2013-2015年安徽省血液中心确证实验室室间质评结果分析

目的对2013-2015年安徽省血液中心确证实验室参加的室间质评反馈结果进行总结分析,进一步提高实验室检测水平。方法本室对室间质评活动发放的样品进行检测,完成后将检测数据进行上报,活动结束后根据项目组反馈的结果,及时发现实验室检测过程中出现的偶然误差和系统误差,积极查找原因,提出整改措施。结果本室2013-2015年参加的国家CDC PT室间质评项目反馈结果,除2014年抗-HIV(新创)定性结果符合性为90%,其余项目定性结果符合性均为100%。CITIC室间质评项目中进口试剂检测结果离群结果较少,稳定性较好;国产试剂检测反应性标本离群结果较多,且均高于均值水平,通过调试全自动酶免分析仪,严格按照要求加强样品检测前处理等改进措施,离群结果有所减少。结论通过参加室间质评活动,能够发现实验室在检测前,检测中,检测后等过程中存在的问题,积极整改,显著提高实验室检测水平。

核酸检测技术在安徽血液中心血液筛检中的应用分析

目的探讨核酸检测(NAT)技术用于血液筛查的意义。方法采用实时荧光定量PCR和转录介导扩增(TMA)两种方法分别对我站298份及6737份无偿献血者标本进行单人份病毒核酸检测(ID-NAT),并将两种核酸检测方法的结果与ELASA检测结果进行对比分析。结果两种方法均存在相当比例的ELASA(+)、NAT(-)结果,德国GFE核酸检测试剂HBV、HCV阳性检出率低于美国诺华的ID-TMA检测试剂。经TMA-NAT检测发现本地区2次ELASA血清学方法进行血液病毒筛查HBV的残余风险为万分之4.8。本次研究没有发现HCV和HIV的血清学漏检。诺华ID-NAT核酸检测试剂存在一定的假阳性。结论核酸检测对于降低输血传播传染病的风险起到了非常重要的作用;诺华TIGRIS核酸检测体系适用于献血者血液病毒的筛查。

安徽省采供血系统ELISA单试剂检测呈反应性献血者重新召回的检测结果分析

目的通过分析安徽省采供血系统暂时屏蔽的献血者重新召回检测结果,为制定合适的血清学检测呈反应性献血者重新召回策略提供理论依据。方法对2013年1月—2015年6月HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP血清学单试剂检测呈反应性的献血者,屏蔽6个月后,对其追踪采样进行相应反应性项目的检测：首先用原试剂再次进行ELISA双试剂检测,同时进行单人份核酸检测（NAT）若均为阴性送确证试验室再次进行ELISA双试剂（至少有一种试剂与原试剂不同）检测及补充血清学试验：乙型肝炎病毒核心抗体检测、HBsAg中和试验、HCV重组免疫印迹试验（RIBA）、HIV免疫印迹试验（WB）、TP梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）。结果确证实验室共检测召回样本201例,召回检测阴性119例,召回率59.2%。其中：检测HBsAg单试剂呈反应性标本65例,可重新召回献血者26例,召回率40.00%（26/65）;检测抗-HCV单试剂呈反应性标本40例,可重新召回献血者35例,召回率87.50%（35/40）;检测抗-HIV单试剂呈反应性标本46例,可重新召回献血者25例,召回率54.35%（25/46）;检测抗-TP单试剂呈反应性标本50例,可重新召回献血者33例,召回率66.00%（33/50）。结论血清学ELISA单试剂检测呈反应性献血者中有一部分是潜在合格的献血者,现行的呈反应性献血者重新召回策略具有防止合格献血者流失的积极意义,但召回检测结果仍然呈反应性献血者的进一步追踪值得探讨。

安徽省汉族人群HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1等位基因分布及单体型多态性研究

目的研究安徽省汉族人群HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1等位基因和单体型频率分布特征。方法 PCR-测序分型技术(SBT)对3 169例随机无血缘关系的干细胞捐献者进行HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1基因分型,利用计数法、最大期望算法和PyPop软件计算等位基因频率、单体型频率和连锁不平衡参数。结果人群共观察到411个HLA等位基因,其中HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1分别检出等位基因数量为67、143、65、75和64个。频率>0.1的等位基因有HLA-A*11∶01、A*11∶01、A*24∶02、A*02∶01、C*01∶02、C*07∶02、C*06∶02、DRB1*09∶01、DRB1*15∶01、DRB1*07∶01、DQB1* 03∶01、DQB1* 03∶03、DQB1*02∶01。发现1 426条HLA-A~HLA-B、1 772条HLA-B~HLA-DRB1和798条HLA-B~HLA-C、446条HLA-DRB1~HLA-DQB1单体型,单体型表现有连锁不平衡,其中19条表现为强连锁不平衡(RLD>0.80)。结论获得安徽省汉族人群HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1等位基因频率和单体型分布数据,其等位基因和单体型分布特征有其自身的特点。

核酸检测在合肥地区献血者血液筛查中的应用

目的分析核酸检测在合肥地区献血者血液筛查中的应用情况,对核酸检测的必要性进行评估。方法使用浩源混检(PCR方法)、诺华单检(TMA方法)两家核酸检测系统分别采用两种检测模式(ELISA和NAT同步进行、常规标本先ELISA后NAT),对194 982份献血者标本进行HBV、HCV、HIV检测。对两家核酸检测系统、两种检测模式下的检测结果进行统计分析,并与ELISA结果进行比较。结果 194 982份献血者标本中检测出ELISA阴性、NAT阳性309例,占0.16%,其中鉴别/拆分出139例,占0.07%;采用ELISA、NAT平行检测模式检测的127 261份标本中,检测到NAT反应性共462例,占0.36%;其中ELISA阴性、NAT阳性222例,占0.17%;采用常规标本先ELISA、后NAT,急诊标本ELISA、NAT平行检测模式检测的67 721份标本中,NAT反应性共165例,占0.24%;其中ELISA阴性、NAT阳性87例,占0.13%。结论 NAT能检测出血清学阴性但存在病毒核酸的血液,NAT和ELISA共同用于血液筛查能降低输血风险。

安徽省汉族人群Miltenberger血型调查分析

目的调查安徽省Miltenberger血型的分布情况,为建立红细胞库奠定基础。方法随机采集安徽省血液中心2 660例非血缘关系汉族无偿志愿献血者外周血样乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血标本,并提取DNA。采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)方法对Miltenberger血型系统进行检测,并通过血清学及测序方法验证。结果 2 660例献血者中有24例PCR-SSP阳性,经血清学及测序确认均为GP.Mur表型。结论在安徽省汉族人群中,GP.Mur表型的频率为0.9%。目前还未发现Miltenberger血型系统的其他表型。

2种核酸检测技术在血液筛检中的应用分析

目的采用实时荧光定量PCR和TMA两种方法分别对我站298份及6737份无偿献血者标本进行单人份病毒核酸检测(ID-NAT),以探讨NAT技术用于血液筛查的意义,并将两种核酸检测方法的结果与ELISA检测结果进行分析方法使用德国GFE单人份核酸检测试剂对我站298份经ELISA检测呈反应性(S/CO】1)的无偿献血者标本采用实时荧光定量PCR技术进行单人份核酸检测;同时对6737份无偿献血者标本进行2次ELISA法筛查的同时,应用美国诺华公司ULTRO试剂在TIGRIS系统上进行ID-NAT核酸检测,并对ULTRO检测呈阳性的标本分别进行HBV/HCV/HIV的鉴别,以确定是哪种病毒的感染。

安徽省采供血机构输血传染病检测筛查实验室能力验证质量分析

目的总结2011—2013年安徽省采供血机构输血传染病检测筛查实验室能力验证经验，进一步提高安徽省采供血系统血液筛查能力和质量管理水平。方法省内共有31家采供血机构报名参加活动，考评项目：乙肝表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）、梅毒螺旋体抗体（TP）血清学检测。每次分发考评样品前，组织召开培训会议。将参评实验室的定性检测结果与预期结果进行比较，并对使用相同试剂（n≥3）实验室的检测结果进行定量分析。对已开展的3次能力验证活动分别从使用试剂、仪器以及结果反馈方面进行分析和总结。结果参评实验室共使用10家公司的试剂，其中多为国产试剂，进口试剂使用较少。各地市中心血站全部使用全自动前加样及后处理设备或全自动一体机等检测仪器，单采浆站则使用的是洗板机和酶标仪。大部分实验室经过3次的能力验证活动实验室定性结果均与预期结果相一致；部分参评实验室虽然定性结果正确，但定量结果出现离群现象。结论安徽省采供血机构输血传染病检测筛查实验室能力验证项目运作比较成功。通过能力验证报告的回馈，各参评实验室可以针对存在问题，采取相应整改措施，促进血液检测水平的提高。

安徽省HBsAg单试剂反应性献血者归队情况分析

目的:分析对安徽省HBsAg单试剂反应性献血者的归队情况,验证安徽省献血者归队策略的合理性与有效性。方法:HBsAg单试剂反应性献血者自屏蔽期满6个月后,可依据自愿原则向屏蔽单位提出归队申请,由屏蔽单位采样后进行初筛检测。初筛阴性者可送检标本至安徽省血液中心进行归队检测,经过伯乐、万泰、丽珠试剂HBsAg检测、丽珠试剂中和试验、万泰试剂HBcAb检测、诺华试剂核酸检测合格后,允许归队。结果:2013年9月至2016年12月,共收到HBsAg归队标本109人份,归队检测合格者60人份,不合格者8人份,不确定者41人份,归队率达55.05%。归队合格献血者中,合肥地区献血者为25人,其中20人再次献血,检测结果均合格。结论:安徽省献血者HBsAg屏蔽与归队策略合理有效,但在献血者追溯、信息传达方面仍存在不完善之处,需进一步改进。

两种HIV ELISA试剂在无偿献血者血液筛查中的应用分析

对比两种ELISA试剂对HIV血清学标志物检测的结果,为实验室更好地选择试剂提供数据支撑。方法 采用2种ELISA试剂对合肥市无偿献血者的标本(2016-2020年)实施HIV血清学标志物检测,并结合核酸检测和确证结果对其检测结果进行分析。结果 在2016-2020年间,本市无偿献血标本为607 758份,ELISA双试剂反应性标本为127份,占比为0.021%(127/607 758);单核酸反应性标本共2份;北京万泰试剂检测反应性标本为279份,反应率约为0.05%(279/607 758);英国索灵试剂检测反应性标本为1718份,反应率约为0.28%(1718/607 758);ELISA反应性标本经WB确证阳性88份,占比61.42%(88/127);北京万泰反应性标本送检确认阳性率为31.54%(88/279),英国索灵反应性标本送检确认阳性率为5.12%(88/1718)。北京万泰确认符合率、不确定比率均较英国索灵高(P<0.05),差异具有统计学意义。结论 对灵敏度和特异性有较高要求的采供血机构实验室,建议选择ELISA第3代 HIV抗体检测试剂和第四代HIV抗原抗体联合检测试剂并结合HIV RNA同时对无偿献血者进行检测,尽量避免HIV的漏检,为血液安全及临床用血安全提供保障。

合肥地区献血者血液筛查非重复反应性标本与OBI标本间HBV血清学特征分析

目的 了解血液筛查非重复反应性标本与隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)标本间HBV血清学特征的相关性。方法 收集本科室2021年1月—2023年1月血液筛查ELISA结果均为阴性,仅NAT反应性的标本共144份,其中TMA法联检反应性标本92份,PCR法单人份检测HBV DNA反应性标本52份。联检反应性标本补充TMA法鉴别检测和PCR法单人份检测,2种方法检测均无反应性的标本纳入NRR标本组,任1种方法检出HBV DNA反应性的标本纳入OBI标本组。对2组标本完成HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc检测,分析NRR标本与OBI标本在血清学模式和阳性率上是否存在差异。结果 联检反应性标本补充检测均阴性标本53份,纳入NRR标本组。91份标本在任1种方法中检测出HBV DNA反应性,纳入OBI标本组。2组标本血清学检测均未检出HBsAg和HBeAg,抗-HBs检出率NRR标本组为64.15%,OBI标本组为47.25%;抗-HBc检出率NRR标本组为86.79%,OBI标本组为94.51%;抗-HBe检出率NRR标本组为35.85%,OBI标本组为52.75%。2组标本血清学模式:NRR标本组表现最多的模式为抗-HBs+、抗-HBc+(32.08%),OBI标本组表现最多的模式为抗-HBe+、抗-HBc+(37.36%)。结论 NRR标本与OBI标本在HBV血清学检测中的部分检测结果间存在差异,但NRR标本中较高的抗-HBc阳性率提示仍有较高的可能存在HBV感染风险。

HPA配型在免疫性血小板输注无效中的应用研究

目的探讨以HPA配型解决免疫性血小板输注无效的方案。方法 1)建立PCR-SSP方法检测HPA-1～5基因型检测方法,建立机采血小板供者库;2)采用微柱凝胶法和Capture-P法对32名血小板输血无效患者作血小板同种抗体筛查,并对2种方法比较;3)对血小板同种抗体筛查阳性患者采用已知HPA基因型的标准谱血小板作抗体鉴定并采取HPA基因型同型输注的原则寻找供者。结果 1)采用PCR-SSP方法成功检测出HPA-1～5基因型,并对1 000名血小板供者的HPA-1～5基因型定型;2)32例血小板输注无效病例中,微柱凝胶法检测血小板同种抗体阳性率为50%,Capture-P法血小板抗体阳性检出率为40%;3)32例血小板输血无效病例中2种方法同时血小板抗体阳性13例,其中2例鉴定为抗-HPA,分别为抗-HPA-5b(P=1/84)、抗-HPA-1a(P=1/55)。结论对抗-HPA引起的血小板输注无效患者采用HPA基因型相合的方法寻找供者是有效的。

2种核酸检测平台在与ELISA平行检测中的应用

目的探讨浩源混检、诺华单检2种核酸检测平台在血站血筛中的应用及与酶免结果的符合性。方法使用浩源混检、诺华单检2种核酸检测平台采取酶免、核酸平行检测的模式对22 616份献血者标本进行检测。对于酶免双试剂不合格、NAT阴性的标本再次进行核酸检测,同时对酶免阴性、HBV DNA阳性标本检测抗-HBs,抗-HBc,HBeAg和抗-HBe。对各项结果进行统计分析。结果 22 616份标本中检测到酶免阴性、NAT阳性30例,占0.13%;拆分/鉴别出23例,均为HBV DNA,其乙肝5项存在7种模式,以HBcAb阳性居多。检测到酶免不合格353例,占1.56%;其中单试剂不合格271例,NAT均合格;双试剂不合格82例,40份与NAT结果相符;对酶免双试剂不合格、NAT阴性标本进行NAT再检后,拆分出HBV DAN 9例。结论 NAT能检测出血清学阴性但存在病毒核酸的血液;NAT和ELISA共同用于血液筛查,能降低输血风险;2种核酸检测平台在实际应用中各有利弊,血站需要根据实际情况,寻求最适合的NAT平台和检测模式。

中国采供血机构抗-HIV/HIV核酸筛查阳性献血者确证策略研究

目的对HIV筛查阳性献血者进行确证,制定HIV筛查阳性献血者确证策略。方法本研究由输血研究所与12家中心血站合作,在2013年8月-2014年6月期间,收集抗-HIV/HIV核酸筛查阳性献血者标本,经ELISA和ID-NAT重新检测,以及追踪和确证检测(RIBA)后,鉴别献血者初筛时HIV检测结果的真、假阳性。结果从合作单位收集抗-HIV/HIV核酸筛查阳性标本396人份,经ELISA和ID-NAT重新检测及追踪和确证后,抗-HIV阳性39份,抗-HIV阴性216份,141份由于未成功追踪而被放弃。抗-HIV/HIV核酸筛查阳性献血者抗-HIV阳性率为9.8%。结论 ELISA和ID-NAT都为阳性时,可以直接判为抗-HIV阳性;单独ELISA阳性时,如果RIBA是阴性,8周后追踪;单独ID-NAT阳性时,8周后追踪。

ALT快速检测在献血者初筛中的应用

目的探讨干式生化测试法对单采血小板捐献者进行献血前ALT快速初筛的适用性;比较不同方法处理的血液标本对干式生化法快速检测结果的影响以及干式生化法与大生化速率法检测结果的一致性。方法采集单采血小板捐献者肘部静脉血,分别对其不抗凝、肝素钠抗凝和EDTA-K2抗凝标本用干式生化测试法进行ALT快速检测,并与EDTA-K2抗凝样本的大生化速率法检测结果比较。采用配对设计的t检验进行统计分析。结果用肝素抗凝的标本进行干式生化检测,其结果与速率法比较差异无统计学意义,一致性最好;2009年1～12月用干式生化测试法(肝素抗凝标本)共初筛5109份标本,其中ALT>40U/L的标本为163份,有155份与速率法检测结果吻合。结论对单采血小板献血者进行献血前ALT初筛能有效地减少血液浪费;单采血小板捐献者献血前最好用肝素钠抗凝血标本进行初筛。

献血者血液筛查HBsAg单试剂阳性结果分析

目的通过对献血者血液筛查HBsAg单试剂阳性标本核酸检测后电化学发光免疫分析法(ECLIA)补充乙肝五项,综合分析ELISA法HBsAg单试剂阳性献血者HBV DNA阳性/阴性标本ECLIA再次检测提高血液安全保障献血者权益的必要性。方法 2019年9月—2020年5月献血者血液标本91 847份,2种不同厂家ELISA HBsAg试剂检测,留取75份HBsAg单试剂阳性标本核酸检测后再用ECLIA补充血清学试验,定量检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc。结果 75份HBsAg单试剂阳性标本核酸检测HBV DNA+ 15份,核酸定性筛查阳性率20%(15/75)。ECLIA检出HBsAg定量值(0.05-1) IU/mL标本9份,与ELISA阳性符合率12%(9/75)。15份HBsAg单试剂阳性HBV DNA+标本抗-HBc阳性率高达93.3%(14/15),抗-HBs定量均<10 U/L;60份HBsAg单试剂阳性HBV DNA-标本中抗-HBc阳性率达45%(27/60),检测出7种血清学模式,仅抗-HBs阳性,占33.33%(20/60),抗-HBs定量>100 IU/L 11份。结论 ELISA法检测HBsAg单试剂阳性标本补充ECLIA乙肝五项提高血液安全同时保障献血者权益。

安徽合肥地区单采血小板捐献者血样的HPA基因分型

目的检测安徽合肥地区单采血小板捐献者血样的HPA基因分型,统计本地区血小板捐献者HPA基因型分布频率。方法①采用多重荧光PCR的方法对1181名18-55周岁的单采血小板捐献者血样进行HPA1-6,10,15,21的基因分型检测。②采用SBT直接测序的方法对22名18-55周岁的单采血小板捐献者血样进行HPA基因型分型检测。结果发现安徽地区人群中HPA-2,HPA-3,HPA-15最具有多态性,HPA各等位基因型频率分别为:1a∶0.9941,1b∶0.0059,2a∶0.9462,2b∶0.0538,3a∶0.5741,3b∶0.4259,4a∶0.9987,4b∶0.0013,5a∶0.9818,5b∶0.0182,6a∶0.9852,6b∶0.0148,10a∶1.0,10b∶0.0,15a∶0.5394、15b∶0.4606,21a∶0.9928、21b∶0.0072。结论使用多重荧光方法与SBT直接测序方法HPA基因分型检测结果一致性较好;安徽合肥地区人群的HPA基因分型的多态性与文献中报道的其他地区基本一致,但基因型分布频率有本地区的特点。

安徽地区献血人群HTLV感染调查

目的了解安徽地区无偿献血人群人类T淋巴细胞病毒感染状况,为本地区临床用血提供合适的安全筛查策略。方法对安徽省合肥、蚌埠、芜湖、安庆、马鞍山5地区部分献血人群采用ELISA试剂筛查HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体,筛查阳性标本采用蛋白印迹法(Westem blot,WB)确证和核酸检测,同时对献血者进行追踪、检测。结果 5地区共抽检献血者标本100 840份,ELISA法筛查出阳性标本57份,确证结果"不确定"2份,其余全部为阴性;确证阳性率为0%;追踪到献血者8人,结果7人仍为原ELISA试剂筛查阳性,确证结果均无阳性。结论安徽地区为HTLV低流行地区,可以暂不开展献血者HTLV全面筛查。

六西格玛管理在血站ALT检测中的应用

目的利用六西格玛管理对安徽省血液中心ALT检测进行性能评价,选择适合的质量控制规则,进而对实验室进行有效的管理。方法以该实验室2014年3月至2016年7月参加的国家卫生和计划生育委员会临床检验中心ALT项目的室间质评报告中的偏倚作为偏倚估计,以室内质控变异系数作为不精密度估计,采用国家标准作为允许总误差TEa进行计算得到西格玛度量值,并绘制西格玛方法决定图。结果对该实验室的ALT检测性能评价了8次,均大于六西格玛,表明该实验室ALT检测性能优越,仅需要使用13S(N=2,R=1)质控规则。结论利用六西格玛管理能客观的评价实验室ALT检测性能,帮助实验室选择适合的质控规则,还可以对ALT检测的性能进行持续监控。

Rh血型抗-D阳性个体中未见DEL型

目的分析Rh血型系统抗-D抗体阳性个体的RhCcEe表型及检测DEL等位基因,观察产生抗-D同种免疫反应个体中是否存在DEL型。方法对因输血或妊娠产生抗-D同种抗体的个体,采用间接抗人球蛋白试验(IAT)排除部分D型或弱D型,然后进行RhCcEe表型检测,同时采用PCR方法检测RHD1227A等位基因鉴别DEL型和真实Rh(D)阴性表型。同时检测99名IAT确认的、抗-D抗体阴性的Rh(D)阴性健康人作对照。结果 99名抗-D抗体阴性组共检出C抗原阳性(包括CC或Cc)个体44名(44.4%);DEL型24名(24.2%)。抗-D抗体阳性组经IAT确认共118名Rh(D)阴性,C抗原阳性22名(18.6%),未发现DEL型个体,均与抗体阴性组存在显著性差异(P<0.01)。结论抗-D抗体阳性组未见DEL型,提示DEL型个体或不会因输血或妊娠针对Rh(D)抗原发生抗-D同种免疫反应;由于DEL型多携带C抗原,因此造成抗-D阳性组C抗原频率显著降低。