荔枝携带桔小实蝇低温气调熏蒸技术研究

为了解决在低温冷藏条件下荔枝携带桔小实蝇的检疫除害处理问题,采用气调和溴甲烷熏蒸联合处理方法探讨荔枝低温气调熏蒸处理效果。通过充氮降低氧气浓度使新鲜荔枝处于低氧密闭空间,在2.5℃、5℃和10℃低温冷藏条件下,经过72 h处理,氧气浓度0.5%,1%,1.5%,2.0%处理荔枝上桔小实蝇3龄幼虫的死亡率达到5.9%-85.25%。单独采用气调处理能够在低温冷藏条件下杀死部分荔枝新鲜果实携带的桔小实蝇幼虫,但还不能作为检疫除害处理的方法。在10℃的冷藏温度下,密闭空间气调只需1%氧气浓度就可以在溴甲烷32 g/m3剂量下,密闭2 h达到使试虫100%死亡率的处理效果。当新鲜荔枝在低温冷藏情况下,结合气调处理,可以达到检疫除害处理的效果。

胶体金技术快速测定葡萄酒中赭曲霉毒素A

目的利用胶体金免疫层析技术建立葡萄酒中赭曲霉毒素A的快速筛查方法。方法样品经过层析、孵育,通过i Check-单卡单测快检仪的图像分析进行定量检测,同时对进口与市售国产葡萄酒进行筛查。结果赭曲霉毒素A在添加水平为2.0、5.0μg/L时,红葡萄酒的平均回收率分别为92.5%、72.0%;相对标准偏差(RSD,n=6)分别为5.84%、2.59%;桃红葡萄酒的平均回收率分别为87.0%、76.6%;相对标准偏差(RSD,n=6)分别为7.70%、5.56%;白葡萄酒的平均回收率分别为84.0%、78.4%;相对标准偏差(RSD,n=6)分别为5.67%、3.54%。该方法定量限为1.0μg/L。同时与酶联免疫方法和液相色谱方法比较,通过t检验表明胶体金法不存在系统误差。市售葡萄酒赭曲霉毒素A的含量低于欧盟的限量标准(2.0μg/L)。结论胶体金的方法具有快捷、灵敏、特异性等特点,适合于大批量葡萄酒样品的现场快速筛查。

进境东盟水果病害疫情分析及检疫监管对策

随着中国-东盟自由贸易区的不断发展,越来越多的东盟水果进入我国,丰富了国内热带水果消费市场,也带来了水果病害的入侵风险。本文分析了2011~2015年我国从东盟输华水果中截获的真菌与细菌有害生物疫情,结果表明:截获的病菌中真菌有害生物占绝对的主导地位,其中检疫性真菌偶有截获。就全国口岸而言,截获病菌77 822种次,其中病原真菌占99.04%,病原细菌占0.96%;真菌截获种次排前三位的水果依次来自泰国、越南、菲律宾。就广东口岸(不含深圳、珠海)而言,尚未截获病原细菌,截获病原真菌共计15 136种次(其中检疫性真菌截获1种次);泰国、印度尼西亚和越南的水果占据截获病原真菌次数的前三位;泰国香蕉、龙眼、莲雾和番荔枝和越南火龙果携带病原真菌的风险较高;截获次数较多的病原真菌依次是胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、白地霉(Geotrichum candidum)、匍枝根霉菌(Rhizopus stolonifer)、黏头孢属(Gliocephalis sp.)、小煤怠菌属(Meliola sp.)、可可球二孢菌(Botryodiplodia theobromae)等。根据上述结果,提出相应的检疫监管对策与建议,以期为口岸检疫提供参考,降低外来有害生物的入侵风险。

禽流感病毒广东株HA基因BLSOM神经网络分型方法的建立

利用25个禽流感病毒及相关流感病毒广东株HA基因序列,建立三、四核苷酸特征基因片段BLSOM神经网络分型方法,对各片段数量进行统计和归一化处理。设计程序由MATLAB函数模拟人脑思维自组织学习,当训练步数为100及以上各毒株能成功聚类。H1、H3、H5、H7和H9亚型主要毒株分别归为一类,其中H3N2和H7N9毒株HA基因聚类图谱高度相似,表明这些毒株起源相同;不同年代H5N1毒株差异较大;H1N1和H9N2各1个毒株聚为一类,表明这两种病毒自然重组变异,为高危毒株筛查和溯源提供参考。

中国高致病性禽流感疫情流行特征及其防控措施

高致病性禽流感在中国持续流行,H7N9病毒感染人类出现新的疫情特征,需要进一步强化防控措施。针对疫情点多面广、H9亚型泛滥重组和交叉感染带毒等特点,应做到依法处置疫情,加强家禽企业生物安全隔离区建设,谨慎使用疫苗,完善监测系统和兽医管理体制。结合禽流感最新疫情流行特征,对中国禽流感防控体系建设进行了探讨。

高效液相色谱法测定葡萄酒中溶菌酶的含量

目的建立高效液相色谱法检测葡萄酒中溶菌酶的含量。方法葡萄酒样品经5%盐酸溶液酸化后,采用流动相A乙腈∶三氟乙酸∶水（50：0.2：49.8,V：V：V）和流动相B乙腈∶三氟乙酸∶水（1：0.2：98.8,V：V：V）进行梯度洗脱,经反相苯基柱分离后,用高效液相色谱仪荧光检测器或紫外检测器进行测定,通过保留时间定性,外标法定量,并优化流动相的配比、梯度洗脱程序和样品的酸化条件。结果本方法在50、200、500和750 mg/L添加水平下的回收率为93.5%-99.2%,相对标准偏差为1.62-5.74%（n=6）,方法定量限为50 mg/L。结论本方法具有分离效能高、重现性好、准确可靠,灵敏度高等优点,测定结果与酶联免疫法结果一致。该方法可以满足葡萄酒中溶菌酶的检测需求。

明孢盘菌属分类进展及其重要的病原菌种类

明孢盘菌属(Neofabraea)中很多种类是重要的植物病原菌。该属真菌分类历史较为复杂,系统发育关系也长期存在较大的争议。本文对明孢盘菌属的分类学研究历史做了系统回顾,包括属的建立、物种组成及其命名更替和系统发育,概述了该属重要的植物病原菌种类地理分布和经济为害性,讨论了该属真菌物种的传统分类方法及分子研究方法,指出了存在的问题及今后的研究方向。

高效液相色谱法测定保健品中的叶黄素含量

目的建立应用高效液相色谱法测定保健品中叶黄素的分析方法。方法样品经无水乙醇分散溶解、碱液皂化、有机溶剂萃取后,分取适量氮吹浓缩,以0.1%BHT乙醇溶液溶解定容,以甲醇为流动相,流速为1.5 mL/min,柱温30℃,经由YMC Carotenoid色谱柱分离,采用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器在445nm下进行检测,以峰面积外标法定量。结果加标回收率实验中,3个添加浓度水平下,叶黄素的平均回收率在94.7%～101%之间,相对标准偏差为0.87%～3.97%。方法检出限为1.5 mg/kg、定量限为5.0 mg/kg。结论该方法具有操作简便、快速、准确的特点,适用于保健品中叶黄素的含量分析。

病毒性出血性败血症病毒RNA标准物质的研制

利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品。初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选物。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20℃~25℃(相对湿度20%~25%)7 d,2℃~8℃保存1个月及-20℃保存6个月的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为(6.625±0.149)×10~8copies/μL,可用作VHSV核酸检测的标准质控品。

TaqMan探针实时荧光PCR快速检测苹果牛眼果腐病菌方法的建立

苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea malicorticis、N.perennans、N.alba和N.kienholzii)是我国检疫性植物病原真菌,为建立该病菌的实时荧光PCR检测法,根据病菌及其近缘种的翻译延伸因子(EF-1α)的保守序列设计了特异性探针,分别以苹果牛眼果腐病菌菌株和本研究构建的EF-1α重组质粒DNA为阳性标准品检验探针的特异性和灵敏度。结果显示探针MAL-P、PER-P、ALB-P和KIE-P分别对N.malicorticis、N.perennans、N.alba和N.kienholzii表现特异性阳性扩增,而与近缘种及其他常见的果腐病菌无交叉反应,单重探针和4种探针混合液的灵敏度分别达1 fg/μL和10 fg/μL DNA。总计从美国、智利、新西兰、法国进境截获的29批可疑病果的分离物中检测到PCR阳性荧光信号,包括20批N.perennans、8批N.alba和1批N.kienholzii。该方法在6 h内即可完成整个检测流程,其特异性强、灵敏度高,适用于实际样品中苹果牛眼果腐病菌的快速检测。

病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备

利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质。设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至p GEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA。初步定量稀释至约10~8 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异<5%;稳定性检验表明,室温(20~25℃)保存7 d、冷藏(2~8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算。核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×10~8 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品。

辐照对桔小实蝇幼虫酶活性及虫体黑化的影响

为研究辐照实蝇的鉴别方法,采用10~160Gy辐照桔小实蝇卵和不同日龄幼虫后,分别测定单条幼虫体内的酚氧化酶（PPO）、乙酰胆碱酯酶（ACh E）、超氧化物歧化酶（SOD）的OD值,并观察虫体黑化情况。结果表明：80 Gy以上剂量辐照桔小实蝇卵、不同日龄幼虫后,能显著降低7日龄幼虫体内PPO、SOD的OD值;80 Gy以上剂量辐照桔小实蝇24 h卵和1日龄幼虫后,能显著降低其7日龄幼虫体内ACh E的OD值;因此通过测定SOD、PPP、ACh E酶活性变化,可以作为判定桔小实蝇是否经过检疫辐照处理的依据。最低以40 Gy辐照桔小实蝇卵、1日龄、2日龄幼虫后,其7日龄幼虫虫体不能黑化,而对照虫体黑化,因此观察虫体黑化亦可作为判定桔小实蝇辐照与否的依据。

小麦粉及其制品中乙酸本底对双乙酸钠测定结果的影响

目的探讨小麦粉及其制品中乙酸本底对双乙酸钠测定结果的影响。方法依据GB 5009.277-2016,分别对双乙酸钠、乙酸和乙酸钠标准溶液进行加酸和不加酸蒸馏,经高效液相色谱上机分析比较结果;使用无本底原料按添加食盐和白砂糖与否制作面包,并对成品进行加酸与不加酸蒸馏,经高效液相色谱仪上机分析比较结果。结果双乙酸钠、乙酸和乙酸钠不加酸与加酸蒸馏测定结果的比值分别为49%、100%和10%;添加和无添加食盐与白砂糖制作面包不加酸与加酸蒸馏测定结果比值分别为56%和100%。结论 GB5009.277-2016中扣除乙酸本底的实验方法仅适用于不含双乙酸钠仅含游离乙酸的食品样品。

进境美国苜蓿草携带的真菌种类鉴定

为明确美国苜蓿草携带的真菌有害生物种类并为评估其风险奠定基础,从广东和江苏口岸进境的美国苜蓿草中挑拣出茎杆上有明显褐色至黑色斑点的可疑病害样品635份,经分离培养,获得菌株1382株。经鉴定,共有真菌37属52种,其中鞭毛菌1种,接合菌1种,子囊菌3种,担子菌1种,半知菌46种。

一种值得关注的火龙果腐烂病

火龙果腐烂病是一种对我国新兴的火龙果果业潜在风险较高的真菌病害。近年来,我国口岸多次从越南进口的火龙果鲜果中截获该病害。本文介绍了其病原真菌仙人掌平脐蠕孢(Bipolaris cactivora(Petrak)Alcorn)地理分布、寄主范围、经济危害性、症状及病原菌形态特征、形态学鉴定和分子检测方法 ;分析了病原菌的进入风险和定殖与扩散风险,提出了加强口岸植物检疫,严防病原菌传入及病害在国内发生扩散和蔓延等风险管理措施。

供港澳家禽高致病性禽流感及H7N9病毒监测与分析

采集供港澳家禽喉头、泄殖腔拭子进行禽流感病毒监测,建立一步法荧光RT-PCR检测A型和H5、H7、H9亚型及H7N9病毒,所用高通量核酸提取和基因扩增体系可适应活禽出口快速检测通关的要求。2006—2015年共检测约150万份拭子,结果 H5和H7亚型高致病性禽流感全部为阴性,H9亚型等A型流感病毒阳性率约0.035%,冬、春季节检出率较高,H9亚型病毒HA基因与H7N9病毒广东流行毒株具有亲缘关系。供港澳禽流感病毒监测体系快速高效、生物安全性好,结合抗体监测和临床检查,可保证出口家禽处于无禽流感状态。

食品接触材料中烃类矿物油毒性和风险管理

烃类矿物油(mineral oil hydrocarbons,MOHs)是一类由多种烃类物质组成的复杂混合物。现阶段,针对烃类矿物油毒理学数据比较缺乏,毒理学动物试验数据能否外推至人体仍存在争议。对饱和烃矿物油(MOSH)的毒性主要关注其生物蓄积性,C16~C35的MOSH能在人体和大鼠组织中蓄积并可形成微肉芽肿;而含有3~7个芳香环的芳香烃矿物油(MOAH)具有致突变和致癌性,以及是潜在的内分泌干扰物。欧洲食品安全局指出人群暴露于烃类矿物油的健康风险值得关注。食品接触材料是食品中烃类矿物油污染的重要来源,而由回收纸纤维制作的食品接触纸制品中烃类矿物油污染食品的问题尤为突出。为完善对烃类矿物油的风险管理,应基于化学成分而不是粘度指标,对特定组分烃类矿物油开展毒理学研究和膳食暴露评估。

QuEChERS前处理结合高效液相色谱法及高效液相色谱-串联质谱法检测葡萄酒中3种赭曲霉毒素

目的建立QuEChERS净化技术结合高效液相色谱法及高效液相色谱-串联质谱法检测葡萄酒中赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)和赭曲霉毒素C(OTC)3种赭曲霉毒素的方法。方法对QuEChERS净化条件和高效液相色谱及高效液相色谱-串联质谱检测条件进行优化,葡萄酒样品先用乙腈-冰乙酸(90∶10,V/V)进行酸化稀释,离心后取上清液经C_(18)+SiO_2+MgSO_4净化剂组合净化过滤,待测样液经液相色谱C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm)梯度洗脱分离后,分别采用荧光检测器和串联质谱电喷雾技术,在多反应监测(MRM)模式下,实现同时对葡萄酒中OTA、OTB和OTC三种赭曲霉毒素的定性和定量分析。结果方法最低定量限(LOQ)均为2.0μg/kg,相对标准偏差(RSD)为2.01%～7.52%(n=6)。结论该方法操作方便、灵敏度高、重现性好,适用于日常监管工作中对葡萄酒中赭曲霉毒素的检测。

新城疫微量红细胞凝集抑制试验能力验证方法与评价

采用冻干方法制备能力验证样品,进行单因子方差法和不稳定性偏差法分析,表明其均匀性和稳定性良好。按照CNAS-GL02的要求对参试实验室结果进行评价,结果表明大部分参试单位达到优良技术水平。出现离群不满意结果及可疑有问题结果的实验室应从多个方面查找原因。