无机诱导因子骨组织工程支架材料体外细胞相容性的实验研究

目的:细胞毒性和细胞相容性是生物材料应用于临床首先必须面对的问题。通过对无机诱导因子骨组织工程支架材料的体外实验,来研究其细胞毒性和细胞相容性,为其临床应用作前期准备。方法:将生长状态良好的人骨髓基质细胞与无机诱导因子支架材料浸提液共同培养,通过镜下观察细胞形态、MTT比色法、流式细胞仪检测法评价生物材料浸提液对人骨髓基质细胞生长和增殖的影响;并将人骨髓基质细胞接种于无机诱导因子支架材料上,扫描电镜观察材料细胞复合物生长状况。结果:人骨髓基质细胞能够在无机诱导因子支架材料上生长,支架材料对体外培养的人骨髓基质细胞的形态不构成损害,对细胞的生长和增殖无明显抑制作用。结论:无机诱导因子支架材料具有良好的细胞生物学相容性,是一良好的组织工程骨构建支架材料。

利福霉素逆转多药耐药细胞系A_(549)/ADM的实验研究

目的:探讨利福霉素逆转人肺腺癌细胞多药耐药的发生及逆转机制。方法:采用流式细胞仪检测敏感细胞系、耐药细胞系的P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达;MTT法检测其对多种化疗药物的耐药程度及利福霉素对其耐药的逆转效果;采用细胞内阿霉素含量的方法测定利福霉素对多药耐药的逆转作用。结果:多药耐药细胞系A549/ADM的P-gp、MRP表达分别为74.8%和61.2%;加用利福霉素后,A549/ADM细胞内ADM的含量显著增加,A549/ADM对ADM敏感性增加了2.51倍,对VCR、DDP及VP-16敏感性分别增加7.38倍、1.29倍、2.86倍。结论:A549/ADM对多种常见肿瘤化疗药物表现不同程度耐药,其耐药性可能与P-gp、MRP高表达有关;利福霉素对A549/ADM的多药耐药有一定的逆转作用。

案例和启发式教学在本科实验诊断学课程中的应用和体会

实验诊断学是连接医学检验学和临床医学的一座桥梁。提高临床专业本科生的检验学知识背景,通过案例和启发式教学,使其了解实验诊断学在临床实践中的重要性,对提高学生学习积极性和临床综合能力具有重要意义。

血小板无力症的临床和实验特点(附3例分析)

目的分析总结血小板无力症（GT）患儿的临床特征和实验室资料。方法1990年1月～2006年1月经我院确诊的3例血小板无力症回顾总结分析。结果3例患儿男女发病率无明显差异，自幼即发生出血倾向，临床表现主要为出血时间延长、血快收缩异常，血小板功能异常。结论血小板无力症是Ⅱh／Ⅲa表达量减少或结构异常引起的一种罕见的遗传性出血疾病。

浅谈实验诊断学的教学体会

实验诊断学的教学在整个医学教育和学生临床综合能力的培养中具有举足轻重的地位。教师应积极探索各种教学方法和手段,不断创新,努力提高实验诊断学的教学效果,促进医学临床和医学科研人才的培养。

再生障碍性贫血患者T细胞亚群检测的临床意义

本研究探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血T细胞亚群的变化及其与AA发病、免疫抑制治疗之间的关系;为AA患者合理选择治疗方案提供依据。以88例临床确诊为AA、并分别接受常规和常规联合免疫抑制治疗的患者为对象,采用三色免疫荧光抗体标记法和流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群及CD4+和CD8+比值,参考正常对照组水平将患者分为比值正常型、比值倒置型和比值超高型3个免疫亚型,分析和比较各亚型与病情、疗效之间的关系。结果表明:CD4+/CD8+比值正常型占39.8%、比值倒置型占44.3%、比值超高型占15.9%。免疫亚型、治疗方法与总有效率的关系为:单独常规治疗时,3个亚型组之间疗效无明显差异;当联合免疫抑制治疗时,比值正常型患者的总有效率与常规治疗相比无显著改变,而比值倒置型及免疫异常型(比值倒置型+比值超高型)患者有效率较同组常规治疗疗效均显著提高(84.2%vs45.5%及82.6%vs42.8%,p值均<0.05),也显著高于比值正常型患者(84.2%及82.6%vs52.6%,p值均<0.05)。结论:大多数AA患者存在严重的CD4+和CD8+比值失调,CD4+/CD8+异常既可表现为降低,也可以是异常增高,AA发病机制与免疫异常有密切相关性;T细胞亚群检测对临床了解病情和发病机制、合理选择治疗方案、提高诊断和治疗水平具有重要价值。

五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠精子线粒体膜电位及超微结构影响

目的:研究五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠精子线粒体膜电位(MMP)水平及线粒体超微结构的影响。方法:取体重为200～220 g雄性SD大鼠60只,随机分成正常组,模型组,对照组(黄精赞育胶囊组),五子衍宗丸低、中、高剂量组,除正常组外,其他各组大鼠灌服雷公藤多苷[30 mg/(kg.d)],连续8周,制备少弱精子症模型。造模结束后,正常组、模型组给予等容量蒸馏水[10 ml/(kg.d)],对照组给予黄精赞育胶囊溶液[3.01 g/(kg.d)],五子衍宗丸各组分别给予水提液,低剂量组[2.30 g生药/(kg.d)],中剂量组[4.60 g生药/(kg.d)],高剂量组[9.20 g生药/(kg.d)],连续30 d。末次给药后30 min,采用荧光流式细胞技术(JC-1染色)测定精子MMP水平(JC-1+%),并通过透射电镜观察精子线粒体超微结构的改变。结果:①MMP:JC-1+%和强度分别为:正常组70.80±4.92、4 360±945;模型组33.77±6.19、1 4685±496;对照组56.34±10.35、3 277±895;五子衍宗丸低剂量组40.80±10.40、2 016±767;中剂量组59.40±6.51、3 897±643;高剂量组60.71±7.81、3 371±6467。造模各组大鼠精子线粒体JC-1+%及强度均明显下降,与正常组比较差异有显著性意义(P均<0.05);连续给药30 d后,给药各组均能明显提高精子MMP,增加JC-1+%,除低剂量组外,其他用药各组与模型组比较差异有显著性意义(P均<0.05)。②精子线粒体超微结构:雷公藤造模后,精子外膜松散、变性,线粒体肿胀、大小不一、线粒体膜不完整,轴丝结构不清或出现断裂。给予五子衍宗丸30 d后,精子外膜及线粒体膜结构完整,减少线粒体肿胀,轴丝及微管结构基本正常。结论:雷公藤多苷能降低精子MMP水平,破坏线粒体的结构。五子衍宗丸能明显提高少弱精子症模型大鼠精子MMP水平,减轻精子线粒体结构损伤。保护精子线粒体结构与功能的完整是五子衍宗丸治疗少弱精子症的机制之一。

丹皮酚诱导K_(562)细胞凋亡的研究

目的 探讨丹皮酚 (Paeonol,Pae)对K562 细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的K562 细胞的增殖抑制作用 ,通过HE染色和流式细胞仪定性和定量分析Pae的诱导凋亡作用。结果 Pae在 7 81～2 5 0mg·L-1浓度范围内对K562 细胞的增殖均有抑制作用 ,呈现明显的剂量依赖效应关系。HE染色光镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变。Pae在 7 81、15 6 3、31 2 5、6 2 5及12 5mg·L-1浓度下作用 2 4h均可诱导K562 细胞凋亡 ,其凋亡率分别为 10 0 1%、 12 4 6 %、 17 10 %、 2 9 18%和34 16 % ,有明显的剂量效应关系 ,Pae 6 2 5、2 5、10 0mg·L-13种浓度分别作用于K562 细胞 6、12及 2 4h。发现以上各种浓度在 6h即可诱导细胞凋亡 ,作用时间越长 ,凋亡率越高 ,有明显的时间效应关系。结论 Pae能抑制K562

成人骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的研究

目的研究成人骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)体外分化为血管内皮细胞的能力并探讨其诱导条件。方法分离成人骨髓单个核细胞,经贴壁法获取MSCs。所获细胞分4组进行诱导组1、2以5×103/cm2细胞密度接分别接种于含2%和15%胎牛血清的L-DMEM培养基;组3、4以5×104/cm2细胞密度分别接种于上述两种血清浓度的培养基,各组细胞经血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)辅以牛脑提取物的诱导,对照组为正常传代培养的MSCs。在诱导的第14、21天分别测定表面分子CD34、VEGFR-2、CD31和因子相关抗原(factor-relatedantigen,又称vonWillebrandfactor,vWF)以及体外成血管实验对分化细胞进行鉴定,同时测定不同诱导条件下的细胞增殖指数(proliferationindex,PI)。结果组3细胞经诱导后,内皮系表面分子CD34、VEGFR-2、CD31、vWF于第14天均有不同程度表达,分别为8.5%、12.0%、40.0%、30.0%,其中CD34、VEGFR-2在第21天表达上调,为15.5%、20.0%,余各诱导组细胞未表达上述表面分子;诱导后的组3细胞呈低增殖状态(PI值约为10.4%),在半固体培养基中还可形成血管腔样结构。结论从成人骨髓中分离培养的MSCs,在较高细胞接种密度和低增殖状态下,经VEGF、牛脑垂体提取物诱导后,可分化为血管内皮细胞,可作为治疗性血管生成及组织工程理想的种子细胞。

急性心肌梗死与不稳定型心绞痛患者血栓前体蛋白和肌酸激酶的检测

为了解检测血栓前体蛋白对急性冠状动脉综合征转归的早期诊断价值 ,5 1例临床确诊冠心病患者分为不稳定型心绞痛和急性心肌梗死两组 ,采用酶联免疫吸附法检测各组血浆中血栓前体蛋白含量 ,采用干化学法同步检测患者血清磷酸肌酸激酶及其同工酶。结果发现 ,急性心肌梗死组 2 5例患者血栓前体蛋白均值为 9.9± 3.9mg L ,不稳定型心绞痛组 2 6例患者血栓前体蛋白均值为 2 .6± 1.7mg L ,前者明显升高 ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1) ;急性心肌梗死组磷酸肌酸激酶均值为 5 95± 4 32u L ,磷酸肌酸激酶同工酶均值为 10 1± 74u L ,不稳定型心绞痛亚组磷酸肌酸激酶均值为 137± 4 0u L ,磷酸肌酸激酶同工酶均值为 10± 7u L ,前者亦明显升高 ,差别均有显著意义(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结果提示 。

丙泊酚在腹腔镜手术中对内源性一氧化氮代谢的影响

目的 研究不同剂量丙泊酚对内源性一氧化氮 (NO)代谢的影响 ,并对其机制进行探讨。方法 42例择期腹腔镜妇科手术病人 ,据术中丙泊酚用量随机分为三组 :对照组 (A组 ) ,不用丙泊酚 ;亚临床剂量组 (B组 ) ,丙泊酚 1mg·kg-1·h-1;临床剂量组 (C组 ) ,丙泊酚 3mg·kg-1·h-1。分别于二氧化碳 (CO2 )气腹前、气腹后 10、30、6 0分钟抽取动脉血行血气分析 ,同期测定静脉血浆NO-2 /NO-3 水平。结果 三组气腹后 30、6 0分钟 ,A组PaCO2 、TCO2 、NO-2 /NO-3 水平均明显高于气腹前(P <0 0 5 ) ,C组明显低于A或B组 (P <0 0 1)。结论 临床剂量丙泊酚可以明显减少内源性NO的氧化代谢 。

重度烟雾吸入致大鼠急性肺损伤的免疫应答及其机制探讨

目的 分析重度烟雾吸入致吸入性急性肺损伤（ALI）对大鼠肺自然免疫及特异性免疫反应。方法 分别复制一氧化碳（CO）浓度为2×10^-3（低浓度）和4×10^-3（高浓度）重度烟雾吸入致大鼠吸入性ALI模型。观察染毒后0～24h大鼠肺组织病理学变化；检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中致炎及抗炎细胞因子的浓度；用流式细胞仪检测外周血及BALF中淋巴细胞亚群数，BALF中CD45^＋淋巴细胞和非淋巴细胞数量以及CD4^＋／CD8^＋变化。结果 肺组织病理学检查证实染毒后可致明显肺损伤。染毒2hBALF中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）呈一过性升高，高浓度组较低浓度组更明显，之后下降；4h白细胞介素-6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-7）开始升高，其中IL-6低浓度组较高浓度组明显，IFN-γ高浓度组较低浓度组明显，至12h达高峰，24h开始下降，但仍高于正常对照组水平（P〈0．05或P＜0．01）；6～24hIL-10与正常对照组比较均显著升高，尤以24h明显（P〈0．05或P＜0．01）。外周血及BALF中CD4^＋、CD8^＋、自然杀伤细胞、B细胞及总T细胞均较正常对照组明显下降（P〈0．05或P＜0．01）。BALF中CD45^＋淋巴细胞数和CD4^＋／CD8^＋均较正常对照组明显减少，非淋巴细胞数较正常对照组明显增多，且高浓度组较低浓度组变化趋势明显（P〈0．05或P＜0．01）。结论 重度烟雾吸入致吸入性ALI的过程中伴有持续且过度的肺自然免疫反应，这种自然免疫反应部分由活化的中性粒细胞及巨噬细胞所介导；而肺特异性免疫反应受到明显的抑制。

特发性血小板减少性紫癜患儿T细胞免疫功能研究

为探讨T淋巴细胞亚群和Th1/Th2相关细胞因子在儿童特发性血小板减少性紫癜 (ITP)中变化及应用肾上腺皮质激素治疗对其的影响。用PMA、Ionomycin作刺激剂 ,刺激全血中淋巴细胞表达细胞因子 ,以Mon ensin阻断细胞因子分泌至胞外 ,应用两种免疫荧光抗体同时标记淋巴细胞的膜表面特异分子和表达被阻滞在细胞内的细胞因子 ,用流式细胞仪进行检测和分析。结果 :ITP患儿外周血CD4 +细胞降低 ,CD8 +细胞升高 ,CD4 +/CD8 +降低尤为显著。治疗前Th1细胞占(20.66±2.82) %,Th2细胞占 (4.55±2.33) % ,Th1/Th2比值为4.78±0.66,明显高于正常儿童的1.43±0.19(P<0.005),治疗后与正常儿童无差异。提示ITP患儿T淋巴细胞亚群表达及比例失调 ,IFN_γ产生增多 ,TL_4产生减少 ,Th1/Th2功能异常 ;ITP是一种Th1占优势的疾病 ;

痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值

目的 探讨痰液细胞DNA含量分析对肺癌的诊断价值。方法 用流式细胞仪对 44例患者 ( 2 9例肺癌、15例肺良性疾病患者 )痰液细胞DNA含量进行分析 ,并与痰细胞形态学检查结果作比较。对痰细胞学阴性而DNA含量分析阳性的对照患者组织切片行 p5 3、PCNA、Ki67免疫组化分析。 结果 以最后病理诊断为标准 ,肺癌患者异倍体检出的敏感性为 82 .8%,显著高于痰细胞学的敏感性 ( 2 7.6%) (P <0 .0 0 5 ) ;肺癌晚期异倍体阳性率高于早期肺癌 ( 87.5 %比 76.9%,P <0 .0 0 2 5 ) ,其中 1例肺癌患者提前临床 10月检出异倍体。部分炎性假瘤及结核球患者痰标本检出异倍体 ,其相应的组织切片PCNA、Ki67免疫组化染色亦阳性。结论 痰液细胞DNA含量分析是肺癌诊断有效的辅助方法 ,可能有利于肺癌的早期诊断。

腹水DNA含量测定对良、恶性腹水的鉴别诊断价值

目的 研究腹水DNA倍体对良、恶性腹水的鉴别诊断价值。方法 运用流式细胞术 (FCM )检测腹水的DNA指数 (DI) ,S期细胞百分比 (SPF) ,细胞增殖指数 (PI) ;采用化学发光分析法 ,检测腹水的CEA、CA19 9;腹水离心沉淀作细胞学检查。结果 恶性腹水组的DI、SPF、PI均高于良性腹水组 (P <0 0 5 ) ,FCM法诊断恶性腹水的敏感性和特异性分别为 91 7%和 92 3%。细胞学、CEA、CA19 9诊断恶性腹水的敏感性分别为 41 7%、41 7%、5 0 % ,特异性为10 0 %、76 9%、84 6 % ,FCM联合CEA或CA19 9检测 ,敏感性为 95 2 %及 95 8% ,特异性为 71%及 78 1%。结论 腹水DNA含量测定诊断恶性腹水是一有效而敏感的方法 ,但存在一定的局限性 ;FCM联合CEA或CA19 9检测可提高诊断恶性腹水的敏感性。

标本放置时间及年龄对CD4^+CD25^+调节性T细胞的影响

目的探讨标本放置时间及年龄对外周血CD4+CD25+调节性T细胞的影响,明确标本可放置的时间界限,建立不同年龄段的正常参考值范围。方法以171例不同年龄健康人的外周血为标本,采用双色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测和分析。结果10份标本均分别在室温下放置0、1、2、3、4、5和6h检测时,CD4+CD25+Treg及CD4+CD25highT细胞分别为(12.00±1.12)%、(11.56±1.19)%、(10.72±1.29)%、(10.29±1.57)%、(8.11±1.28)%、(7.97±1.07)%、(7.70±0.93)%及(1.41±0.26)%、(1.45±0.26)%、(1.32±0.26)%、(1.27±0.28)%、(1.09±0.24)%、(0.95±0.18)%、(0.91±0.21)%。4~6岁组(n=34)、7~14岁组(n=24)、20~59岁组(n=95)、60岁以上组(n=18)健康人群CD4+CD25+Treg参考值分别是(6.55±1.28)%、(9.41±2.08)%、(11.67±2.14)%和(9.73±2.79)%,CD4+CD25high分别是(0.92±0.30)%、(1.21±0.45)%、(1.44±0.52)%及(1.51±0.55)%。结论外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25highT细胞的检测结果随标本放置时间延长呈逐渐降低趋势,因此为真实反映体内CD4+CD25+Treg水平,标本放置时间应限制在3h以内。不同年龄段健康人群外周血中的CD4+CD25+Treg和CD4+CD25highT数值有明显差异,在探讨各种免疫相关性疾病与CD4+CD25+Treg之间的关系时,应该以与其年龄段相匹配的正常参考值为依据。

糖尿病合并白蛋白尿患者血小板聚集功能和膜蛋白表达的变化

目的 探讨２型糖尿病患者血小板功能改变与血管病变的关系。方法同时测定６９例２型糖尿病患者和１４例正常人（Ｋ组）血小板ＡＤＰ聚集率和血小板表面颗粒膜蛋白（ＣＤ６２Ｐ和ＣＤ６３）表达的变化，并根据２４小时尿白蛋白排泄量将糖尿病患者分为正常白蛋白尿组（Ａ组）、微量白蛋白尿组（Ｂ组）和大量白蛋白尿组（Ｃ组）。结果与Ｋ组比较，Ｂ组和Ｃ组血小板ＡＤＰ％显著升高，Ｐ值分别小于０．０５和小于０．０１；Ａ组、Ｂ组和Ｃ组血小板表面ＣＤ６２Ｐ和ＣＤ６３表达阳性率，均显著升高，以Ｃ组最高；血小板ＡＤＰ聚集率与ＣＤ６２Ｐ和ＣＤ６３表达的阳性率呈显著正相关。结论２型糖尿病患者血小板聚集功能和活化功能显著增强，尤其在伴有白蛋白尿的患者中，并参与血管病变的发生和发展。

bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断及残留病灶监测中的应用

目的探讨bcr／abl融合基因检测在诊断慢性粒细胞性白血病（CML）和监测CML残留病灶中的意义。方法采用巢式逆转录PCR（RT—PCR）检测337例CML患者bcr／abl融合基因的表达，并对所有患者进行残留病灶的动态监测，共检测632人次。其中移植（包括外周血干细胞移植、骨髓移植和脐血移植）患者26例；服用格列卫的患者22例；其它治疗方案患者289例。结果在337例CML初诊患者中bcr／abl基因表达阳性者325例，阳性率为96．4％；其中b3a2型转录本占58．5oA（190／325），b2a2型转录本占41．2％（134／325），b3a3型转录本占0．3％（1／325）。未发现b2a3型转录本。移植患者bcr／abl融合基因转阴率为88．5％（23／26），时间在30～201d之间，中位数为55d；服用格列卫患者融合基因总转阴率59．1％（13／22），转阴时间在用药后90～365d之间，中位数为210d；其它治疗组患者转阴12例，转阴率为4．1％（12／289）。结论bcr／abl融合基因的检测及动态观察，对CML的临床诊断、疗效及预后判断具有重要意义。

类风湿关节炎患者红细胞CD_(35)的表达及其意义

目的 研究红细胞Ⅰ型补体受体 (CD3 5)在类风湿关节炎 (rheumaoidarthritis,RA)患者血液中的表达水平及其影响因素 ,探讨红细胞CD3 5在RA发病过程中的意义。方法 采用流式细胞术 (FCM)测定 37例RA患者 (其中早期 12例、中晚期 2 5例 )和 12名健康对照者血液中红细胞CD3 5的表达水平 ,并同期测定RA患者的相关实验室指标 (IgG、IgA、IgM、C3、C4、RF、α 1 AGP、CRP、ESR、RBC等 ) ,分析各指标之间的关系。结果 37例RA患者红细胞CD3 5的表达水平为 (16 .6 7± 13.2 1) % ,健康对照组为 (2 9.94± 2 3.5 3) % ,两组比较差异有显著性意义 (P =0 .0 17)。早期与中晚期RA患者红细胞CD3 5表达水平分别为 (14 .38± 9.96 ) %、(17.76± 14 .5 7) % ,两组的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。相关分析显示 ,红细胞CD3 5的表达水平与RA患者的RBC计数、RF呈正相关 (r值分别为 0 .30 1、0 .5 5 5 ,P值分别为 0 .0 4 2、0 .0 0 1) ,而与年龄、病程、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RF、α 1 AGP、CRP、ESR的相关性无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论 类风湿关节炎患者内源性补体活性调节蛋白水平降低是其发病的重要环节之一 ,可作为反映RA病情的一个相对独立的观察指标 。