阿尔茨海默病中免疫检查位点LAG3的研究

目的:探讨免疫检查位点基因LAG3在阿尔茨海默病(AD)中的作用和意义。方法:对GEO(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)数据库中AD患者脑组织测序数据集GSE48350和血液测序数据集GSE140829进行分析,采用CIBERSORT计算脑组织中的免疫细胞评分,并观察LAG3的表达量变化;使用人源Aβ1-42淀粉样蛋白诱导小鼠海马神经元细胞系HT22作为AD细胞模型,RT-PCR检测LAG3的表达量变化。通过GSEA分析研究与LAG3直接相关的通路,String网站构建PPI网络,发现与LAG3相互作用的基因,最后通过KEGG和GO分析这些基因的生物学功能。结果:AD患者脑组织中免疫细胞与健康人存在较大差异,AD患者脑组织和血液中LAG3水平均高于健康人,AD细胞模型中LAG3的表达量也增高。结论:AD脑组织中免疫细胞构成与健康人存在差异,AD脑组织中未激活的记忆CD4^(+)T细胞和单核细胞的比例较高,激活的NK细胞偏低,且免疫检查位点LAG3的表达量增高,其可能与CD4细胞有关,也与免疫细胞的活化和调节存在联系。

Y染色体短串联重复序列微流控芯片复合扩增检测体系研究

目的构建Y染色体短串联重复序列(Y-STR)微流控芯片扩增检测试剂,并进行性能验证,实现Y-STR基因座的快速全集成检测。方法使用Y-STR微流控芯片检测体系,对其灵敏度、成功率和分型准确率、峰平衡性、精准性和准确性、检材适应性、混合物检测能力和抗抑制性进行验证评估。结果DNA标准品9948的模板量≥8 ng,血卡片数≥3片以及口腔拭子刮擦次数≥7次时可获得Y-STR完整分型;165份样本的全集成检测成功率为91.52%,分型准确率为99.74%;不同荧光通道之间的峰高比值为89.81%;10次运行的等位基因分型标准品的片段大小标准差均在0.5 bp以内,20份样本全集成检测的等位基因片段和相应的等位基因标准品之间的片段准确性均在0.5 bp以内;能够对口腔拭子、血卡、唾液卡、烟蒂、血棉签、布片精斑等检材进行准确分型;混合样本中较小贡献者与较大贡献者在1∶3的比例时可获得完整基因分型;在不同浓度的腐殖酸(50~400 mg/L)、靛蓝(20~100 nmol/L)、血红蛋白(100~500μmol/L)等抑制物的干扰下,该体系可获得完整基因分型。结论该体系可应用于国产Quick TargSeq法医DNA现场快速检测系统使用,可在法医学实践中选用。

基于Donabedian模型构建静脉血栓栓塞症专科护理质量评价指标的研究进展

对静脉血栓栓塞症预防护理质量评价指标的国内外研究进展进行综述,依靠三维质量结构模型为理论基础,根据其构建方法、应用现状进行归纳阐述,并以此为基础提出国内现有的指标存在的挑战与限制,为形成系统完善的护理质量评价指标提供参考。

左上腔静脉、双下腔静脉与右心房变异一例

笔者在对一高坠后男性遗体进行死因鉴定时,对组织脏器进行法医病理取材检验过程中发现死者存在左上腔静脉、双下腔静脉和右心房的解剖学变异,经系统查阅资料,未见有相似的报道,为丰富国人解剖学大数据以及为临床相关手术操作提供参考资料,现报道如下。

基于网络协同的混合式教学模式探索——以“机械制造技术基础”课程为例

为充分利用现有精品课程教学资源,同时满足移动互联网教学需要,针对以往教学中出现的问题,提出一种基于网络协同的混合式教学模式。将移动网络平台与计算机网络平台、翻转课堂与传统课堂相结合,对该教学模式进行了教学流程、教学资源和课程考核设计。结合"机械制造技术基础"课程,建立了课程微信公众平台,完善了精品课程网络资源,进行了网络协同的混合式教学模式探索。实践表明,该教学模式能够调动学生学习积极性,改善教学效果。

“双一流”背景下临床医学创新人才培养模式探索

随着“双一流”建设工作的进一步推进,作为地方医学院校应亟需思考和解决现有医学人才培养体制中尚存的壁垒以及如何全力打造“双一流”医学教育工程等问题,同时也是医学人才创新培养机制改革的关键。文章立足地方医学院校办学定位和五年制临床医学专业人才培养情况,围绕修订人才培养方案,以临床医学创新人才培养为导向,深化第一课堂改革,以学生综合能力为导向,丰富第二课堂拓展教学等方面对创新人才培养模式进行了一定探索。在“双一流”建设背景下培养出更多临床医学创新人才是新时代高等医学院校的重要任务和使命。

后疫情时代高校医学生教学方式选择意愿性分析

以山东第一医科大学2000余名医学生为研究对象,通过问卷星APP平台问卷调查学生对线上教学、线上—线下混合式教学以及传统课堂教学方式的选择意愿,并分析其影响因素,为探寻后疫情时代医学教育改革的方向和策略提供依据。

新时代医学生思想道德教育状况考察及改进路径

不同社会时期和社会环境下有不同的道德诉求和道德评价。新时代医学生思想道德素质的提升是公民道德建设的重要内容,是为建设中国特色社会主义筑牢共同思想基础。考察分析新时代背景下医学生思想道德教育状况,分析存在于教学内容、课程安排、师资队伍和考核评价方面的问题,继而在教育理念、实践活动设计、课程安排和科学评价方面提出对应的解决之道。

疫情背景下高校医学专业在线教学状况的问卷调查与应对策略

新冠肺炎疫情防控期间高校医学专业在线教学面临巨大挑战。利用问卷星APP平台对山东第一医科大学2700余名医学生进行问卷调查与分析,从学习资源和方式、教学效果和面临的困难等方面了解在线教学现状,并提出疫情期间及后疫情时代在线教学的应对策略。

紫草素对慢性肾病基础上急性肾损伤大鼠模型的干预作用

研究紫草素对慢性肾病基础上急性肾损伤(A/C)大鼠模型的治疗作用。方法 选取30只雄性SD大鼠随机均分为实验对照组、A/C模型组、紫草素治疗组(Shikonin 组)。模型组和Shikonin 组采用腺嘌呤灌胃联合双侧肾脏缺血再灌注(I/R)手术的方法建立A/C大鼠模型,Shikonin 组于I/R手术前给予紫草素(7mg/kg)腹腔注射治疗,手术后紫草素相同剂量继续治疗三天。治疗结束后称量各组大鼠体重,收集肾脏,用酶联免疫法测定肾脏组织SOD和MDA水平。HE染色镜下观察各组大鼠肾组织病理改变。结果 Shikonin 组MDA水平明显降低,SOD水平显著升高。HE染色显示,Shikonin 组肾组织损伤程度轻于模型组。结论 紫草素可有效减轻模型大鼠A/C。

基于网络药理学和分子对接探讨黄连温胆汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的作用机制

运用网络药理学和分子对接方法探索黄连温胆汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的分子机制。应用中药系统药理学数据库与分析平台对黄连温胆汤药物活性成分及药物作用靶点基因进行筛选。通过Genecards数据库、DisGENET数据库查找幽门螺杆菌相关性胃炎疾病相关靶点,利用维恩在线绘图工具获得疾病与药物的共同靶点基因。利用Cytoscape 3.8.2软件以及STRING数据库分别构建药物-化合物-靶点相互作用网络及蛋白质-蛋白质相互作用网络图。运用DAVID数据库进行基因本体功能和京都基因与基因组百科全书通路富集分析。选取度值排名前3的靶点蛋白和活性成分使用AutoDockTools 1.5.6软件进行分子对接。共筛选得到槲皮素、川皮苷、柚皮素等127种黄连温胆汤药物活性成分,并获得Akt1、JUN、TNF-α、STAT3等101个潜在靶点蛋白,涉及P53信号通路、NOD样受体信号通路、TNF信号通路等90条信号通路。分子对接结果显示关键靶点STAT3、TP53、Akt1与活性成分槲皮素、川皮苷、柚皮素的亲和力较好,其中以Akt1与柚皮素的结合能力最强。通过分析黄连温胆汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的作用靶点和相关信号通路,能够为临床应用和后续实验研究提供理论基础。

一种基于网络协同的混合式教学模式设计

在分析网络教学特点的基础上,提出一种基于网络协同的混合式教学模式。该教学模式将网络精品课程与手机教学平台结合,其系统结构分为表示层、网络层、系统应用层和数据服务层。从课前、课堂和课后三个教学阶段对教学流程进行了详细设计,并结合平台特点进行了教学内容设计。通过教学实践验证了该教学模式的可行性。

MTHFR C677T基因多态性、叶酸及同型半胱氨酸水平与原发性肝细胞癌相关性分析

目的:探讨泰安地区同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸水平及其代谢酶MTHFR C677T基因多态性与原发性肝细胞癌患者的相关性。方法:选取2019年10月-2020年10月于泰安市中心医院就诊的85例新发原发性肝细胞癌(HCC)患者为HCC组,并随机抽取健康查体中心85例健康人群为健康对照组,检测两组空腹血清叶酸及Hcy水平,采用TaqManSNP基因分型检测两组MTHFR C677T基因型及等位基因分布,同时采用SPSS20.0软件进行统计学分析。结果:HCC组叶酸低于健康对照组,Hcy水平高于健康对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01);HCC组MTHFR C677T基因多态性分布显示TT型基因型分布率最高,与CC型、CT型比较差异具有统计学意义(P<0.05),而健康对照组三种基因型之间差异无统计学意义(P>0.05);TT型Hcy水平明显高于CT及CC型,差异具有统计学意义(P<0.05),而TT、CT、CC三种基因型间叶酸水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HCC患者中TT基因型在MTHFR C677T基因多态性分布中显示较高的基因频率,是影响Hcy水平的重要危险因素,同样说明TT基因型与HCC发病密切相关,是重要的临床诊断参考指标。

腹腔镜下盆底抬高及直肠悬吊治疗出口梗阻型便秘的临床效果

目的研究出口梗阻型便秘患者采用腹腔镜下盆底抬高及直肠悬吊治疗的效果。方法随机抽取2013年1月至2019年12月入院接受诊治的出口梗阻型便秘患者56例,所有患者均使用腹腔镜下盆底抬高及直肠悬吊方法治疗,对比患者治疗前后粪便造影征象以及患者治疗前后的症状评分和排粪造影结果。结果治疗后骶直分离、直肠黏膜内套、直肠折曲、直肠前突患者数量明显少于治疗前,差异存在统计学意义(P<0.05),治疗前后盆底疝、会阴下降患者数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后患者便秘得分、伴随症状得分均低于治疗前,差异存在统计学意义(P<0.05);治疗后患者的乙耻距、肛上距、骶直间距指标值在下降,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论腹腔镜下盆底抬高和直肠悬吊治疗出口梗阻型便秘疾病效果显著,可改善患者的症状,降低疾病对患者的影响。

小窝在G蛋白偶联雌激素受体调控小鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合酶活性中的作用

目的探讨小窝(caveolae)对雌激素通过G蛋白偶联雌激素受体(GPER)调控小鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。方法当细胞融合度达到80%~90%时,选取内皮细胞分为对照1组、DMSO组、雌二醇1组、雌二醇2组、雌二醇3组(n=5),其中雌二醇1组、雌二醇2组、雌二醇3组按浓度梯度加入雌二醇(10、50、100 nmol/L),对照1组不予任何处理,DMSO组加入50μl DMSO培养。另选取内皮细胞分为对照2组(未作任何处理)、阴性对照1组[加入小窝蛋白1(Cav-1)阴性对照干扰RNA]、Cav-1敲减组(加入Cav-1干扰RNA);选取部分内皮细胞设对照3组(未作任何处理)、阴性对照2组(加入GPER阴性对照干扰RNA)、GPER敲减组(加入GPER干扰RNA)。检测Cav-1、GPER、eNOS、磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达。结果与对照1组比较,雌二醇3组p-eNOS蛋白表达明显增加(0.47±0.07 vs 0.20±0.04,P<0.05)。对照2组、阴性对照1组、Cav-1敲减组GPER、eNOS、Cav-1蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与对照2组比较,Cav-1敲减组GPER、eNOS、Cav-1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。对照3组、阴性对照2组、GPER敲减组eNOS、p-eNOS表达比较,无统计学差异(P>0.05)。与对照3组比较,GPER敲减组GPER蛋白表达明显降低(0.56±0.22 vs 2.40±0.65,P<0.05)。结论小窝参与了雌激素通过GPER调控小鼠主动脉eNOS活性的过程。

自制丹参灵芝三七降脂茶的研究

目的:对丹参灵芝三七降脂茶进行配方、功能、安全等科学研究。方法:对配方进行分析,通过动物实验来评价本品的功效和安全性。结果:本品组方经典、科学、合理,动物实验证明本品具有较好的降脂功效;安全性实验表明本产品安全无毒。结论:本品配方科学合理,降血脂功效明显。

黄柏酮对肺癌细胞核糖体合成、增殖的影响及机制

目的探讨黄柏酮对非小细胞肺癌细胞(A549细胞)增殖的影响及潜在的作用机制。方法常规培养A549细胞,将对数生长期A549细胞随机分为对照组、黄柏酮组,分别加入DMSO溶剂、50μmol/L黄柏酮继续培养。用尿嘧啶核苷类似物(EU)标记法检测细胞核糖体RNA(rRNA)合成,用胸腺嘧啶核苷类似物(EdU)标记法检测细胞增殖能力,用实时荧光定量PCR检测细胞中rRNA(5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA、45S pre-rRNA)表达,用West‑ern blotting法检测细胞中磷酸化的雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化的S6核糖体蛋白235/236[p-RPS6(235/236)]、p-RPS6(240/244)蛋白表达。结果黄柏酮组荧光信号强度与对照组荧光信号强度的比值为0.684±0.008(P<0.05)。与对照组比较,黄柏桐组EdU阳性细胞率低,5.8S rRNA、18S rRNA、28S rRNA、前体45S rRNA相对表达量低,p-mTOR、p-RPS6(235/236)、p-RPS6(240/244)蛋白相对表达量低(P均<0.05)。结论黄柏酮可抑制肺癌细胞核糖体合成及增殖,其作用机制可能与抑制mTOR/RPS6信号通路激活有关。

基于微流控芯片的InDel快速族群推断体系研究

目的QuickTargSeq全集成法医DNA现场快速检测系统是国内首台自主研制的现场快检仪,可应用于InDel族群推断检测,2 h左右完成“样本进-结果出”的快速自动化InDel分型。本文对InDel族群推断微流控芯片检测体系的性能进行评估,以期为实践应用提供参考。方法使用InDel族群推断微流控芯片检测体系,对体系的灵敏度、干扰物耐受性、成功率、分型准确率、精确性、准确性、峰平衡性及检材适应性进行验证评估,同时对测试样本的族群来源进行推断。结果138份样本的全集成检测成功率为95.65%,分型准确率为98.85%;DNA模板量≥5 ng时,可获得完整InDel分型,口腔拭子样本最佳采集次数为口腔内壁左右两侧各刮擦8次,血卡样本最佳检测方式为6片(Φ=2 mm);所有基因座的平均杂合子峰高比值为0.86;10次运行的等位基因分型标准物(allelic ladder)片段大小标准差均在0.3 bp以内,测试样本等位基因和相应的等位基因分型标准物之间的片段准确性均在0.5 bp以内。结论该体系可实现对口腔拭子、血卡、唾液卡及烟蒂样本的准确分型,能够准确推断样本的族群来源。

miR-664b-3p调控Caspase-1介导细胞焦亡在深静脉血栓形成中的作用

目的观察深静脉血栓形成(DVT)患者外周血微小RNA-664b-3p(miR-664b-3p)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)水平变化,分析二者在细胞焦亡中的调控关系。方法选择健康志愿者(健康对照组)和DVT患者(DVT组)各30例,空腹抽取外周静脉血,分离血清及单个核细胞(PBMC)。Western blotting法检测PBMC中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Cleaved Caspase-1)、焦孔素D(GSDMD)活性片段(GSDMD-N)蛋白,qPCR法检测PBMC中的miR-664b-3p,ELISA法检测血清中的细胞焦亡相关炎症因子白细胞介素(IL)1β和IL-18蛋白。采用Target Scan 7.2生物信息学软件,预测miR-664b-3p与Caspase-1 mRNA的3′非翻译区(3′UTR)是否存在互补结合位点;分别构建包含结合位点的野生型及突变型Caspase-1 mRNA 3′UTR质粒,双荧光素酶报告基因系统检测miR-664b-3p对其荧光素酶报告基因活性的影响。结果DVT组PBMC中Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达及血清IL-1β、IL-18蛋白水平均高于健康对照组,miR-664b-3p表达低于健康对照组(P均<0.05);生物信息学分析显示,miR-664b-3p与Caspase-1 mRNA的3′UTR存在互补结合位点;转染miR-664b-3p mimics可以降低野生型Caspase-1 mRNA 3′UTR荧光素酶报告基因活性(P<0.05),但对突变型Caspase-1 mRNA 3′UTR报告基因活性无显著影响(P>0.05)。结论DVT患者PBMC中miR-664b-3p表达降低,可解除对靶基因Caspase-1的表达抑制,Caspase-1活性增强使GS⁃DMD-N表达升高,进而导致细胞焦亡及相关炎症因子(IL-1β、IL-18)表达升高,最终导致DVT。

miR-370-3p和FOXM1 mRNA对人成骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响观察及其靶向关系验证

目的观察骨肉瘤组织中miR-370-3p、FOXM1 mRNA的表达,观察miR-370-3p和FOXM1 mRNA对人成骨肉瘤细胞系MG63增殖、迁移及侵袭的影响,并验证其靶向关系机制。方法①观察骨肉瘤及癌旁组织miR-370-3p及及其下游靶基因叉头框蛋白M1(FOXM1)mRNA表达:37例骨肉瘤患者,均行肿瘤切除术,术中保存骨肉瘤及癌旁组织,采用实时定量PCR法检测骨肉瘤及癌旁组织miR-370-3p、FOXM1 mRNA,分析骨肉瘤组织FOXM1 mRNA表达与miR-370-3p表达的相关性。采用Kaplan-Meier曲线、Log-Rank检验分析miR-370-3p表达与骨肉瘤患者临床病理参数及预后关系。②观察miR-370-3p过表达及FOXM1抑制表达的人成骨肉瘤细胞系MG63增殖、迁移及侵袭的影响:取MG63细胞分为1~4组,分别转染miR-370-3p mimic(促进miR-370-3p表达)、mimic NC(空载体质粒)、空白对照组及FOXM1 siRNA干扰质粒(FOXM1基因敲除质粒)。分别于转染0、24、48、72、96 h采用CCK-8法观察各组细胞增殖情况,采用划痕实验观察各组细胞迁移情况,采用Transwell小室观察各组细胞侵袭能力。③预测MG63细miR-370-3p与FOXM1靶向关系构建pmirGLO-FOXM1-野生型/突变型质粒,将MG63细胞分为A、B、C、D组,分别用1μL pmirGLO-FOXM1-WT+200 nmol miR-370-3p mimic、1μL pmirGLO-FOXM1-WT+mimic NC、1μL pmirGLO-FOXM1-MUT+200 nmol miR-370-3p mimic、1μL pmirGLO-FOXM1-MUT+200 nmol mimic NC转染。转染24 h时采用双荧光素酶报告检测系统观察各组细胞荧光活性。结果①与癌旁组织比较,骨肉瘤组织miR-370-3p相对表达量低、FOXM1 mRNA相对表达量高(t=4.66,3.41;P均<0.05)。随miR-370-3p表达量升高,骨肉瘤组织FOXM1 mRNA表达量呈下降趋势(R2=0.6481,P=0.1284)。miR-370-3p表达与骨肉瘤患者临床分期、远端转移情况有关(χ2=4.430、6.027;P均<0.05)。miR-370-3p低表达的骨肉瘤患者预后比miR-370-3p高表达患者差(P<0.05)。②2、3组相比,转染48、72、96 h时1、4组细胞OD450值均降低(P均<0.05)。与2、3组相比,转染24 h时1、4组划痕愈合率低、穿膜细胞数少(P均<0.05)。③与B组比较,A组细胞荧光活性降低(P<0.05);与D组比较,C组细胞中荧光活性变化不明显(P>0.05)。结论骨肉瘤组织中miR-370-3p表达降低、FOXM1 mRNA表达升高。促进miR-370-3p表达及FOXM1抑制表达的MG63细胞增殖、侵袭及迁移能力均降低。骨肉瘤细胞中miR-370-3p可能通过靶向调控FOXM1表达来抑制MG63的增殖、迁移及侵袭。