关节假体周围感染和无菌性松动。

体外扩增脐血与骨髓间充质干细胞共移植对NOD/SCID鼠造血重建的研究

目的探讨体外扩增脐血与骨髓间充质干细胞(MSC)移植对NOD/SCID鼠早期造血重建的影响。方法在无血清无基质培养基(SCF、FL、TPO、IL-3)中体外扩增7d,MSC培养传至第3代,移植物注射给亚致死量照射NOD/SCICD鼠,FCM分析移植后2周小鼠骨髓人CD45+细胞表达率。结果体外扩增脐血、MSC与未扩增脐血共移植后,小鼠骨髓CD45+细胞比率提高3·55倍,差异有显著性(P<0·05),部分小鼠血小板恢复照射前水平。结论此3种移植物共移植可能促进NOD/SCICD小鼠早期造血重建和血小板恢复。