SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系。方法:①1μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路。②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1μg/mL)组、SR9009(10μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路。②吲哚丙酸浓度>80μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组。SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组。③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达较脂多糖组显著上调。④结果说明,Rev-erbα可以作为调节炎症反应的靶点,SR9009靶向激活Rev-erbα联合吲哚丙酸能抑制核因子κB信号通路显著减轻C2C12成肌细胞的炎症反应,联合抗炎效果优于单独干预。

髓系抑制性细胞在小鼠肝癌免疫逃逸中的作用

目的:研究荷瘤小鼠脾脏中髓系抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)比例的变化及在组织中的分布,探讨其在肝癌免疫逃逸中的作用。方法:采用肝癌细胞原位移植法建立小鼠原位肝癌模型,流式细胞仪检测正常小鼠和荷瘤小鼠7、14、21天脾脏中MDSCs的比例,免疫组织化学染色对其进行定位分析。结果:荷瘤小鼠脾脏中MDSCs的比例比正常小鼠显著增高(P<0.05),而且随着荷瘤时间的延长,MDSCs的比例逐渐增加。正常小鼠脾脏中少量的MDSCs散在分布于红髓区,荷瘤后大量MDSCs主要聚积在边缘区及白髓区的动脉周围淋巴鞘。结论:小鼠脾脏中MDSCs的比例与肿瘤进展相关,且主要分布在脾脏胸腺依赖区。

小剂量顺铂通过下调Th17细胞频率缓解小鼠自身免疫性肝炎

目的探索小剂量顺铂对小鼠自身免疫性肝炎(AIH)Th17细胞的影响及相关机制。方法将24只小鼠随机分为正常组(normal group)、AIH+顺铂组(AIH+Cisplatin group)和AIH+生理盐水组(AIH+NS group)。后2组利用S100/FCA建立小鼠AIH模型后,分别腹腔注射0.2 ml含1 mg/kg的顺铂和生理盐水,每周1次连续3周。检测小鼠血清转氨酶ALT、AST水平;HE染色观察小鼠肝组织病理改变;流式细胞术检测脾细胞中Th17细胞频率;免疫组化检测肝组织IL^(-1)7A的表达;Western blot检测肝组织中STAT3和磷酸化STAT3的表达。结果与AIH+NS组相比,AIH+Cisplatin组转氨酶明显下降、肝组织病理好转、IL^(-1)7A表达及Th17细胞比例下调、磷酸化STAT3的表达下降。结论小剂量顺铂可能通过抑制STAT3信号下调Th17细胞频率并减少IL^(-1)7A的分泌,缓解小鼠AIH。

自然环境中人类免疫缺陷病毒感染活力的探索

目的 明确自然环境下人类免疫缺陷病毒（HIV）的灭活规律，防止日常生活和医疗卫生工作中接触HIV阳性体液引起的HIV感染。方法通过测TCID50，检测了HIV在水和含10％血清RPM11640培养液稀释后，持续存在于4℃、室温（20℃～26℃）、37℃不同时间的感染活力，并对不病变样品盲目传三代以明确其感染性。结果〈4℃无论在水或细胞培养液中，HIV感染活力〉35d；室温及37℃下，水中HIV感染活力可维持7～14d，培养液中可维持14-21d。结论HIV在自然环境中抵抗力较强，对HIV阳性体液及其污染物应谨慎处理，防止HIV意外传播。

不同手术方式对胃癌根治术患者机体免疫功能的影响

目的比较腹腔镜和开腹胃癌根治术对机体免疫功能的影响。方法回顾性分析90例胃癌根治术患者,按照手术方式分为腹腔镜组(n=45)和开腹组(n=45),比较两组患者术前及术后第3、10天外周血Ig G、Ig M、Ig A、CD3^+、CD4^+、CD8^+、NK细胞活性。结果腹腔镜组术中出血量少于开腹组,且下床活动时间早(P﹤0.05);两组手术时间、肛门排气时间和术后并发症总发生率的差异无统计学意义(P﹥0.05);术后第3天,两组患者Ig G、Ig M、Ig A、CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+和NK细胞活性较术前均降低(P﹤0.05),组间差异无统计学意义(P﹥0.05);术后第10天,开腹组上述指标仍低于术前(P﹤0.05),腹腔镜组接近术前水平(P﹥0.05),腹腔镜组Ig M、CD3^+和CD4^+高于开腹组(P﹤0.05),Ig A、Ig G、CD4^+/CD8^+和NK细胞活性组间差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论腹腔镜和开腹胃癌根治术后患者的免疫功能均降低;与开腹手术相比,腹腔镜术后机体免疫功能恢复较快。

金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。

维生素C对人类免疫缺陷病毒灭活作用的研究

目的验证维生素C对人类免疫缺陷病毒(HIV)的灭活作用,为生物制品提供一种安全可行的HIV灭活的方法。方法通过测半数组织培养感染剂量(TCID50),检测不同浓度维生素C在不同温度和作用时间下对HIV的灭活作用,并对有效剂量组进行MT4细胞毒性试验。结果500μg/ml维生素C在无血清状态下有灭活HIV作用,而此剂量对MT4细胞有不可逆转的毒性作用。结论维生素C不适宜用于血及血制品的HIV灭活。

青年教师进行医学免疫学实验教学的体会

医学免疫学是生命科学的前沿科学，又是实用性极强的学科，发展快，知识更新迅速。免疫学技术也随之成为生物医学研究普遍应用的手段和方法。因此，免疫学实验课显得尤为重要。总结青年教师在免疫学实验教学中的体会，探讨青年教师如何进行免疫学实验教学改革。

不同剂量环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响

目的探索不同剂量环磷酰胺(CTX)对正常小鼠免疫功能的影响,为CTX临床应用提供实验数据。方法 C57BL/6小鼠24只,随机分为对照组、低剂量组和高剂量组,分别给生理盐水(NS)、低剂量和高剂量的CTX,检测血常规、Treg比率、T细胞和B细胞增殖功能及巨噬细胞吞噬功能、细胞增殖周期及凋亡比率。结果 RBC、WBC、PLT数量在高剂量组显著降低,对照组与低剂量组无差异;Treg占CD4+T细胞的比例在低剂量组显著下降,对照组与高剂量组无差异;T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能在低剂量组高于对照组和高剂量组,高剂量组低于对照组;细胞凋亡比率在高剂量组明显增加,对照组与低剂量组间无差异;高剂量组细胞阻滞在S期,对照组与低剂量组间无差异。结论低剂量CTX通过下调Treg、增强免疫细胞的功能,促进机体免疫;而高剂量CTX通过抑制DNA的复制、促进细胞凋亡和降低免疫细胞功能,使机体处于免疫抑制状态。相关数据可以为CTX的临床应用提供借鉴。

全自动微生物分析系统对布鲁杆菌属和种鉴定效果的研究

目的 鉴定与分析布鲁杆菌的生化特征,评价对全自动微生物分析系统的鉴定效果和临床意义.方法 17株标准菌株和121株实验菌株来自于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所布鲁杆菌病（简称布病）研究室菌种库,实验菌株为全国26个省（市、自治区）1957-2014年历次流行自布病患者和羊、黄羊、岩羊、牛、猪分离的布鲁杆菌菌株.用GN鉴定卡在VITEK2 COMPACT全自动微生物分析系统上对标准菌株和实验菌株进行生化检测,根据布鲁杆菌属和种的生化阳性鉴定标准,通过对比分析,获得布鲁杆菌属和种的生化阳性鉴定结果.对系统鉴定异常的菌种,采用传统鉴定方法进行氧化酶、脲酶、动力、硫化氢测定和碱性复红敏感性试验、噬菌体裂解试验及A/M单相特异性血清凝集试验进行菌种的重新判定.结果 对138株布鲁杆菌菌株的全自动微生物分析系统生化鉴定结果显示,布鲁杆菌属的主要阳性鉴定指标为L-脯氨酸芳胺酶（ProA）、酪氨酸芳胺酶（TyrA）、尿素酶（URE）、氨基乙酸芳胺酶（GlyA）、乳酸盐产碱（1LATK）、ELLMAN （ELLM）;与系统值比较,全部菌株生化功能相似率为97.99％（135.23/138）,其中标准菌株为96.71％（16.44/ 17）,实验菌株为98.17％（118.79/121）;菌株鉴定需要的时间为6.1 ～ 7.7 h,其中标准菌株为7.3 h,实验菌株为6.9 h.区分是否为布鲁杆菌属的阳性鉴定指标为ProA、TyrA、URE、GlyA;区分羊种布鲁杆菌的阳性指标为ELLM;区分牛种布鲁杆菌的阳性指标为1LATK;区分猪种布鲁杆菌的阳性指标为丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶（APPA）;犬种无明显的阳性指标.从实验菌株中鉴定出4株人苍白杆菌,传统方法显示,氧化酶阳性、脲酶阳性、硫化氢阳性、动力阴性;碱性复红敏感性试验有抗性2株（牛种）,敏感2株（猪种）;硫堇实验敏感2株（牛种）,有抗性2株（猪种）;噬菌体裂解试验阳性2株（牛种）,阴性2株（猪种）.A/M因子单相特异性血清凝集试验,牛种布鲁杆菌（A）阳性,羊种布鲁杆菌（M）阴性,排除人苍白杆菌,最终鉴定均为布鲁杆菌种.结论 全自动微生物分析系统在鉴定布鲁杆菌时速度快,可靠性较高,对不同菌株属和种鉴定的主要阳性指标明确,可用于临床诊断.当鉴定为人苍白杆菌时,需与布鲁杆菌进行鉴别,以免误诊.

HMA分析体外传代HIV亚型变异

目的:了解体外传代HIV-1亚型的变异性,以深入了解HIV-1在自然状态下的生物学性状,为艾滋病的预防和治疗提供基础资料。方法:经MT4细胞连续传代、反复冻融传代、反复更换宿主细胞传代、施加灭活因素(酸性条件及S/D)传代等多种不同方式体外传代培养HIV。套式PCR扩增其包膜基因,用异源双链泳动分析法(HMA)分析基因亚型的变异。结果:各种方式传代HIV-1包膜基因亚型不变。结论:体外传代HIV基因亚型不变;HMA适用于体外传代HIV型别鉴定。

小剂量环磷酰胺对正常小鼠CD4^+CD25^+Treg细胞的调节作用

目的比较多次与单次应用小剂量环磷酰胺(CTX)对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)数量及功能的影响,明确小剂量CTX可否多次用于下调Treg细胞。方法 C57BL/6小鼠32只,随机分为正常对照、单次、两次及三次CTX注射组共4组,各组每10天腹腔注射20 mg/kg CTX或等体积PBS,末次给药后3 d,流式细胞技术测小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比;同时3-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法比较各组脾细胞中T、B细胞增殖功能,中性红吞噬试验比较各组巨噬细胞吞噬功能。结果各实验组小鼠脾细胞中Treg细胞占CD4+T细胞百分比显著低于对照组(P<0.05),而各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能明显高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。应用CTX后Treg细胞数量与T、B细胞增殖功能及巨噬细胞吞噬功能呈线性负相关。结论多次与单次小剂量应用CTX对小鼠Treg细胞数量的下调作用无差异,下调Treg细胞后对免疫细胞的调节功能也无差异,小剂量CTX可多次用于下调正常小鼠Treg细胞。

WT1-235肽体外抗肿瘤效应的研究

目的探索WT1肽体外抗肿瘤效应。方法合成含HLA-A*0201锚定位点的9个氨基酸的WT1-235肽。PCR-SSP法筛选HLA-A*0201健康供者并鉴定细胞株HLA-A基因型别,RT-PCR鉴定靶细胞株WT1表达与否。体外分离HLA-A*0201型别的外周血单个核细胞(PBMCs),培养树突状细胞(DC),负载WT1肽并刺激活化同源淋巴细胞,进行体外CTLs杀伤靶细胞的细胞毒试验。结果荷肽DC活化的CTLs对高表达WT1的HLA-A*0201型别细胞株SW48的杀伤效应高于不表达WT1的HLA-A*0201型别的人T细胞,也高于表达WT1但非HLA-A*0201型别的K562细胞(P<0.05)。结论 WT235-242肽具有体外抗肿瘤效应并受MHC限制。

血清胆红素在儿童呼吸系统感染性疾病中的变化及临床意义

目的明确胆红素在儿童呼吸系统感染性疾病中的变化及临床意义.方法山西省儿童医院2018-01~2019-06期间符合入选条件的入院主诊断为支气管肺炎或肺炎患儿作为感染组,同期门诊和住院体检的健康儿童作为儿童对照组.成人感染组由同期在山西医科大学第二医院住院并被确诊为急性肺炎的符合入选条件的病人组成,成人对照组由体检中心健康体检者组成.分别统计分析儿童和成人对照组和感染组间总胆红素、直接和间接胆红素水平的差异,并将儿童与成人相对应的对照组和感染组胆红素水平进行比较.计算各组总胆红素值≥13.68μmol/L的人数比例,白细胞计数异常及CRP水平高于正常的人数比例,并使用Spearman相关性分析方法分别分析儿童和成人对照组总胆红素和间接胆红素与年龄的相关性,感染组总胆红素和间接胆红素与白细胞计数、CRP的相关性,以及白细胞计数与CRP的相关性.结果与儿童对照组比较,儿童感染组总胆红素和间接胆红素水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),且总胆红素≥13.68μmol/L人数比例低于对照组(P<0.05).成人组和儿童组结果一致.儿童对照组和感染组的总胆红素和间接胆红素水平整体较成人低,儿童总胆红素和间接胆红素水平与年龄有相关性(P<0.05).与对照组比较,儿童和成人感染组白细胞计数及CRP异常的比例均明显升高(P<0.05),成人感染组白细胞计数与CRP水平有相关性(P<0.05).不能证明儿童和成人感染组总胆红素和间接胆红素与白细胞计数、CRP水平之间有相关性(P>0.05).结论胆红素作为内源性的抗氧化剂,感染所致的呼吸系统炎症和氧化应激反应可降低总胆红素和间接胆红素水平,推测胆红素水平可能作为临床判断炎症程度和体内抗氧化能力的参考指标之一用来指导临床诊疗.

新生儿和小婴儿危重先天性心脏病急诊手术

目的探讨新生儿和小婴儿危重先天性心脏病急诊手术的必要性及提高手术疗效的措施。方法收集新生儿和小婴儿危重先天性心脏病55例的急诊手术资料,男性35例,女性20例。患儿术前有反复肺炎心衰史或持续缺氧发作,其中动脉导管未闭(PDA)合并肺动脉高压(PH)3例、室间隔缺损(VSD)伴肺动脉高压34例、室间隔缺损(VSD)合并房间隔缺损(ASD)8例、室间隔缺损合并动脉导管未闭4例、严重肺动脉狭窄(PS)合并房间隔缺损4例、法洛四联症(TOF)2例,均行急诊手术治疗。结果术后并发气胸3例、呼吸机相关性肺炎2例、拔管后再插管3例、低心排2例、术后早期严重心功能不全合并有毛细血管渗漏综合征3例,常规治疗下仍少尿或无尿,持续3～5h,肺内渗出增多,中心静脉压进行性上升,均行腹膜透析治疗。全组病例51例痊愈出院,死亡4例。结论新生儿和小婴儿危重先天性心脏病急诊手术效果较好。合理的围手术期管理、合适的体外循环方法及手术方案是提高手术成功率的关键。

Th22细胞通过释放IL-22活化宫颈癌细胞AKT通路促进其增殖

目的研究IL-22及Th22细胞在宫颈癌组织中的表达和频率,分析其与宫颈癌临床分期的相关性,探讨它们与宫颈癌发生发展的关系。方法以西南医院2016年1月至2月收集的32例宫颈癌患者为研究对象,免疫组化、Western blot检测IL-22在宫颈癌组织、癌旁组织和正常宫颈组织中的表达情况;流式细胞技术检测Th22细胞在宫颈癌患者外周血CD4^+T淋巴细胞和肿瘤浸润淋巴细胞中的频率及其表达IL-22情况,探讨其与宫颈癌临床分期的关系;细胞共培养探究IL-22是否通过促进AKT信号通路活化而促进宫颈癌细胞增殖。结果宫颈癌肿瘤组织中IL-22的表达水平显著高于癌旁和正常宫颈组织,而且Ⅲ~Ⅳ期宫颈癌组织IL-22的表达明显高于Ⅰ~Ⅱ期。宫颈癌肿瘤组织浸润淋巴细胞中,Th22细胞频率显著高于宫颈癌患者及正常人的外周血,且与宫颈癌的临床分期正相关。Th22是宫颈癌组织中IL-22主要来源。细胞共培养实验显示IL-22促进了AKT的磷酸化并诱导下游分子的表达。结论 Th22细胞通过释放IL-22活化宫颈癌细胞内AKT通路促使其增殖,干预Th22及其效应分子IL-22是宫颈癌防治的一个潜在靶标。

人巨细胞病毒PP65抗原ELISA检测方法的建立

目的用制备好的兔和大鼠PP65多克隆抗体建立检测人巨细胞病毒PP65抗原的ELISA方法。方法优化ELISA检测条件,建立检测PP65抗原的标准曲线,确定检测方法的精密度及检出下限。通过对101份临床疑似HCMV感染标本的检测,并与HCMV-IgM(ELISA)以及HCMV-DNA(FQ-PCR)检测结果的比较,分析了该方法的敏感性和特异性。分别检测HSV-1、HSV-2以及EB病毒感染血标本各5份,分析该方法是否非特异结合疱疹病毒科其他病毒抗原。结果以1∶2 000大鼠pAb包被酶标板,以1∶20 000兔pAb为检测一抗,建立了检测PP65抗原血症的ELISA方法。批间精密度与批内精密度均小于10%,检出下限为5 ng/ml。本方法检测的敏感性和特异性与HCMV-DNA(FQ-PCR)无差别(P>0.05),但敏感性高于HCMV-IgM(ELISA)方法(P<0.05)。对HSV-1、HSV-2以及EB病毒感染标本的检测结果均为阴性,排除了该方法非特异结合疱疹病毒科其他病毒抗原的可能。结论建立了检测PP65抗原血症的间接双抗夹心ELISA方法,该方法具有较好的敏感性、特异性、稳定性和重复性。

简易外周血单个核细胞分离方法的探索

目的探索简单、经济易行的大容量血样无菌分离外周血单个核细胞(PBMC)的方法。方法同时用新方法和经典的聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离同一份血样。配对t检验分析比较两种方法获取PBMC的数量。新方法采用先离心抗凝血,取出血浆与红细胞交界层,再用经典分离法分离交界层获得PBMC,余留抗凝血再次离心取出交界层并分离获取PBMC。结果新方法得到的PBMC总数不低于经典分离法(P>0.05)。结论该法能简单安全地从大量血样中无菌分离PBMC。

调免化瘀汤治疗子宫内膜异位症临床观察

目的观察调免化瘀汤治疗子宫内膜异位症的疗效。方法治疗组用自拟调免化瘀汤治疗,对照组用安宫黄体酮治疗;同时检测两组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8)及自然杀伤(NK)细胞。结果治疗组66例临床痊愈10例,显效22例,有效25例,无效9例,总有效率86.4%;对照组30例临床痊愈2例,显效6例,有效12例,无效10例,总有效率66.7%;两组比较,差异有显著性(P<0.05)。治疗组治疗前CD4及CD4/CD8比值均高于健康人组(P<0.01),CD8及NK细胞均低于健康人组(P<0.01);治疗后CD4与CD4/CD8比值显著下降(P<0.05),CD8与NK细胞显著回升(P<0.05),但均未恢复到正常水平。对照组治疗前后各项指标比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论调免化瘀汤治疗子宫内膜异位症确切,并可调节患者免疫功能。