改良角膜表面镜片术法建立兔曲霉菌性角膜炎动物模型

背景真菌性角膜感染动物模型是研究真菌性角膜炎发病机制的工具，目前的制作方法主要有划痕法、基质注射法和角膜表面镜片术法，但均有其不足之处。目的探讨一种简便、易操作的改良兔曲霉菌性角膜炎动物模型制作方法。方法成年新西兰白兔18只，采用烟曲霉菌孢子附贴滤纸片的改良角膜表面镜片术法制作真菌性角膜炎动物模型。将浸有10^8孢子／ml（10^8孢子／ml组，6只）或10^6孢子／ml（106孢子／ml组，6只）真菌混悬液的滤纸贴敷于去上皮的角膜基质并用角膜接触镜覆盖，将浸有生理盐水的滤纸贴敷于另6只兔眼角膜作为对照组。分别于造模后3、7、14d裂隙灯下观察眼前节症状，参照Dong的标准进行症状评分。制备角膜刮片并用质量分数10％KOH和荧光白染色在荧光显微镜下检测真菌菌丝，角膜组织切片分别行苏木精-伊红和过碘酸希夫染色，光学显微镜下观察角膜形态学改变和菌丝生长情况。对感染组织进行真菌培养以验证模型的质量。结果10^8孢子／ml组和10^6孢子／ml组真菌性角膜炎模型成功者分别为6眼和4眼，裂隙灯检查表明造模3d后10^8孢子／ml组眼前节症状明显重于10^6孢子／ml组，且随着时间的延长，炎性损伤逐渐转向增生期。造模后3d和7d，2组感染的兔眼症状评分明显高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01），10^8孢子／ml组兔眼的症状评分均明显高于10^6孢子／ml组，差异有统计学意义（P〈0．01），造模后14d，10^8孢子／ml组兔眼的症状评分明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。造模后3d和7d，2组兔眼角膜刮片中均可见真菌菌丝。角膜组织病理学检查显示，造模3d和7d后10^8孢子／ml组可见炎性细胞浸润和角膜基质细胞坏死，并可见真菌菌丝，造模后14d可见新生血管长入。10^6孢子／ml组炎症轻于10^8孢子／ml组。真菌培养结果表明，造模后3d和7d时10^8孢子／ml组均见菌丝生长，而10^6孢子／ml组仅在造模3d时可见菌丝生长。结论改良角膜表面镜片术法可成功制备兔曲霉菌性角膜炎动物模型，是一种简便、易于操作的真菌性角膜炎动物模型制作方法。