广东黑老虎炭疽病病原鉴定、生物学特性及其室内药剂毒力检测

[目的]明确黑老虎炭疽病原菌种类,筛选出适宜的防治药剂,为黑老虎炭疽病的识别和大田防治提供理论依据。[方法]采用组织块分离法对广东省云浮市黑老虎炭疽病原菌进行分离,基于科赫法则确定其致病菌,采用形态学和分子生物学相结合的方法对菌株进行种类鉴定,并采用菌丝生长速率法对其进行生物学测定及不同药剂的室内毒力检测。[结果]通过对病叶分离纯化共获得6种菌株,选取具有代表性的典型菌株A1进行形态鉴定以及ITS序列分析,确定黑老虎炭疽病原菌属炭疽菌属(Colletotrichum sp.)。通过对菌株A1进行生物学测定,明确其最适生长培养基为PDA培养基,最适生长温度28℃,菌株致死条件为53℃水浴处理10 min,菌丝最适宜生长pH为6.0,最适光照条件为连续黑暗(暗24 h),最佳碳源、氮源分别为麦芽糖和酵母粉。同时,在福美双、溴菌腈、多菌灵和嘧菌酯4种供试药剂中,多菌灵的抑菌效果最佳,半数效应浓度(EC50)值为0.14μg/mL;其次是福美双和溴菌腈,EC_(50)值分别为55.26和55.32μg/mL,抑菌效果较好;嘧菌酯的EC_(50)值为791.95μg/mL,EC_(50)值在100~1000μg/mL,抑菌效果不明显。[结论]广东省云浮市黑老虎炭疽病原菌为炭疽菌属。多菌灵、福美双及溴菌腈对黑老虎炭疽病原菌菌丝生长具有较好的抑制作用,可作为黑老虎炭疽病的候选田间防治药剂。

岭南常用中药材外源性污染物分析研究

目的研究岭南不同产地200批次10种常用中药材(巴戟天、化橘红、何首乌、砂仁、广藿香、南板蓝根、黑老虎、鸦胆子、槟榔、益智)中农药残留、重金属外源性污染物含量,以期为南药质量控制提供依据。方法按照2020年版《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)对10种岭南常用中药材中重金属及有害元素、农药等外源性污染物进行测定并分析测定结果。结果何首乌、南板蓝根、黑老虎、槟榔、益智中农药残留量及铅、砷、镉、汞、铜限量均符合《中国药典》的限量标准,巴戟天、化橘红、砂仁、鸦胆子均存在重金属不符合,广藿香存在农药残留量不符合。结论对于研究的品种,农药残留控制较好,需要重点监控铅、汞元素。

基于矿物元素的阿胶和驴骨胶鉴别研究

目的 研究阿胶和驴骨胶中矿物元素的含量差异,寻找可鉴别阿胶和驴骨胶的特征性指标。方法 采用电感耦合等离子体质谱分析方法,对阿胶、驴骨胶、混合胶中的Ca、P、Mg、Zn、Fe、Cu、Al、Sr元素进行含量测定。采用主成分分析及Mann-Whitney检验对阿胶和驴骨胶中元素含量的差异进行统计分析。结果 通过主成分分析可将阿胶和驴骨胶明显区分;Ca、Cu、Sr、P、Mg、Fe是造成阿胶和驴骨胶差异的主要元素;驴骨胶和混合胶中P元素和Cu元素含量的比值(P/Cu)高于阿胶。结论 P/Cu值可作为鉴别阿胶和驴骨胶的特征性指标,本研究可为阿胶中驴源性杂质的鉴别提供新的思路和方法。

陈皮药材、蒸制饮片、标准汤剂与配方颗粒的UPLC特征图谱相关性研究及量值传递分析

目的借助UPLC特征图谱与超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS),建立陈皮药材、蒸制饮片、标准汤剂与配方颗粒的UPLC特征图谱,对其相关性进行评价并考察量值传递规律。方法以Agilent ZORBAX SB-C18柱(Rapid Resolution HD 2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长为270 nm,流速为0.30 mL/min,进样体积为3μL,柱温为30℃。结果以橙皮苷为参照,建立了20批陈皮药材、蒸制饮片、标准汤剂冻干粉与配方颗粒的多成分UPLC特征图谱,确定了25个共有特征峰,分别鉴定为多糖类成分(5-羟基麦芽酚、5-羟甲基糠醛),黄酮类成分(橙皮苷、芸香柚皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、维采宁-2、异甜橙黄酮、甜橙黄酮、橘皮素、橙皮素、5-去甲川陈皮素、异黄芩配基甲醚)13种成分。陈皮药材、蒸制饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒UPLC对照指纹图谱之间相似度计算结果均大于0.90。蒸陈皮饮片到标准汤剂冻干粉的转移率为38.4%~63.5%,均值53.8%,在均值的±30%范围,未出现离散,传递性较好。结论建立了陈皮药材、蒸制饮片、标准汤剂与配方颗粒的UPLC特征图谱,确认陈皮药材炮制为蒸陈皮饮片后新增5-羟基麦芽酚、5-羟甲基糠醛,除5-羟基麦芽酚、5-羟甲基糠醛外,陈皮药材、蒸制饮片、标准汤剂与配方颗粒的主要化学成分基本相同;UPLC特征图谱相关性良好,可以准确反映陈皮药材至蒸陈皮配方颗粒的量值传递信息,所建立的质量评价模式能够反映蒸陈皮4种形态多成分的整体面貌,为蒸陈皮配方颗粒质量标准建立及质量控制提供参考。

基于化学计量方法研究不同产地广藿香的质量

[目的]了解广东省阳春市、肇庆市、湛江市等10个不同产地广藿香药材质量差异。[方法]以不同产区10批广藿香药材为材料,按照《中国药典》规定下的检测项进行检测,并用聚类分析法和主成分分析法分析不同产地广藿香药材的差异性。[结果]不同产地广藿香药材显微鉴别和薄层鉴别特征明显,水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、百秋李醇含量均符合药典规定。[结论]10批不同产地广藿香在质量品质方面上均有差异,其中产自广东省阳春市潭水镇和广东省肇庆市四会市的广藿香药材质量最优。

基于化学计量方法研究不同产地三七药材的质量

目的:通过对不同产地三七从显微、薄层、水分、总灰分、浸出物及含量角度进行考察,对三七药材进行质量品质研究,探讨各产地三七药材间的质量差异。方法:依照《中国药典》2020版,对不同产地来源三七药材的水分、总灰分、薄层、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1及三七皂苷R1含量进行测定分析。结果:不同产地所产三七药材性状、显微鉴别和薄层色谱特征明显,水分、总灰分、浸出物及含量均符合药典规定;主成分分析提取2个主成分,累积方差贡献率为70.640%。聚类分析结果显示10批样品可分为4大类。结论:10批不同产地三七在质量品质上有所差异,主成分分析方法、聚类分析法能有效地区分不同产地的三七药材,其中以云南省文山市所产的三七的质量为最优。

栀子药材中重金属污染现状评价研究

目的:评价栀子药材中重金属铅、镉、砷、汞、铜污染现状。方法:对电感耦合等离子体质谱法测定铅、镉、砷、汞、铜的线性范围、检测限、定量限、准确度、重复性等指标进行验证,并采用电感耦合等离子体质谱仪检测市场上20批栀子药材中重金属铅、镉、砷、汞、铜含量。结果:在所选的浓度范围内线性关系良好,R均大于0.995,加标回收率在87.0%~112.8%之间,RSD在5.3%~8.6%之间;重复性RSD为2.1%~5.5%。20批栀子药材中重金属铅、镉、砷、汞、铜均符合药典限量要求。结论:所用测定方法准确可靠,栀子药材中重金属铅、镉、砷、汞、铜控制较好。

紫菀药材中33种禁用农药残留分析

目的:评价紫菀药材中33种禁用农药残留情况。方法:样品用乙腈提取,再经固相萃取柱净化,采用高效液相色谱-串联质谱法和气相色谱-串联质谱法测定33种禁用农药的残留量,外标法定量。结果:线性关系良好,相关系数均大于0.995,加样回收率的范围在70.2%~106.9%。20批的紫菀药材中甲拌磷检出率为100%。结论:所用方法准确、灵敏;紫菀药材生产须关注甲拌磷残留问题。

云南省不同产地青叶胆的质量评价

为比较不同产地青叶胆质量的优劣,以云南省不同产地的10批青叶胆药材为研究对象,对青叶胆中的水分、总灰分、酸不溶性灰分、獐牙菜苦苷含量进行测定。采用主成分分析、系统聚类分析等方法进行质量分析和综合评价。结果表明,10批青叶胆的薄层鉴别均与对照品溶液在相同位置显现出相同的颜色斑点;样品水分含量在8.01%~10.12%,总灰分含量在3.02%~4.32%,酸不溶性灰分含量在0.22%~0.33%,獐牙菜苦苷含量在8.82%~12.32%。10个产地的青叶胆4项指标结果均符合《中华人民共和国药典(2020年版一部)》规定,其中,云南省红河哈尼族彝族自治州弥勒市的青叶胆药材质量最优。

基于主成分分析法和聚类分析法的不同产地合欢皮药材质量评价

为了解不同产地合欢皮药材质量的差异,筛选优质产地合欢皮,以不同产地15批合欢皮药材为材料,按照2020年版《中国药典》规定的检测项进行检测,并用主成分分析法和聚类分析法分析不同产地合欢皮药材的差异性。结果表明,所有检测项均符合2020年版《中国药典》检测要求;(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷含量为0.40%~0.49%,水分含量为4.00%~5.11%,总灰分含量为5.08%~5.75%,浸出物含量为17.15%~18.70%。主成分分析结果表明,湖北省宜昌市HHPYC04的合欢皮药材质量最优;聚类分析结果表明,判定距离为10时,样本被分为四大类。基于主成分分析法与聚类分析法评价不同产区的合欢皮药材质量,能为优质合欢皮药材的产地筛选提供参考。

基于化学计量方法研究不同产地补骨脂质量

考利用主成分分析方法和聚类分析方法来考察不同产地的补骨脂质量是否存在差异,并做出综合评价。方法:参照2020版《中国药典》一部补骨脂药材的检测项目,对10批不同产地的药材进行质量评价,通过对不同产地补骨脂进行性状、鉴别、检查和含量测定完成对补骨脂的质量评价,并用SPSS 25.0统计软件进行主成分分析和聚类分析,综合评价不同产地补骨脂药材的质量。10批次补骨脂药材的性状及显微特征与《中国药典》2020版描述相似,薄层色谱分离度较好;结果:水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物等测定结果均符合药典标准;补骨脂素和异补骨脂素总含量在1.63%~2.03%之间,10批补骨脂药材测定结果均符合药典标准。10批补骨脂药材根据产地可分为4类。结论:10批不同产地补骨脂在质量品质方面上有差异,其中采自云南昆明补骨脂药材质量为最佳,为补骨脂的质量控制提供参考。

电感耦合等离子体质谱法测定不同产地青叶胆药材中重金属含量

采用电感耦合等离子体质谱法同时测定不同产地青叶胆中5种重金属元素的含量,结果表明,不同产地青叶胆药材中镉、砷2种元素有超标现象,铅、砷、镉、汞、铜含量差异较大,5种金属元素的线性相关系数均大于0.999 0,平均加样回收率在95.86%~97.95%。该方法具有操作简单、分析速度快、准确度高的优点,可以用于不同产地青叶胆药材中5种重金属元素的含量测定及其质量评价,为青叶胆质量控制提供了依据。

猴耳环药材中禁用农药残留状况研究

对猴耳环药材中33种禁用农药残留的现况进行研究。以回收率为评价指标,从QuEChERS法和固相萃取法中选择合适的样品前处理方法;采用高效液相色谱-串联质谱法和气相色谱-串联质谱法检测20批猴耳环药材中33种禁用农药的残留量。在2种前处理方法中,QuEChERS法为最佳前处理方法。20批猴耳环药材中仅检出氟虫腈和甲拌磷2种农药,其中氟虫腈有2批检出,其残留量符合《中国药典》规定;甲拌磷有6批检出,其中2批符合《中国药典》规定,4批不符合《中国药典》规定。所用测定方法可靠。猴耳环药材中甲拌磷不合格率达20%,应予以重视。

高效液相色谱法分析土鳖虫药材黄曲霉毒素

将土鳖虫药材经70%甲醇提取,过免疫亲和柱后,采用高效液相色谱(HPLC)-柱后光化学衍生的方法测定土鳖虫药材黄曲霉毒素残留情况。结果表明,该测定方法线性关系良好,相关系数均为0.999,加样回收率在97.2%~104.0%。50批土鳖虫药材中黄曲霉B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)均有检出,检出率为92%。所用方法准确、灵敏,建议相关人员关注土鳖虫药材的黄曲霉毒素残留情况。

不同产地花椒药材的质量评价

为比较不同产地花椒药材的质量,按照《中国药典》2020版方法,对四川、陕西、山东、山西等4个产地共10批花椒药材进行性状、显微鉴别、薄层鉴别、总灰分、挥发油含量等检测,并应用单因素方差分析和总评归一值法综合评价不同产地花椒药材的质量。10批次花椒药材的性状及显微特征符合《中国药典》2020版描述。总灰分的测定结果为6.78%~7.78%,均值为7.55%;挥发油含量测定结果为2.50%~3.61%,平均值为3.01%。分析结果显示产地对花椒药材的质量有显著影响。花椒药材挥发油含量最优省份为四川省,挥发油含量均大于3.00%,且大于其他省份,综合评价四川省产地的花椒药材质量较优。

QuEChERS联合GC-MS/MS法测定金银花中农药的残留量

建立QuEChERS联合气相色谱-串联质谱分析法同时测定金银花中40种农药的残留量。样品用水和乙腈提取,经分散固相萃取净化,采用气相色谱-串联质谱法测定40种农药的残留量,外标法定量。方法检出限为0.0015~0.0043mg·kg^(-1),被测定的40种目标物组分在各线性范围内均具有良好的线性关系,在所添加3个低、中、高水平浓度下,方法回收率在70.85%~112.86%,相对标准偏差在0.39%~12.77%。20批金银花药材中共检出8种农药,且4种为禁用农药,禁用农药中甲拌磷检出率最高,检出率为45%,限用农药毒死蜱和联苯菊酯检出最高,检出率分别为90%和90%。在QuEChERS基础上建立的GC-MS/MS分析方法能够对40种农药残留进行快速,准确的定量分析,金银花药材中需要关注甲拌磷、联苯菊酯、毒死蜱、乐果、杀扑磷、滴滴涕、甲基对硫磷、六六六的检出。

不同产地五指毛桃产品气味物质特征性分析

研究不同产地五指毛桃产品气味物质的差异性,为五指毛桃的种植与加工提供理论依据。采用顶空-气相色谱质谱联用仪测定广东(除河源地区外)、河源、江西、广西4个地区不同来源的20组五指毛桃产品气味成分组成,结合统计软件进行聚类和主成分分析。热图和聚类分析结果表明,河源和广西的五指毛桃产品气味物质含量具有显著性差异,其中河源地区五指毛桃含丁醛、正戊醛、甲酸戊酯较高,广西地区五指毛桃含正庚酸、二戊基呋喃、壬酸较高。主成分分析将9个气味成分简化成正己醛、正庚酸、甲基丁醛3个主成分,河源和广西地区的数据在三维图中分别具有较好的相似度。河源地区五指毛桃产品与其他地区相比,气味上有显著的产地差异性,可作为产地溯源、品质控制的依据。

广金钱草-何首乌间作密度对广金钱草质量和产量的影响

以广金钱草和何首乌为试材,采用多元统计分析方法,研究了广金钱草-何首乌间作密度以及采收期对广金钱草药材质量和产量的影响,以期建立合适的广金钱草-何首乌间作模式,推动广金钱草生态种植的发展。结果表明:在所设置的何首乌种植密度内,广金钱草茎叶比、单株干质量和产量、水溶性浸出物含量均无显著变化;随着何首乌种植密度的降低,广金钱草总黄酮、无机元素的含量呈上升趋势,夏佛塔苷含量呈下降趋势;在相同的何首乌间作密度下,随着广金钱草种植密度的降低,广金钱草的农艺性状、水溶性浸出物、总黄酮和B、Mn、Fe、Zn等9种元素含量呈先增加后减少的趋势,茎叶比、单株干质量和夏佛塔苷及Ca、Ni、Mo、Sn 4种元素的含量呈增加趋势。对广金钱草农艺性状、产量、有效成分和无机元素含量进行综合分析,在何首乌行株距60 cm×40 cm,广金钱草行株距40 cm×50 cm的间作密度下,定植后218 d采收广金钱草,其产量和质量最佳。

电感耦合等离子体质谱法测定板蓝根中重金属元素

[目的]建立板蓝根中重金属元素的快速检测方法。[方法]采用电感耦合等离子体质谱法快速测定不同产地板蓝根中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)的含量,了解河北、河南、安徽等不同产地板蓝根中5种重金属元素的差异,并结合主成分分析法和聚类分析法评价不同产地板蓝根药材质量差异性。[结果]5种重金属元素在各自范围内线性关系良好(R2≥0.999 6),平均加样回收率为97.63%~99.96%,RSD为1.43%~3.83%。30批样品中,86.67%样品Cd含量超标,26.67%样品Cu含量超标,66.67%样品未检出Hg,所采集样品中Hg、Pb、As均未超标。主成分分析提取2个成分,累计贡献率72.577%,Pb和Cd对板蓝根的质量评价有重要贡献。综合评分显示,采自河北安国板蓝根药材质量较好;聚类分析发现,不同产地的检测指标含量有明显差异。[结论]电感耦合等离子体质谱法可快速、准确测定板蓝根药材中5种重金属元素的含量,该方法高效准确,可用于板蓝根药材中重金属元素的质量控制。

不同产地甘草药材质量评价

[目的]了解不同产地甘草药材质量的差异。[方法]以4个产区15批甘草药材为材料,按照药典规定下的检测项进行检测,并用非参数检验、逐步判别分析法、熵权TOPSIS法和R型聚类分析法分析不同产地甘草药材的差异性。[结果]所有检测项均符合药典检测要求;运用逐步判别分析从检测指标中筛选出5个特异性指标,分别为酸不溶灰分、水分、铜、砷、汞;根据筛选的指标建立产地判别模型,甘肃省白银市景泰县、甘肃省兰州市榆中县、内蒙古自治区鄂尔多斯市巴音乌素以及内蒙古自治区鄂尔多斯市杭锦旗巴拉贡的样品可明显分为4类,回判的正确率为100%;以水分、总灰分、酸不溶性灰分、甘草酸、甘草苷为指标,运用熵权TOPSIS法分析不同产地甘草质量差异效果较差,运用R型聚类分析法效果明显。[结论]不同产地甘草药材质量有差异;逐步判别分析法是判别不同产地甘草的有效方法。