山东省生物医药产业的创新发展路径

生物医药产业是山东省重点发展的产业之一。随着我国创新驱动发展战略的实施,我省生物医药产业发展科研创新驱动力不足、科研成果转化率较低、持续科技创新人才与资金短缺等问题日益显现,严重制约产业的持续快速发展。本文从医药科技成果创造、转化、产品供应等方面推荐山东省生物医药产业的创新发展路径,供相关部门决策参考。

酯化透明质酸医药学研究进展

透明质酸(hyaluronic acid,HA)具有良好的黏弹性和生物相容性,是优良的药物载体,主要用于关节疾病、眼科手术,预防术后粘连,药物传递系统、医疗器械等。由于HA在人体内的吸收和代谢较快,为延长其在体内作用时间,研究人员利用HA分子中多个可修饰位点对其改性,提高其体内稳定性,并进一步引进新的生物活性,得到更广泛用途。目前主要改性方式有交联、酯化、接枝、分子修饰等。本文根据HA酯化产物的用途分类,综述了HA酯化性能改进及应用等方面的研究进展,并展望了其在医药领域的应用前景。

山东道地扶正类中药化学成分和药理作用研究进展

山东道地药材繁多,其中扶正类中药有大枣、灵芝、白芍、玉竹、北沙参、黄精等。近年,国内外研究者在上述药材中发现了多种有活性的化学成分,包括萜类、甾体类、黄酮类、苯丙素类及多糖类等,具有调节免疫、抗炎、抗肿瘤、保护脏器等多种药理活性。本文侧重道地性,从化学成分和药理作用方面对上述6种扶正类中药进行总结概述,为其进一步的研究和开发利用提供参考。

事业单位财务管理的科学化与精细化趋势分析

伴随社会经济的不断发展,各单位发展步伐逐步加快,事业单位为适应市场需求,在单位内部逐步进行深化改革。财务管理作为事业单位管理的重要组成部分,使财务管理科学化、精细化是事业单位平稳运行的基础保障。本文对事业单位财务管理的科学化与精细化进行概述,并简述目前事业单位财务管理现状,重点分析事业单位财务管理的科学化与精细化趋势。

奥拉帕尼诱导乳腺癌MCF-7细胞衰老作用及其机制

目的 研究奥拉帕尼(olaparib)诱导乳腺癌MCF-7细胞衰老作用的表现及其相关分子水平作用机制。方法 利用实时细胞分析(real-time cell analysis, RTCA)技术实时动态检测抗增殖和抗迁移活性;应用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase, SA-β-gal)染色法观察诱导细胞衰老活性;通过qPCR分析奥拉帕尼对衰老相关基因p16、p21、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)、白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-8、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1)、磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)、p27、视网膜母细胞瘤基因(retinoblastoma gene, RB1)、Ki67和E2F1表达的影响;根据Western Blot分析奥拉帕尼对衰老相关蛋白p21、γH2AX、胰岛素样生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP3)、cyclin D1、pRB和Ki67表达的影响。结果 奥拉帕尼能够抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移并诱导MCF-7细胞的衰老;奥拉帕尼作用96 h的MCF-7细胞中p16、p21、p27、CHOP、IL-6、IL-8、PAI-1、PTEN和RB1的基因表达水平显著上调(P<0.01),Ki67和E2F1的基因表达水平显著下调(P<0.01);MCF-7细胞中p21、γH2AX和IGFBP3蛋白的表达水平显著升高(P<0.01,P<0.01,P<0.05),cyclin D1、pRB和Ki67蛋白的表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。结论 奥拉帕尼能够通过抗增殖、迁移和诱导细胞衰老产生抗乳腺癌MCF-7细胞作用。

2种诱导溃疡性结肠炎动物模型方法的比较

为比较小鼠经直肠给予或自由饮用葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液后诱发溃疡性结肠炎的成模情况,本试验选取30只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常对照组(WT组)、3%DSS自由饮用组(3%DSS组)和6 g/(kg·bw)DSS直肠给药组[6 g/(kg·bw)DSS组],每组10只,连续造模7 d。每天称重计算体重增长率,并进行小鼠疾病活动指数(DAI)评分。造模第8天解剖小鼠,分离结肠,测量结肠长度,H.E.染色观察组织病理学变化并进行组织病理学评分,免疫组织化学观察结肠上皮组织黏蛋白-2(MUC2)的表达并计算组织化学评分(H-score),分离脾脏并称重,计算脾脏指数。结果显示,与WT组比较,DSS造模组小鼠的体重和结肠上皮组织MUC2的H-score极显著下降(P<0.01);DAI评分、病理学评分和脾脏指数极显著升高(P<0.01),结肠长度极显著缩短(P<0.01);与3%DSS组比较,6 g/(kg·bw)DSS组小鼠的体重和结肠上皮组织MUC2的H-score显著下降(P<0.05),DAI评分和脾脏指数显著升高(P<0.05),病理学评分极显著升高(P<0.01),结肠长度显著缩短(P<0.05)。结果表明,小鼠自由饮用3%DSS和直肠给予6 g/(kg·bw)的DSS溶液均可建立溃疡性结肠炎模型,其中6 g/(kg·bw)DSS造模症状较重、均一性较好且DSS用量较少。

德氏乳杆菌KY20胞外多糖对C57BL/6小鼠肥胖的预防作用

为探究德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)KY20及其胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对高脂饮食小鼠肥胖的预防作用,首先对KY20的生长速率、耐酸、耐胆盐活性进行测定,并对其EPS进行提取纯化;采用高脂饮食构建肥胖小鼠模型,设立正常组、模型组、KY20组及其EPS低、中、高剂量组,连续灌胃12周并定期记录小鼠体质量,测定葡萄糖耐量、胰岛素耐量、脏器指数,苏木精伊红染色观察肝脏和脂肪组织变化,试剂盒检测胰岛素、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high⁃density lipoprotein⁃cholesterol,HDL⁃C)、低密度脂蛋白胆固醇(low⁃density lipoprotein⁃cholesterol,LDL⁃C)含量,气相色谱法检测小鼠盲肠内容物中短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)的含量。结果显示,德氏乳杆菌KY20具有较强的耐酸、耐胆盐能力,并对青霉素、庆大霉素等有敏感性;KY20及其胞外多糖能够降低肥胖小鼠的体质量,改善血脂代谢紊乱,有效抑制高脂饮食诱导的肥胖。

不同产地黄蜀葵花药材中黄酮含量与气候变化的相关性研究

目的探讨不同产地黄蜀葵花药材中总黄酮及7种黄酮类成分的含量与气候变化的相关性。方法采用紫外-可见分光光度法测定不同产地黄蜀葵花药材中总黄酮的含量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定7种黄酮类成分的含量,对各成分含量进行分析,并结合气候变化因素进行相关性分析。结果不同产地黄蜀葵花黄酮类成分含量存在差异,但不同产地的降水量是影响黄蜀葵花黄酮类成分含量的主要因素,降水量高有助于黄酮类成分的形成和积累。结论本研究为不同产地黄蜀葵花的资源开发和质量评价提供了实验依据,对保证黄蜀葵花品质和促进黄蜀葵花产业发展具有指导意义。

以突触囊泡蛋白2A(SV2A)为靶点的抗癫痫药物研究进展

抗癫痫药物是癫痫患者的首选治疗癫痫手段。全球癫痫发病率的不断提高,给国家、个人和家庭生活等带来较大经济负担。随着越来越多的癫痫患者得到规范化治疗,使得抗癫痫药物临床需求越来越大。突触囊泡蛋白2A(synaptic vesicle protein 2A,SV2A)通过调节神经递质的释放,来维持脑内兴奋性神经递质和抑制性神经递质的平衡。随着SV2A确证为新的抗癫痫靶点,左乙拉西坦和布瓦西坦的上市,抗癫痫靶点和抗癫痫新药进一步丰富。本文围绕抗癫痫药物靶点SV2A以及以SV2A为靶点的上市及在研药物做概述,并对其构效关系进行总结。

牛病毒性腹泻病毒NS5B蛋白的截短表达及多克隆抗体制备

本研究旨在克隆牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的非结构蛋白NS5B截短基因,采用原核表达系统表达获得截短蛋白,并进一步制备其多克隆抗体。构建的原核表达质粒pET-28a-NS5B转化至BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,发现NS5B蛋白以包涵体为主。纯化蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体具有良好的反应性,能够特异性识别真核表达的NS5B蛋白。本研究中NS5B蛋白的截短表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究NS5B蛋白的生物学功能,以及建立BVDV鉴别诊断的血清学检测方法奠定了基础。

紫外分光光度法测定可降解聚酯中聚乙烯醇残留量

利用聚乙烯醇在硼酸介质下与碘生成蓝绿色络合物的性质,采用分光光度法对可降解聚酯中聚乙烯醇残留量进行测定,建立了可降解聚酯中聚乙烯醇残留量的检测方法。采用超声对可降解聚酯样品进行处理20 min,检测波长为650 nm,显色剂溶液中碘化钾与碘的质量比为5,聚乙烯醇的质量浓度在0.02024~0.1214 mg/mL范围内与650 nm波长处的吸光度线性关系良好,线性回归方程为y=4.2876x-0.0092,相关系数为0.9993,检出限为0.8μg/mL。显色后溶液在8 h保持稳定,样品加标回收率为93.82%~101.09%,平行测定结果的相对标准偏差为2.95%(n=6)。该方法仪器简单,易于操作,测定结果准确。

光叶兔耳风石油醚部位化学成分和抗菌活性研究

为了解兔耳风(Ainsliaea glabra)的化学成分,采用硅胶、凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱、半制备高效液相色谱等方法,从其90%乙醇提取物的石油醚萃取部位分离了10个化合物,根据波谱数据分别鉴定为松柏烯醇二异戊酸酯(1)、3β-hydroxy-11α,13-dihydro-costunolide(2)、matricarin(3)、乙酰伪蒲公英甾醇(4)、白桦脂醇(5)、27-hydroxyolean-12-en-28-oic acid(6)、morolic acid acetate(7)、异黑麦草内酯(8)、苯甲酸丁酯(9)和E-phytenal(10),其中化合物1为新结构化合物,化合物3和7首次在兔耳风属中分离得到,化合物2~7、9均为首次在光叶兔耳风报道。抗菌活性测试结果表明,化合物1、2、8对金黄色葡萄球菌有一定抑制作用,MIC值分别为31.2、25.0、21.8μg/m L,化合物1和3对白色念珠菌有潜在抑制作用,MIC值分别为1.9和3.9μg/m L。

基于液相色谱分离技术的核酸类药物生物分析方法研究进展

核酸类药物的生物分析方法主要有基于配体结合分析、基于聚合酶链反应和基于液相色谱分离技术3大类,前两者灵敏度虽高,但选择性较差,很难区分寡核苷酸本身及其较短的代谢产物。基于液相色谱分离技术生物分析方法的灵敏度虽略有逊色,但由于其具有高选择性,能够区分寡核苷酸本身及其代谢产物,故在核酸类药物的临床前和临床研究中展现出了广阔的应用前景。本文综述了该类方法中的高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法、高效液相色谱-荧光(HPLC-FL)法、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法、液相色谱-高分辨质谱法、微流液相色谱-串联质谱(microflow LC-MS/MS)法、杂交液相色谱-串联质谱法的特点及其在核酸类药物分析中的应用情况,发现除HPLC-UV法的检测灵敏度较低以外,其余方法均具有较高的灵敏度,但尚存在一些不足,如HPLC-FL法需要设计合适的探针、LC-MS/MS法需要标准物质、microflow LC-MS/MS法成本较高等。另外,一些相关策略及技术(如非特异性吸附解决策略、样品前处理技术等)的发展,在提高方法灵敏度的同时,也进一步加速了基于液相色谱分离技术的核酸类药物生物分析方法的发展。

免疫分析仪精密移液控制技术设计

目的为实现免疫分析仪精密自动检测,精密自动移液技术至关重要。本课题主要研究免疫分析仪精密移液控制技术,作为免疫分析仪重要部件,其控制精度与自动化程度直接决定最终检测结果的准确性及检测效率,是系统的关键组成部分。方法本系统通过PID闭环负反馈自动控制技术来实现免疫分析仪精密移液控制,通过单片机伺服电机驱动控制技术、高精度传感器检测及低通滤波技术等方法设计免疫分析仪精密移液控制技术。结果本文系统性的给出了免疫分析仪精密移液控制系统软硬件及控制算法设计,设计并解决免疫分析仪精确移液控制技术设计问题,提高加样系统电机控制精度及加样精度,使得加样精度达到加样量10μL时±5%或200μL时±3%。结论本系统可以很好的解决当前免疫分析仪精密移液控制设计技术问题,从而提高免疫分析仪控制精度、移液加样精度及检测效率。

聚乙醇酸退火工艺研究

聚乙醇酸(PGA)热加工过程中,因冷却速率过快而存在内应力,需要进行退火处理,本文研究了退火温度对PGA性能的影响。采用差示扫描量热仪(DSC)和热台偏光显微镜(POM)研究了PGA的冷结晶性及结晶结构,采用X射线衍射仪(XRD)、DSC和万能材料试验机研究了不同退火温度对PGA的结晶性、热性能及力学性能的影响。实验结果表明,PGA在熔融冷却过程中先形成针状晶核,并逐渐成长为球晶,且随着降温速率的增加,冷结晶温度降低,结晶时长变短。随退火温度的升高,PGA的松弛峰值温度升高,松弛焓增大,应变减小,弹性模量增大,结晶度和应力先增大后减小。

可吸收阻流膜的制备及性能研究

本研究通过静电纺丝的方法制备了左旋聚乳酸(polylactic acid, PLLA)阻流膜。利用扫描电镜观察不同溶剂体系PLLA阻流膜的表面形貌;通过研究不同溶剂体系PLLA阻流膜的力学性能,并测试不同溶剂体系PLLA阻流膜的孔径大小及分布、孔隙率和静态接触角以探索可吸收阻流膜的性能。结果发现,不同溶剂体系PLLA膜的孔径均小于20μm,孔隙率均大于80%,静态接触角均大于100°;CF/AN溶剂体系PLLA膜的纤维丝表面具有多孔结构,拉伸强度和撕裂力最小;CF/DMF溶剂体系PLLA膜的纤维丝表面光滑,条干均匀,拉伸强度和撕裂力最大。CF/DMF 80/20溶剂体系PLLA膜的表面形貌和力学性能最优。该阻流膜性能有望应用于心脏封堵器阻流膜部件的研究。

顶空气相色谱法同时测定泰地罗新中哌啶和吡啶含量

建立顶空气相色谱法同时测定泰地罗新中哌啶和吡啶的含量。采用Rtx-35 Amine柱(35%联苯-65%二甲基聚硅氧烷为固定液,30 m×0.32 mm,1μm)和氢火焰离子化检测器,程序升温,进样口温度220℃,检测器温度250℃,载气为高纯氮气,流速1.5 mL/min,顶空平衡温度90℃,平衡时间30 min。哌啶和吡啶分离度大于2.0,空白溶剂无干扰。吡啶和哌啶在各自浓度范围内线性关系良好(r≥0.9998),检测限分别为0.13、0.12μg/mL,定量限分别为0.41、0.40μg/mL,杂质平均回收率分别为101.7%和102.2%。方法专属性强,灵敏度高,准确度好,满足泰地罗新中哌啶和吡啶含量测定的要求。

黄蜀葵花药材总多糖含量测定方法研究

目的:建立黄蜀葵花药材中总多糖的含量测定方法,为其质量控制提供依据。方法:以葡萄糖为对照,用苯酚-硫酸法对样品显色,采用紫外-可见分光光度法在485 nm波长处测定总多糖的含量,并对方法学进行研究。结果:总多糖在2.270~13.620μg/mL范围内呈良好线性关系;其回归方程为Y=0.0612186X-0.0178058(r=0.999),加样回收率为99.15%,RSD为0.66%(n=9)。结论:采用苯酚-硫酸法测定黄蜀葵花药材中总多糖的含量,方法稳定,精密度高,重复性好,适用于黄蜀葵花药材的多糖含量测定。

高效液相色谱-质谱联用法测定Beagle犬血浆中黄体酮的浓度

目的 建立灵敏的高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),测定Beagle犬血浆中的黄体酮浓度。方法 选用Thermo Accucore C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,流速为0.4 ml/min,进样量10μl。样品采用乙腈进行蛋白沉淀,通过电喷雾电离源,以多重反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对为m/z 315.1→109.2(黄体酮)和m/z 271.4→171.9(内标,甲苯磺丁脲)。结果 黄体酮的线性范围为0.5~100 ng/ml,定量下限(LLOQ)可达0.5 ng/ml,提取回收率(n=6)分别为95.97%,105.20%,108.09%,日内、日间精密度试验RSD均小于15%。结论 该方法操作简单,灵敏度高,准确,重现性好,适用于Beagle犬血浆样品中黄体酮的测定和药动学研究。

药物遗传毒性评价研究关注点

遗传毒性研究是药物非临床安全性评价的重要内容,与致癌性、生殖毒性研究密切相关。遗传毒性试验目的是检测受试物的致突变性,预测受试物的致癌性,对受试物的遗传毒性潜在性进行全面评价是药物进入临床试验及上市的重要环节。遗传毒性标准试验组合包含体内和体外试验,测试终点多样,本文从人员资质、实验室管理、给药制剂、实验系统、试验实施关键阶段等方面阐述遗传毒性评价研究的关注点,为遗传毒性研究实施提供借鉴。研究机构应严格遵循药物非临床研究质量管理规范(good laboratory practice for nonclinical laboratory studies, GLP)实施评价工作,不断提高遗传毒性试验质量。