UHPLC-MS/MS测定人血浆中的阿普斯特浓度及生物等效性研究

目的采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法,建立快速、简单、灵敏的测定人血浆中阿普斯特浓度的方法并用于阿普斯特人体生物等效性试验研究。方法采用蛋白沉淀法处理,以阿普斯特-d5作为内标,色谱柱为Phenomenex Kinetex C_(18)柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,流速0.45 mL·min^(-1)梯度洗脱,采用电喷雾(ESI)离子源以正离子方式进行MRM检测,用时3 min。结果阿普斯特在2~600 ng·mL^(-1)(r^(2)=0.9977)范围内线性关系良好,准确度和精密度均小于15%。空腹和餐后条件下阿普斯特片受试制剂AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)和C_(max)的90%CI为参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。结论受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

超高效液相色谱-串联质谱法测定叔胺类药品中硫酸二甲酯基因毒性杂质

硫酸二甲酯被广泛用于药品的有机合成中,具有很强的毒性及腐蚀性,因此应严格控制其在药品中的残留量。现有传统检测方法在样品制备过程中不允许使用水,且存在专属性低、灵敏度差等缺陷,严重制约了检测方法的通用性和准确度。研究采用超高效液相色谱-串联质谱技术(UHPLC-MS/MS),建立了氨基比林等叔胺类药品中残留的硫酸二甲酯的测定方法。检测方法以氨基比林作为衍生剂,40℃条件下氨基比林和硫酸二甲酯在水溶液中能够快速反应生成甲基化氨基比林,通过检测甲基化氨基比林间接计算硫酸二甲酯的残留含量。采用Waters Atlantis HILIC C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,3.0μm),以10 mmol/L乙酸铵水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液(50∶50,v/v)为流动相进行等度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温40℃,进样量1μL;在电喷雾电离、正离子(ESI+)多反应监测(MRM)模式下测定硫酸二甲酯的含量。硫酸二甲酯在0.9935~7.9480 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.9997,方法的检出限为0.50 ng/mL,定量限为1.15 ng/mL,加标回收率为94.9%~106.4%。建立的检测方法用于氨基比林、咖啡因、替加氟等9批样品中,均未检出硫酸二甲酯,说明各药品生产企业注重了该基因毒杂质残留量的控制。该方法专属性强,灵敏度高,操作简单,定量准确,适用于氨基比林等药品中硫酸二甲酯基因毒杂质的测定。

国家药品抽检中硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂有关物质研究

目的:对国家药品抽检品种硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂的有关物质进行探索性研究,比较各企业样品之间含有杂质的情况,以评价药品质量。方法:采用HPLC外标法同时测定硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂中有关物质A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、N及其他未知杂质含量。采用Thermo Syncronis C_(8)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以庚烷磺酸钠溶液-乙腈为流动相,进行线性梯度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);柱温40℃;检测波长220 nm;进样体积20μL。结合强制降解试验探讨杂质来源,并采用毒性预测软件进行杂质毒性评估。结果:经方法验证,方法专属性良好,各杂质峰之间分离度均>1.5;精密度试验的RSD为0.30%~1.7%(n=6);线性范围在0.050~5.000μg·mL^(-1)(r=0.9999);定量限在0.025~0.200μg·mL^(-1),检测限在0.008~0.070μg·mL^(-1);原料药重复性的RSD为0.80%~3.8%,平均回收率95.2%~104.8%;吸入气雾剂重复性的RSD为1.2%~2.9%,回收率98.7%~102.8%。强制降解试验表明,杂质D、F、I、J、N均为降解杂质。对抽检的110批次样品进行检测,有关物质结果均符合规定。各企业样品中,杂质C、D、F、N检出频次较高,杂质E、G、H均未检出,杂质J仅检出1批次。其中杂质D的QSAR软件预测ICH M7(R2)分类为2级。结论:建立的方法灵敏准确,可准确地对硫酸沙丁胺醇气雾剂的有关物质含量进行定量测定,能为科学监管提供有效的技术支持。应对杂质D进行进一步的毒性研究,并确定合理的限度。

乳钙咀嚼片细菌回复突变试验研究

目的 对乳钙咀嚼片进行细菌回复突变试验,评价其是否有潜在的致突变性,并探索乳钙咀嚼片中组氨酸含量对自发回复突变菌落数的影响。方法 采用鼠伤寒沙门菌突变型TA97a、TA98、TA100、TA102进行试验,用肝匀浆作为体外代谢活化系统(+/–s9),同时设空白对照组、溶剂对照组和阳性对照组。乳钙咀嚼片设50,10,2,0.4,0.08 mg/ml 5个剂量,按平板掺入法进行试验。另设1000,500,250,125,62.5,31.25μg/ml 6个剂量的组氨酸对照组。结果 游离组氨酸在一定剂量范围内时,4种菌株自发回变菌落数随组氨酸剂量升高而增加,组氨酸剂量继续增高,回复突变菌落数降低。乳钙咀嚼片各剂量组在加与不加S9条件下各菌株回变菌落数均未超过溶剂对照组菌落数的2倍,未观察到剂量反应关系,Ames试验结果阴性。结论 在本试验剂量范围内,乳钙咀嚼片Ames试验结果为阴性,提示该受试物无致突变性,同时排除了组氨酸成分对乳钙咀嚼片Ames试验结果的影响。

舒更葡糖钠异常毒性及降压物质检查方法学研究

目的建立舒更葡糖钠异常毒性及降压物质的检查方法。方法取SPF级小鼠40只,随机分为5组,各8只,每组小鼠均予舒更葡糖钠尾静脉注射,给药剂量分别为4600,4370,4152,3944,3747 mg/kg,给药后72 h内观察小鼠死亡情况;计算半数致死量(LD50)及其95%置信区间(CI),以其95%CI下限的1/4剂量进行异常毒性检查。取实验猫1只,股静脉注射40,20,10 mg/kg舒更葡糖钠,以0.1µg/kg组胺作对照;记录给药前后实验猫的颈动脉血压,计算下降值,确定药品降压物质检查限值并验证。结果舒更葡糖钠的LD50为4182.8 mg/kg,95%CI为3988.1~4409.4 mg/kg;1000 mg/kg剂量下,3组小鼠(各5只)48 h内均未死亡。降压物质检查限值为10 mg/kg,实验猫在此剂量下血压下降值均未超过组胺所致血压下降值的50%;3批样品检查结果均符合规定。结论该方法可用于舒更葡糖钠异常毒性及降压物质的检查。

HPLC-ELSD法与薄层色谱扫描法用于测定二硬脂酰磷脂酰胆碱有关物质的对比研究

目的:建立二硬脂酰磷脂酰胆碱有关物质的检测方法。方法:对比考察HPLC-ELSD液相色谱法与薄层色谱扫描法。薄层色谱扫描法,采用硅胶G60薄层板,以三氯甲烷-甲醇-水-浓氨溶液(65∶25∶4∶0.4)为展开剂,检测波长为450 nm。液相色谱法采用C8柱,以甲醇和水为流动相,梯度洗脱,蒸发光散射检测器,以浓度的对数值为横坐标,以峰面积的对数值为纵坐标,进行线性回归计算,并对建立的方法进行了方法学验证。结果:薄层色谱扫描法虽也可定量,但仅检出少量已知杂质,不能有效检出未知杂质。液相色谱法所需样品量少、杂质检出量高、操作简便,优于薄层色谱扫描法。结论:建立方法采用液相色谱法克服了原有薄层色谱法不能准确定量的弊端,检测灵敏度高,定值准确,可作为二硬脂酰磷脂酰胆碱质量控制方法。

固本明目颗粒对D-半乳糖性白内障模型大鼠抗氧化作用的研究

目的研究固本明目颗粒1和固本明目颗粒2预防给药对D-半乳糖性白内障的抗氧化作用及固本明目颗粒工艺改变前后作用的差别。方法取20日龄SD大鼠90只,雄性,试验随机分为9组,分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、固本明目颗粒1和2均设1.25、2.5、5 g·kg^(-1)3个剂量组,每组10只。采用D-半乳糖建立大鼠的糖性白内障模型,各剂量组灌胃给予相应剂量的药物溶液10 mL·kg^(-1),每天1次,连续21 d,观察各组大鼠晶状体浑浊程度,末次给药后检测各组大鼠晶状体内SOD、GSH、GST、GSH-Px、Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性情况,以及各组大鼠晶状体组织病理学改变。结果与模型对照组比较,固本明目颗粒1低剂量组GSH、中剂量组SOD、高剂量组GST明显升高(P<0.05);固本明目颗粒2中、高剂量组GSH、中剂量组SOD明显升高(P<0.05或P<0.01)。阳性对照组、固本明目颗粒1各剂量组和固本明目颗粒2各剂量组晶状体混浊程度均有明显缓解效果。结论固本明目颗粒1和固本明目颗粒2在1.25、2.5、5 g·kg^(-1)剂量下对D-半乳糖性白内障有一定的抗氧化作用,固本明目颗粒制备工艺改变前后抗氧化作用未见明显变化。

布洛芬颗粒在中国健康受试者体内的人体生物等效性研究

目的研究布洛芬颗粒剂在中国健康受试者体内的生物等效性,为一致性评价提供依据。方法采用单中心、随机、开放、单剂量、两周期、两序列、交叉试验设计,将纳入的空腹、餐后各24名健康志愿者分别随机分为2组,分别口服受试制剂和参比制剂0.2 g,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)技术,建立了快速、简单、灵敏的测定人血浆中布洛芬浓度的分析方法,用于布洛芬颗粒人体生物等效性试验研究。采用Phoenix WinNonlin 8.2软件计算其药动学参数,评价其生物等效性。结果空腹给药后布洛芬受试制剂和参比制剂的主要药动学参数为:C_(max)分别为(21.8±4.21)μg/ml和(23.3±4.74)μg/ml;T_(max)分别为1.00 h和0.25 h;AUC_(0-t)分别为(71.83±16.08)μg/ml和(69.02±16.34)μg/ml;AUC_(0-∞)分别为(72.89±16.27)μg/ml和(70.04±16.53)μg/ml。餐后给药后布洛芬受试制剂和参比制剂的主要药动学参数为:C_(max)分别为(10.7±2.25)μg/ml和(10.6±2.57)μg/ml;T_(max)分别为4.00 h和4.00 h;AUC_(0-t)分别为(65.27±13.79)μg/ml和(65.76±16.37)μg/ml;AUC_(0-∞)分别为(66.45±14.13)μg/ml和(67.12±16.93)μg/ml。结论空腹和餐后受试制剂AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)和C_(max)的90%置信区间均在参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。方差分析及双单侧t检验结果显示,受试制剂布洛芬颗粒剂与参比布洛芬颗粒剂具有生物等效性。

注射用阿莫西林钠克拉维酸钾包材密封完整性的研究和考察

目的考察注射用阿莫西林钠克拉维酸钾包材密封完整性,为检测产品包材密封完整性提供新的思路。方法采用真空衰减法,选用质量较好的产品作为对照品,对4家制药企业生产的共5批注射用阿莫西林钠克拉维酸钾进行包材密封完整性检测,并采用单变量显著性分析法和Mann-Whitney U检验分析法进行数据分析;为了验证结果的可靠性,对厂家A和厂家C产品进行加速试验,并采用《中国药典》2020年版(四部)通则0901第一法进行溶液颜色检查。结果厂家A、C生产的产品的压差均值均高于对照组厂家B、D的产品,且结果离散程度较大,与对照组相比存在统计学差异;厂家A和厂家C产品进行加速试验,溶液颜色显著加深,进一步说明2家企业产品的密封性较差。结论厂家A、C生产的产品的包材密封完整性明显差于对照组,且溶液颜色显著加深,说明两家企业产品的密封性存在问题;选用质量较好的产品作为对照品,采用真空衰减法进行包装密封完整性检测方法可行、结果可靠。

玻璃酸钠特性黏数与相对分子质量测定研究

目的:从特性黏数、相对分子质量、相对分子质量分布三个方面开展对比研究,确立合适的检测方法纳入起草标准。对比考察玻璃酸钠特性黏数与相对分子质量测定方法,并确定最优的方法对玻璃酸钠进行质控。方法:对比考察EP 10.0/BP 2020和JPⅩⅦ特性黏数测定方法。采用乌氏黏度计测定供试品溶液流出时间,经线性回归计算特性黏数;经公式转换计算平均相对分子质量。采用多角激光光散射仪(检测波长:690 nm)与示差折光检测器结合,照分子排阻色谱法,以Shodex RC804凝胶柱为色谱柱;以0.2 mol·L^(-1)氯化钠溶液为流动相,用Astra 6软件计算相对分子质量分布。照分子排阻色谱法,示差折光检测器,以0.2 mol·L^(-1)氯化钠溶液为流动相,以Shodex SB-806HQ凝胶柱为色谱柱,以6个已知相对分子质量范围25万~316万的聚苯乙烯磺酸钠盐对照品作标准曲线,计算供试品相对分子质量。结果:特性黏数测定受温度影响显著,EP 10.0/BP 2020特性黏数测定结果高于JPⅩⅦ测定结果。EP 10.0/BP 2020特性黏数计算出的平均相对分子质量与对照品法测得相对分子质量结果均偏高,由JPⅩⅦ测得特性黏数计算出的平均相对分子质量与多角激光散射-示差折光法测得结果基本一致。结论:经对比考察,采用JPⅩⅦ特性黏数测定方法,可同时获得特性黏数和平均相对分子质量,无需再单独设定相对分子质量检测项目,满足玻璃酸钠的质控要求。

微晶纤维素对巴洛沙星渗透性影响的研究

目的采用平行人工膜渗透性分析法(PAMPA)研究微晶纤维素的用量、来源、型号对巴洛沙星渗透性的影响,为巴洛沙星片处方中微晶纤维素的筛选及不同来源微晶纤维素的替代提供参考。方法采用μFLUXTM型药物渗透性测定系统,前30 min以胃模拟液(pH 1.6)为介质,而后介质转换成肠模拟液(pH 6.5),测定巴洛沙星在不同来源、型号、用量的微晶纤维素中的渗透性。通过对渗透性差异的比较,考察微晶纤维素对巴洛沙星渗透性的影响。结果随微晶纤维素(PH101型和PH102型)用量增加,巴洛沙星渗透性降低;不同型号的微晶纤维素对巴洛沙星渗透性的影响略有差异;同型号的进口微晶纤维素与国产品对巴洛沙星渗透性的影响没有显著性差异。结论微晶纤维素的用量和型号影响巴洛沙星的渗透性。在巴洛沙星片中,渗透性可作为重要指针,为选择不同来源的微晶纤维素进行相互替代。

豚鼠被动皮肤过敏试验条件研究

目的探讨豚鼠被动皮肤过敏(PCA)试验的最佳条件(致敏阳性物质、时间)。方法采用卵白蛋白(ova,0.4%)和牛血清白蛋白(BSA,1%)为PCA抗原,分别于不同激发时间(4 h和24 h)对不同生产厂家(潍坊圣诺实验动物养殖有限公司、青岛康大生物科技有限公司、济南金丰实验动物有限公司,简称圣诺、康大、金丰)的豚鼠进行PCA试验,记录蓝斑直径。结果在ova被动致敏4 h后,3个生产厂家的豚鼠产生的蓝斑分界清晰且直径均大于5.0 mm(阳性);在ova被动致敏24 h后,3个生产厂家的豚鼠产生的蓝斑已混在一起、分界不清,无法测量。在BSA被动致敏4 h后,圣诺和康大生产的豚鼠产生的蓝斑分界清晰且直径均大于5.0 mm,金丰生产的豚鼠仅含抗体血清(1∶2、1∶4,V/V)的蓝斑直径大于5.0 mm;在BSA被动致敏24 h后,金丰生产的豚鼠的蓝斑分界清晰且直径大于5.0 mm,圣诺和康大生产的豚鼠产生的蓝斑已混在一起、分界不清,无法测量。结论豚鼠PCA中首选0.4%ova溶液作为试验抗原时致敏时间宜为4 h。

基于实地调研的建立山东生物医药产业综合服务平台的思考

立足山东省生物医药产业发展现状,通过实地调研提出建设生物医药综合服务平台的趋势和需求。通过分析现有服务机构的共性问题和探查产、学、研环节的创新发展需求和瓶颈,对组建模式、体系建设、人才引进培育和发展等方面提出构想,为创新服务生态圈建设提供思路。

注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的质量评价

目的 评价国产注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的质量现状,并提出改进建议。方法 法定标准检验结合探索性研究,对产品的杂质谱、克拉维酸聚合物及其他荧光杂质、复溶行为、成盐率、包材密封性等进行比较研究。结果 212批次样品法定标准检验均符合规定;采用建立的杂质分析方法,对主要杂质的结构与来源进行确证;证明水分和温度易促进主成分的降解;此外,应严格控制原料成盐过程中的工艺参数,控制成盐剂的残留量;并关注包材密封完整性对产品全生命周期的影响。结论 注射用阿莫西林钠克拉维酸钾总体质量较好,现行质量标准有待提高。

pH响应性可降解聚(醚酯-氨酯)的制备及在药物缓释领域的应用

设计和制备了一类具有高pH响应性的可降解聚氨酯材料,旨在作为一种智能给药载体。首先通过“硫醇-烯”点击反应合成了一种吡啶基二醇(PyDH);然后,以PyDH、聚醚酯二醇和二异氰酸酯为原料,通过缩聚反应制备了侧链含吡啶基团的聚(醚酯-氨酯)(PEEU-Py),并经溶剂挥发得到相应的薄膜材料。通过核磁共振、红外光谱、凝胶渗透色谱等对PyDH和PEEU-Py的化学结构进行了表征,并对PEEU-Py膜的力学、溶胀、降解、药物缓释等性能进行了研究。PEEU-Py膜展示出高的pH溶胀性,其在pH=1.5介质中的平衡吸水率分别为pH=7.0和pH=11.5的2倍和8倍以上;体外药物缓释研究表明,膜材料的药物释放速率随pH值的降低而提高,其药物释放能力与材料的溶胀性能相一致。此外,细胞毒性评价表明该材料具有良好的细胞相容性。研究结果表明,PEEU-Py作为一种受外界pH变化触发的智能开关在药物载体上有好的应用前景。

LC-MS/MS法测定替诺福韦前体药物中遗传毒性杂质

目的采用高效液相色谱-三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)法测定替诺福韦前体药物中遗传毒性杂质9-丙烯基腺嘌呤含量,并分析最小二乘法不同线性拟合方法对结果准确度的影响。方法采用Waters XBridge C_(18)(4.6 mm×150 mm,3.5μm)色谱柱;以甲醇-水(55∶45)为流动相,流速:1.0 mL·min^(-1),等度洗脱8 min(2.0~2.6 min进质谱)。进样体积2μL,柱温40℃。采用正离子电喷雾(ESI^(+))模式电离,多反应离子监测(MRM)模式,选择m/z 176.0→136.0作为检测离子。结果经分析方法验证,该方法专属性良好;系统精密度试验RSD为1.1%(n=6);使用最小二乘法进行线性回归,线性范围0.051~25.250μg·mL^(-1);加权线性回归在低浓度区域准确性明显高于未加权线性回归。定量限0.051 ng·mL^(-1),检出限0.017 ng·mL^(-1);原料药样品溶液平均回收率99.08%~99.97%(n=9),重复性RSD为0.4%~1.3%;片剂样品溶液平均回收率98.94%~101.96%(n=9),重复性RSD为0.2%~0.3%;耐用性良好。结论建立的方法操作简单、灵敏度高、分析速度快、基质不影响检测,结果准确可靠,能够满足痕量遗传毒性杂质的检测要求。

探讨药物GLP机构中IACUC的职能和伦理审查流程

在药物非临床研究(GLP)的认证体系和实验动物的许可管理中,实验动物福利伦理委员会(IACUC)作为单位内部的监督机构,在实验动物的使用与管理、动物福利的落实、人员职业健康与安全等方面肩负着重要使命,并发挥重要的作用。本文结合山东省食品药品检验研究院药物安全评价中心IACUC在机构中的运行情况,探讨其职能和审查流程,为实验动物机构IACUC开展相关工作提供参考。

药品食品特征组分检测及监管关键技术体系构建与应用

食药安全涉及人民群众切身利益,是重大的民生和公共安全问题,事关社会和谐稳定。国家高度重视,强调要用“四个最严”确保食品药品安全。然而,食药监管在法规、标准等方面仍存在部分缺陷、漏洞,甚至盲区,尤其体现在中药复杂成分的特征标记物以及食药产品中的未知成分鉴定技术的滞后性,严重影响了食药安全保障与监管工作的有效开展。因此,对食药安全保障、监管的新型高效技术的研发与应用提出了重大需求。

乳酸菌素颗粒体外生物活性的比较研究

目的:对乳酸菌素颗粒仿制药与市售药品的体外生物活性进行比较研究,包括对致病菌的抑制作用和对益生菌的促生长作用,探索肠道菌群调控类药物的体外生物活性的一致性评价方法。方法:建立2种培养体系,分别考察乳酸菌素颗粒对致病菌的抑制作用和对益生菌的促生长作用,采用配伍设计的两因素方差分析,Dunnett-t检验,结合微生物的生长曲线,对4种产品的体外生物活性进行比较研究,评价其活性差异。结果:仿制药与3种市售产品对金黄色葡萄球菌的体外抑制作用和对鼠李糖乳杆菌的体外促生长作用没有显著性差异(P>0.05)。结论:初步建立了微生物代谢产物类肠道菌群调控药物的体外生物活性评价方法,为相关制剂的开发与质量评价提供依据。

基于LC-MS/MS技术的水蛭配方颗粒中7种碱基和核苷成分分析方法的建立

本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪Nexera X2和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用测定水蛭配方颗粒中7种碱基和核苷成分的分析方法.水蛭配方颗粒以10%甲醇50℃超声提取30 min,MRM正负模式同时检测.以Discovery■HS F5-3色谱柱进行分离,流动相为0.15%甲酸水溶液和甲醇,10 min内完成梯度洗脱.本方法采用外标法定量,7种化合物在相应的浓度范围内线性关系良好,判定系数(R^(2))均大于0.996,定量限在0.42—3.94μg·g^(-1)之间. 10 ng·mL^(-1)的混合标准品溶液连续进样6次,待测化合物峰面积RSD均小于6%,精密度良好.平行6份加标回收试验,7种化合物平均回收率在87.09%—105.81%之间,RSD%在1.35%—4.70%之间.残留实验结果为阴性.该方法准确可靠,可为水蛭配方颗粒的质量控制提供参考依据.