茯苓多糖抗肿瘤作用与机理的实验研究

观察茯苓多糖（ＰＰＳ）对小鼠肉瘤Ｓ１８０细胞、人白血病Ｋ５６２细胞体外增殖的影响，发现ＰＰＳ对两种细胞的增殖均有强烈抑制作用。为探讨其抗肿瘤机理，对Ｓ１８０细胞膜成分进行了分析，结果显示ＰＰＳ与细胞接触２４ｈ，引起细胞膜唾液酸含量升高，膜磷脂含量降低，膜磷脂脂肪酸组成发生明显改变（Ｃ２０：４和Ｃ１４：０降低），与对照组相比，这些变化均有显著差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；但膜胆固醇含量、膜流动性（Ｃ／Ｐ比值、Ｕ／Ｓ比值）及膜中性脂脂肪酸组成不受影响。将ＰＰＳ与Ｓ１８０细胞膜在适当条件下一同温育，发现ＰＰＳ干扰膜的肌醇磷脂代谢，明显抑制磷脂酰肌醇转换。提示ＰＰＳ的抗癌机理与膜生化特性改变有关，其中对膜磷脂含量、脂肪酸组成和作为膜磷脂组分之一的肌醇磷脂代谢的影响是重要环节。

半边旗中二萜类化合物的植化及抗肿瘤活性初步研究

目的：对半边旗中二萜类有效成分及抗肿瘤活性作进一步研究。方法：半边旗乙醇提取物上活性炭柱，乙醇氯仿（１０∶１）洗，减压浓缩后上硅胶柱，甲醇氯仿（９０∶２）洗脱，得纯化合物，经二维核磁共振（ＮＭＲ）确定了化合物的空间结构。以噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定肿瘤细胞存活率，。ＩＣ５０按改良Ｋａｒｂｅｒ公式计算。结果：共分得５个化合物Ｂ，４Ｆ，５Ｆ，６Ｆ及Ａ，其中Ａ是新化合物，６Ｆ是首次从该植物中分离得到。５Ｆ，Ａ，６Ｆ明显抑制人白血病粒细胞ＨＬ６０，人低分化胃腺癌上皮细胞ＭＧＣ８０３、人低分化鼻咽癌上皮细胞ＣＮＥ２Ｚ和人肝癌上皮细胞ＢＥＬ７４０２的增殖，活性依次增强。６Ｆ对ＨＬ６０细胞的活性最强［ＩＣ５０为（０．０９±０．０１）μｍｏｌ·Ｌ－１］，阳性对照５Ｆｕ的ＩＣ５０为：（５２．５±２．８）μｍｏｌ·Ｌ－１。结论：从半边旗分离得到的一类二萜化合物具有显著抑制多种癌细胞增殖的活性，其中６Ｆ活性最强。

半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究

目的：半边旗的植化研究及其有效部位和有效成分的抗肿瘤活性研究。方法：半边旗乙醇提取物上活性炭柱，乙醇洗脱液减压浓缩得粗提物（Ｃ），甲醇氯仿（２∶１）洗脱液浓缩后以硅胶柱层析分离，得到一个倍半萜（Ｂ），两个二萜（４Ｆ、５Ｆ）。Ｂ、４Ｆ、５Ｆ的结构经光谱鉴定，尤其是用二维ＮＭＲ确证了空间结构。以台盼蓝染色作活细胞计数，算出药物对细胞的生长抑制率，ＩＣ５０按改良Ｋａｒｂｅｒ公式计算。结果：分离得到三个化合物，确定了结构。以ＨＬ６０细胞为筛选模型，结果表明：粗提物（Ｃ）、化合物５Ｆ明显抑制ＨＬ６０细胞增值。结论：药理实验表明，粗提物的抗肿瘤活性明显高于５Ｆ，预示粗提物中仍有高活性化合物，值得进一步研究。

植物多糖抗肿瘤作用与机理研究——Ⅲ、茯苓多糖(PPS)和刺五加多糖(ASPS)对S180细胞膜脂肪酸组成的影响

我们先前的研究表明,植物多糖抑制体外培养的小鼠肉瘤S180细胞增殖并使细胞膜磷脂含量减少,同时抑制膜磷脂酰肌醇转换。为进一步探讨植物多糖与膜磷脂的关系,本文采用毛细管柱气相色谱法分析了茯苓多糖(PPS)、刺五加多糖(ASPS)与S180细胞一同温育24h后,细胞膜磷脂和中性脂的脂肪酸组成变化,发现中性脂的脂肪酸组成和不饱和性不受影响,磷脂的脂肪酸组成发生明显改变,花生四烯酸(C(20:4))和豆蔻酸(C(14:0))降低(P<0.05或P<0.01),与用作阳性药物对照的氨甲喋呤作用相似。本文对膜磷脂脂肪酸组成变化的意义结合先前的实验结果进行了讨论,认为在PPS、ASPS的抗肿瘤机理中,细胞膜磷脂生化特性的改变是重要环节。

气相色谱/氢火焰检测器检测HL-60细胞DNA中氧化损伤产物8-羟基鸟嘌呤的研究

用0．4mmol／LH2O2处理HL－60细胞株24h，采用气相色谱／氢火焰检测器（GC／FID）检测DNA氧化损伤产物8-羟基鸟嘌呤，并用气相色谱质谱仪选择性离子检测（CGC／MS－SIM）对其进一步鉴定。所用方法的平均回收率为81．7％，RSD小于5％。

Genistein抑制鸟嘌呤氧化损伤的CGC/MS研究

为了探讨genistein抗肿瘤与抗氧化之间的关系，用Fenton反应（H2O2＋Fe2+→·OH＋OH－＋Fe3+）造成鸟嘌呤的氧化损伤，用毛细管柱气相色谱／质谱分析法（CGC／MS）研究了genistein对这一过程的影响。结果表明genstein具有抑制8-经基鸟嘌呤生成的作用，60μmol·L－1genistein可使8-经基鸟嘌呤的生成量降低50％，提示genistein的抗肿瘤效果可能与其保护遗传物质的氧化损伤有关，这种作用可能是genistein通过清除H2O2造成的。

DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂诱导鼻咽癌上皮细胞凋亡的实验研究

拟从细胞凋亡角度出发，探讨能够诱导鼻咽癌上皮细胞凋亡的因素，为有效地防治该恶性肿瘤提供新的思路。方法：光镜下观察细胞的形态变化；流式细胞仪检测细胞周期变化及亚二倍体比例；ＤＮＡ凝胶电泳及二苯胺法测定ＤＮＡ片段化程度。结果：一定浓度的拓朴异构酶Ⅰ（Ｔｏｐｏｉｓｏ－ｍｅｒａｓｅⅠ，ＴＯＰＯⅠ）抑制剂喜树碱（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，ＣＰＴ）体外作用于人低分化鼻咽癌上皮细胞系ＣＮＥ－２Ｚ细胞一定时间后，镜下可见细胞体积缩小，染色质凝聚，胞膜突起及凋亡小体形成等形态变化。２～１０μｍｏｌ／Ｌ的ＣＰＴ分别作用１２小时后作流式细胞仪检测，亚二倍体比例均为３０％左右；各浓度分别作用２４小时，亚二倍体比例均为５０％左右；同时细胞周期有明显的变化，主要表现为Ｇ２／Ｍ期细胞减少。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳呈典型的梯形带。结论：拓朴异构酶Ⅰ抑制剂ＣＰＴ对人低分化鼻咽癌上皮细胞具有明显的凋亡诱导作用。

H_2O_2对HL-60细胞DNA中8-羟基鸟嘌呤含量影响的研究

目的与方法 :本文采用气相色谱 /氢火焰离子检测器 (GC/FID)和气相色谱 -质谱仪选择性离子检测器 (CGC/MS -SIM )探讨H2 O2 致HL - 6 0细胞氧化损伤时DNA中氧化修饰碱基 8-羟基鸟嘌呤 (8-oh -G)含量的变化 ,观察HL - 6 0细胞脂质过氧化程度和细胞内还原型谷胱甘肽 /氧化型谷胱甘肽 (GSH/GSSG)比值的变化。结果 :结果显示H2 O2 可使HL - 6 0细胞丙二醛 (MDA)含量增高 (P <0 .0 1) ,GSH/GSSG比值显著下降 (P <0 .0 1)。细胞经H2 O2 持续作用 8h可检测到DNA中有8-羟基鸟嘌呤的存在 ,H2 O2 的浓度影响 8-羟基鸟嘌呤的生成量。结论 :结果提示 ,HL - 6 0细胞脂质化水平的升高、GSH/GSSG比值下降、细胞DNA中 8-羟基鸟嘌呤含量变化和H2 O2 浓度及作用时间有关。

三种天然抗氧化剂对早幼粒白血病细胞（HL－60）的生长抑制作用研究

用不同终浓度的茶多酚、丹酚酸Ｂ和知母宁进行ＭＴＴ实验，观察这三种天然抗氧化剂对ＨＬ一６０细胞存活和增殖的影响。实验结果表明，三种天然抗氧化剂在５～８０μｇ／ｍｌ浓度范围内均对ＨＬ一６０细胞生长和增殖有抑制作用，并呈明显的剂量依赖关系。茶多酚半抑制浓度（ＩＣ５０）为１７。７μｇ／ｍｌ，丹酚酸ＢＩＣ５０为２２．５μｇ／ｍｌ，知母宁ＩＣ５０为１７．１μｇ／ｍｌ。推测它们对ＨＬ一６０细胞生长的抑制作用可能与其抗氧化性质和清除自由基、活性氧效能有关。

人早幼粒白血病HL-60细胞蛋白激酶CK2的研究

目的：研究人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞蛋白激酶ＣＫ２的性质。方法：经二次ＤＥ－５２离子交换纤维素柱，一次肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４８亲和层析柱纯化后的ＣＫ２（纯化了１３９倍，回收率为１１．８％），以［γ－３２Ｐ］ＡＴＰ和［γ－３２Ｐ］ＧＴＰ为磷酸供体，以去磷酸化酪蛋白为底物，对其性质进行研究。结果：Ｃａ２＋、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ等第二信使对ＨＬ－６０细胞的ＣＫ２活性无显著影响。肝素抑制ＣＫ２活性，而精胺激活ＣＫ２，肝素与精胺对ＣＫ２的作用在一定浓度范围内呈剂量依赖性。对ＣＫ２的动力学研究测得其米氏常数Ｋｍ（ＧＴＰ）为３４．０μｍｏｌ／Ｌ。结论：ＣＫ２是一种不依赖于Ｃａ２＋、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ等第二信使的蛋白激酶，肝素是其抑制剂，精胺是其激活剂。

Ⅳ型胶原酶的研究进展

Ⅳ型胶原酶是一类在肿瘤的生长、向远端侵袭和转移过程发挥重要作用的基质金属蛋白酶 ,本文就Ⅳ型胶原酶的结构 ,活性调节及其与信号传导 ,肿瘤侵袭和转移 。

DNA甲基转移酶作为治疗靶的研究进展

ＤＮＡ甲基转移酶作为治疗靶的研究进展王伟，都冬枝（广东医学院医用生化研究所，湛江５２４０２３）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅｆｏｒｒｅｓｅａｒｃｈｉｓａｓｆｏｌｌｏｗ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＤＮＡｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅ...

大鼠脊髓P物质对细胞免疫调节作用的研究

目的：观察大鼠脊髓P物质对细胞免疫水平的影响。方法：两级新生大鼠分别皮下注射辣椒素（CAP）和P物质抗血清，成年大鼠则于脊髓蛛网膜下腔注射。用丝裂原激活的大鼠牌细胞方法测定T淋巴细胞的白细胞介素－2（IL－2）水平。结果：大鼠皮下及脊髓蛛网膜下腔各分别注射CAP、P物质抗血清后，IL－2的水平均较对照组显著升高（P＜0．01）。结论：新生大鼠（皮下）与成年大鼠（蛛网膜下腔）注射CAP或P物质抗血清均能明显提高机体的免疫水平。

半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析

用多种人癌细胞株以ＭＴＴ试验，体外筛选半边旗抗肿瘤活性成分。结果显示：化合物５Ｆ，６Ｆ，Ａ及半边旗乙醇提取物ＰＳＥ对５种人癌细胞均有不同程度的杀伤作用，且呈明显的剂量依赖关系。其中６Ｆ的活性最强，其次是Ａ，５Ｆ，而化合物４Ｆ和Ｂ对５种细胞均无细胞毒活性。分析它们的构效关系可以推测，αβ亚甲基环戊酮结构是其活性部位，结构中羟基数目和位置的不同可以影响化合物的活性强度。

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。

重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础．

槲皮素二硫酸酯二钠对猪血小板F-肌动蛋白生成的影响

槲皮素二硫酸酯二钠是以槲皮素为原料合成的一种水溶性黄酮类化合物。采用曲拉通（Triton）沉淀法研究槲皮素二硫酸酯二钠与肌动蛋白微丝（F-肌动蛋白）生成间的关系，结果表明槲皮素二硫酸酯二钠可强烈抑制凝血酶诱导的猪血小板肌动蛋白的聚合，半数抑制率（IC50）=30μmol／L。结果提示槲皮素二硫酸酯二钠具有较强的抗血小板作用。

槲皮素对HL-60细胞中p53、bcl-2基因表达的影响

目的探讨槲皮素对人早幼粒白血病细胞株（ＨＬ６０）细胞中ｐ５３、ｂｃｌ２基因表达的影响。方法采用台盼蓝排除法确定活细胞数和免疫细胞化学ＳＰ染色法分别检测细胞中ｐ５３、ｂｃｌ２基因表达。结果槲皮素对ＨＬ６０细胞的增殖有明显的抑制作用，当其作用２４ｈ后，其ＩＣ５０为４６６μｍｏｌ·Ｌ－１，槲皮素对ＨＬ６０细胞中ｐ５３、ｂｃｌ２基因表达均有一定的抑制作用，且呈明显的剂量依赖关系。结论槲皮素抑制ｐ５３、ｂｃｌ２的表达可能是其抑制ＨＬ６０细胞增殖和生长的重要机制之一。

槲皮素水溶性衍生物的制备及生物活性

槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；３，３′，４′，５，７ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）是天然的黄酮类化合物，具有抗肿瘤、抗血小板、抗氧化作用，并影响多种酶的活性〔１～４〕．但由于槲皮素不溶于水，难于吸收〔５〕，极大地限制了其生物利用度和体内给药...

知母宁对老化红细胞CR_1活性及脂质过氧化物水平的影响

观察不同浓度的知母宁（Ｃｈｉｍｏｎｉｎ）温育后的老化红细胞免疫指标和过氧化脂质（ＬＰＯ）水平的改变，发现５、１５μｇ知母宁时，ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ、ＲＢＣ－ＣａＲ有上升的趋势但和对照组相比无明显的差异（Ｐ＞０．０５），而５０、１００μｇ浓度时ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ、ＲＢＣ－ＩＣＲ、ＲＢＣ－ＣａＲ和对照组相比有明显的升高（Ｐ＜０．０１）。知母宁５、１５、５０、１００μｇ温育后的老化红细胞ＬＰＯ含量的改变，以知母宁５０、１００μｇ浓度时ＬＰＯ水平明显降低，和对照组相比差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。提示一定剂量知母宁提高红细胞ＣＲ１活性，可能与抑制脂质过氧化反应有关。