根皮苷抑制体外LO2肝细胞脂肪变性作用的实验研究

目的研究根皮苷对体外LO2肝细胞脂肪变性的抑制作用。方法体外培养LO2细胞,实验分正常对照组、模型组、辛伐他汀组和不同剂量的根皮苷组。药物作用24,48,72h后分别检测油红O染色后脂滴吸光度,细胞内甘油三酯(TG)含量和细胞外培养基葡萄糖水平。结果与模型组比较,光镜下各给药组的细胞脂滴均明显减少。在24,48,72h时模型组吸光度均显著高于正常对照组(P<0.01),各给药组吸光度均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01);在24,48,72h时模型组TG水平均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),辛伐他汀组及根皮苷高、中剂量组TG水平均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01);在24h时模型组细胞培养基上清液葡萄糖含量均高于正常对照组(P<0.05),各给药组葡萄糖含量均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论根皮苷对油酸诱导的体外LO2肝细胞脂肪变性和糖代谢异常有显著的抑制作用。

蒙药蓝刺头研究进展

蓝刺头为菊科蓝刺头的干燥花絮。对近几年来蒙药蓝刺头及其地上部分的研究成果进行整理,并从化学成分、提取工艺质量研究、药理作用和复方制剂研究四个方面进行综述,以期为蓝刺头的进一步开发和利用提供科学依据。

牛蒡子总木脂素和淫羊藿总黄酮配伍对2型糖尿病大鼠骨质疏松的保护作用

目的探讨牛蒡子总木脂素、淫羊藿总黄酮及其两种不同比例配伍对2型糖尿病大鼠骨质疏松的保护作用。方法采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠骨质疏松模型,实验分为6组,正常组、模型组、牛蒡子总木脂素组、淫羊藿总黄酮组、牛蒡子总木脂素-淫羊藿总黄酮1.5∶1.0配伍组和1.0∶1.5配伍组(质量比)。正常组和模型组给予生理盐水,其他组分别给予相应剂量的药物,每天灌胃给药1次,连续12周后,麻醉,腹主动脉取血,测血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血钙(Ga)、血磷(P)、骨钙素(BGP)等指标;并取双侧股骨,测定骨干及骨灰重,骨钙及骨磷的含量,以及骨最大载荷、最大能量吸收值、骨结构硬度等骨生物力学指标。结果各给药组均能不同程度地改善2型糖尿病骨质疏松大鼠的血清胰岛素等糖脂代谢指标,提高血钙、血磷和骨钙素水平,增加骨干重、骨灰、骨钙、骨磷等骨矿物质含量;淫羊藿总黄酮组及两配伍组可改善骨生物力学指标(P<0.05或P<0.01)。其中,与单药组相比,配伍组对提高胰岛素、骨钙素、骨钙、骨磷水平,改善骨硬度作用更佳,牛蒡子总木脂素-淫羊藿总黄酮1.0∶1.5配伍组作用尤为显著(P<0.05或P<0.01)。结论牛蒡子总木脂素与淫羊藿总黄酮配伍可明显改善2型糖尿病大鼠骨质疏松,开发牛蒡子总木脂素、淫羊藿总黄酮配伍的中药复方新药,可为糖尿病骨质疏松并发症的防治提供新用药。

三种不同培养方式下牛樟芝的LC/MS-IT-TOF分析与对比

目的:建立高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(LC/MS-IT-TOF)技术对野生、椴木栽培、固体培养的牛樟芝化学成分进行定性分析及对比。方法:3种不同培养方式下的牛樟芝样品以乙醇超声提取,采用LC/MS-IT-TOF技术对3种不同培养方式下牛樟芝的主要化学成分进行定性分析。采用Shim-pack GISS-C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,以0.1%甲酸水-乙腈溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为254 nm,流速0.20 mL/min,柱温30℃。结果:通过查阅文献及高分辨质谱数据的解析,得到3种不同培养方式下的牛樟芝中化学成分22个,对比发现野生牛樟芝质量最佳,椴木栽培次之,固体培养再次之。结论:本研究建立的LC/MS-IT-TOF液质联用技术对牛樟芝的定性分析可为牛樟芝的质量评价提供可靠的方法。

不同多糖配伍对H2O2诱导的皮肤细胞老化的抑制作用

本研究为明确混合多糖配伍使用抑制皮肤细胞衰老的作用是否优于单一多糖,通过利用不同浓度的H2O2诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)、人角质形成细胞(HaCaT)出现损伤老化,在此基础上,采用MTT法和生化试剂盒检测,分别检测细胞的存活率及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)的含量。本实验所建立的HaCaT及HSF细胞过氧化模型的存活率分别约为72.00%和65.00%,研究发现四种单一多糖组对两种细胞老化模型的存活率与模型组相比差异没有统计学意义(p>0.05);其中SOD、MDA、HYP的含量与模型组相比,除个别指标外,差异没有统计学意义(p>0.05)。在HaCaT细胞老化模型中,混合多糖组的存活率在74.93%~80.43%之间,SOD含量在6.99 U/mg^7.56 U/mg之间,MDA含量在7.44μmol/g^8.41μmol/g之间,HYP含量表达在2.30μmol/g^2.43μmol/g之间;在HSF细胞老化模型中,混合多糖组的存活率在76.23%~78.14%之间,SOD含量在6.30 U/mg^8.90 U/mg之间,MDA含量在7.03μmol/g^8.93μmol/g之间,HYP含量在2.19μmol/g^2.53μmol/g之间;以上指标与模型组相比差异均有统计学意义(p<0.01或p<0.05)。因此,混合多糖组的整体改善效果更为显著,它能够提高衰老表皮细胞生存率,提高模型细胞SOD、HYP含量,使MDA含量降低。研究提示我们在对抗H2O2诱导的HSF、HaCaT细胞氧化衰老实验中,在相同干预浓度下,不同多糖配伍后的混合多糖比组分单一多糖单独使用效果显著。

铁皮石斛围小丛壳菌的生物学特性

以近期分离鉴定的铁皮石斛炭疽病原新纪录种铁皮石斛围小丛壳菌(Glomerella cingulata)为试材,采用组织培养的方法系统研究了铁皮石斛围小丛壳菌的生物学特性。以期找到高效快速的防治方法,以解决铁皮石斛炭疽病频繁发生且有日益加重趋势的问题。结果表明:铁皮石斛围小丛壳菌菌丝适应性强,在不同培养基均能生长,在PDA培养基上生长最快;在10~35℃下均可以生长,25~30℃下较适合菌丝体的生长,28℃菌丝生长最快,产子囊壳最多;不同光照条件下生长均较好,但光照可促进子囊壳的产生;在pH 5~12下均可生长,但pH 8时菌丝生长最快,pH 9时子囊壳产量最高;在不同碳氮源上均可生长,山梨醇对菌丝的生长最有利,在麦芽糖碳源上菌丝浓密,子囊壳的产量达到最高;菌丝对蛋白胨氮源的利用率最高。菌丝体的水浴致死条件是50℃。

ITS2序列对牛樟等樟属植物鉴定评估及聚类分析研究

目的:应用ITS2序列及其二级结构对牛樟等樟属植物进行鉴定效率评估及聚类分析研究,以期发现与牛樟亲缘关系较近的物种。方法:比较DNA提取试剂盒和改良CTAB法对牛樟等样品总DNA的提取效果;应用Bio Edit v7.0.9.0与MEGA 6.0软件将以ITS2序列进行PCR扩增的目的序列与Gen Bank中同源性较高的同属序列构建系统进化树,并应用ITS2数据库网站预测其二级结构。结果:改良CTAB法提取的DNA纯度比试剂盒稍低,但浓度较高;针对本研究中16个樟属样品,ITS2对其鉴定成功率为62.5%;基于ITS2序列的种间亲缘关系中最接近牛樟的树种为细毛樟。结论:ITS2序列作为植物鉴定条形码之一,对樟属植物鉴别率略低,可见其通用性有待考证;在对于樟属植物的聚类分析研究中,ITS2序列可结合其二级结构构型,为樟属种间遗传关系和亲缘关系鉴定提供参考。

胶孢炭疽菌粗毒素对铁皮石斛生长的影响

【目的】探究胶孢炭疽菌粗毒素对铁皮石斛幼苗生长状况的影响,为铁皮石斛抗性突变体筛选和培育提供前期基础。【方法】添加不同浓度胶孢炭疽菌粗毒素的MS培养基对铁皮石斛幼苗进行培养,观察粗毒素对幼苗生长的影响,并初步筛选适宜抗性选择压。【结果】胶孢炭疽菌粗毒素浓度在5%~15%(体积分数)范围内,对铁皮石斛株高、茎粗、新增芽数、根数、鲜重的增长起促进作用,其中以浓度为5%(体积分数)时促进作用最为显著;粗毒素浓度在35%~40%(体积分数)范围内对铁皮石斛株高、叶片数、新增芽数、根数、鲜质量的增长起到抑制作用;粗毒素浓度在20%(体积分数)时,铁皮石斛出现开花现象,且花的形态出现变异现象。【结论】胶孢炭疽病菌粗毒素具有生物活性,且有一定的毒性,可以考虑代替病原菌作为离体筛选铁皮石斛抗炭疽病突变体的选择剂,但筛选铁皮石斛抗性突变体的抗性选择压还有待进一步研究。

沉香的醇浸出物和沉香四醇含量测定及品质分类

目的:分析与评价国内外沉香药材的质量,对沉香品质进行分类。方法:按2015年版《中国药典》一部沉香鉴别项下相关要求测定样品醇浸出物的含量;采用HPLC法,Altima C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,流速0.7 mL·min^(-1),检测波长252 nm,柱温30℃,测定样品中的沉香四醇含量;结合醇浸出物和沉香四醇含量结果探讨沉香品质分类。结果:沉香四醇在2.0~750.0μg(r=0.999 6)与其峰曲线下面积呈良好的线性关系,平均回收率为102.1%,RSD 2.8%。52种沉香样品中沉香四醇质量分数在0.10%~6.60%,醇浸出物质量分数为6.07%~57.06%。沉香醇浸出物与结香方式、种源无相关性。沉香四醇含量高低与种源、结香方式有一定的相关性。种源为白木香的人工和天然沉香2种结香方式中沉香四醇平均质量分数分别为0.67%,0.15%,两者比较有显著差异(P<0.01);天然沉香种源为Aquilaria malaccensis与A.crassna,沉香四醇平均质量分数分别为2.57%,0.70%,两者有差异(P<0.05);与白木香(0.15%)有显著差异(P<0.01))。结论:沉香按沉香四醇含量高低进行品质分类具有一定的合理性。

星点设计-效应面法优化牛樟芝总三萜提取工艺及其抗肿瘤活性研究

目的研究牛樟芝总三萜（ACTT）提取工艺及其抗肿瘤活性。方法采用星点设计-效应面法（CCD-RSM）优化ACTT的提取工艺；通过MTT法检测其对人肝癌HepG2细胞体外增殖抑制作用；以最佳质量浓度的ACTT提取物（ACTTE）处理HepG2细胞，应用荧光显微镜进行形态学观察；应用AnnexinV凋亡检测试剂盒进行流式细胞分析，应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果优化的工艺为加20倍量的90％乙醇，超声提取2次，每次40min，超声功率400W，ACTT提取率达11．87％，实际值与预测值的偏差为1．56％；不同质量浓度（12．5-200μg／mL）的ACTTE对HepG2细胞的增殖均有明显的抑制作用（P〈0．01）；直接形态显微观察及Hoechst33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体；流式细胞仪结果显示，给药组细胞凋亡率与空白组相比，有显著差异（P〈0．01）。结论CCD-RSM优化牛樟芝的超声醇提工艺，实际值与预测值吻合度高，预测性良好，是可行的；ACTTE体外对HepG2细胞有明显的增殖抑制及诱导凋亡的作用。

超临界和亚临界提取的沉香精油的气相色谱-质谱联用分析

目的研究比较超临界提取法和亚临界提取法得到沉香精油的差异。方法采用超临界和亚临界提取沉香精油,采用GC-MS分析测定两种精油的成分及相对含量。结果从超临界和亚临界沉香精油中分别鉴定出35和20个成分,其中倍半萜类和2-(2-苯乙基)色酮类化合物相对含量分别为7.39%,0.28%和22.67%,14.53%;超临界和亚临界沉香精油含量较高的5个成分均为γ-谷甾酮,2-(2-苯乙基)色酮,γ-谷甾醇,6-甲氧基-2-苯乙基色酮,6,7-二甲氧基-2-苯乙基色酮。结论不同提取方法的沉香精油主要成分基本相同,但相对含量存在差异,同时超临界提取沉香精油中倍半萜类含量较亚临界精油含量更高,成分更丰富。

蒲葵子总黄酮对肝损伤的保护作用及机制研究

目的研究蒲葵子总黄酮(total flavonoids of Fructus Livistonae,TFFL)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的人正常肝细胞LO2损伤的作用,初步探究TFFL保护肝损伤的作用机制。方法 MTT法考察TFFL对LO2细胞的毒性及对APAP诱导的LO2细胞存活率的影响;流式细胞术和Hoechst 33342染色法考察LO2细胞凋亡率;试剂盒检测LO2细胞中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blotting法检测LO2细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和硝基化酪氨酸微管蛋白(NT)表达水平。结果 TFFL在给定质量浓度下对LO2细胞无毒性,且可促进其增殖。对APAP诱导的LO2细胞损伤,TFFL预防给药能够显著减少细胞凋亡,降低细胞中AST活性和MDA水平,升高SOD活性和GSH水平,抑制细胞中i NOS和NT蛋白的表达。结论 TFFL对APAP诱导的LO2细胞损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激和硝化应激有关。

黄连肉桂药对指纹图谱的聚类分析及多指标的定量分析

目的建立黄连肉桂药对的HPLC指纹图谱,同时快速测定其主要成分表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和桂皮醛的含量。方法采用Kromasil 100-5-C_(18 )(4.6mm×250 mm, 5μm)色谱柱,乙腈(A)-0.01 mol/L磷酸二氢钾(B,用磷酸调节pH值至4.30)为流动相梯度洗脱,检测波长290 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃。结果建立了15批黄连肉桂药对的HPLC指纹图谱,共确定了16个共有峰,同混合对照品比对,指认其中5个指标成分分别为表小檗碱(9号峰)、黄连碱(11号峰)、盐酸巴马汀(13号峰)、盐酸小檗碱(14号峰)和桂皮醛(15号峰),其相似度分析均大于0.910,聚类分析可分为两类。在建立的色谱条件下试验5个成分分离度良好,各成分在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r> 0.999 6),方法精密度和重复性RSD均低于3.0%,供试品溶液在48 h内稳定,平均回收率和RSD分别在95.24%～102.73%和0.20%～2.49%。15批黄连肉桂药对中表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和桂皮醛含量范围分别为1.87～2.96、3.52～5.40、3.80～5.79、6.08～8.04和0.55～5.59 mg/g。结论所建立的黄连肉桂药对HPLC指纹图谱和定量分析方法,能快速、准确地对黄连肉桂药对进行质量评价。

石斛内生炭角菌DNA提取方法优化及分子鉴定

本文对石斛内生炭角菌DNA提取方法进行优化,并基于ITS序列及其ITS2二级结构对其进行分子鉴定。比较试剂盒法及不同浓度(2%、3%、4%)CTAB法的DNA提取效果并对CTAB法进行优化;进行ITS序列的扩增及ITS2二级结构的预测。结果表明:4%的CTAB提取效果最佳,优化的CTAB法大大缩短了DNA提取时间;ITS序列与炭角菌属3个种的相似度均为99%,ITS2二级结构仅与Xylaria arbuscula的二级结构100%相似。本研究所优化的CTAB法能为后续相关研究提供便利;结合ITS序列及ITS2二级结构能对石斛内生炭角菌进行准确的分子鉴定。

基于ycf1的姜科植物条形码鉴定及聚类分析

目的:利用DNA条形码技术分析比较姜科植物的ycf1序列,对姜科药用植物进行条形码鉴定及聚类分析,评价ycf1序列对姜科植物的鉴别能力。方法:用ycf1通用引物对姜科6个属16种药用植物进行PCR扩增和测序,用Bio Edit v7.0.9.0及MEGA 6.0对目的序列进行比对分析,以美人蕉为外类群构建系统进化树。结果:姜科ycf1序列长度约为900bp,17条目的序列差异位点150个,除山姜属4个种的种间遗传距离为0无法鉴别以外,其余5个属种间均存在序列差异;构建的系统进化树显示,ycf1序列能明显区分姜科6个属的植物。结论:ycf1序列可对姜科植物进行可靠的遗传聚类分析,且可对本研究中除山姜属4个近源种以外的姜科植物进行鉴定。

植物激素及木质素对牛樟芝菌丝体生长情况的影响

目的探究植物激素及木质素对牛樟芝菌丝体生长情况的影响,并对其培养产物进行粗多糖、粗三萜含量及抗氧化活性测定研究。方法采用皿式培养法培育牛樟芝,超声提取培养产物,选用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量、香草醛-冰醋酸法测定粗三萜含量,并以DPPH自由基、ABTS自由基的半数清除浓度(IC_(50))作为培养产物抗氧化活性的评价指标。结果菌种活化方法为培养20 d后靠近菌丝层边缘取样,可获得生长活力好的接种原料;改良PCA培养基上牛樟芝菌丝长势较好、粗三萜及粗多糖含量高;以改良PCA培养基为基础,向其中添加0.5g/L木质素时菌丝生长最快,菌丝层直径为对照组的1.19倍;当IBA添加质量浓度为0.5 mg/L时,菌丝体干质量较对照组增加了89.51%,粗多糖产量较对照组提升了130.57%,远高于其他组别,与此同时,菌丝体粗三萜含量及产量也显著提升,其含量较对照组提高了61.31%,粗三萜产量达到133.24mg/L;添加牛樟树粉末0.5 g/L时,菌丝体粗三萜含量最高,为5.62%,较对照组提升了84.26%;此外,向培养基中加入植物激素及木质素对牛樟芝菌丝体的抗氧化能力提升有一定作用,整体来说加入不同物质后实验组抗氧化活性良好。结论通过向改良PCA培养基中添加植物激素及木质素,可有效促进牛樟芝菌丝体生长、提高活性成分含量并提升其抗氧化活性。

基于GC-MS代谢组学的铁皮石斛与胶孢炭疽菌互作机制研究

目的利用代谢组学技术探讨与铁皮石斛炭疽病病程相关的代谢物及其可能的作用机制,为铁皮石斛抗病品种选育提供依据。方法分别采集铁皮石斛正常叶片与经胶孢炭疽菌处理的感病叶片,经样本前处理、GC-MS分析、生物信息学分析等找出差异代谢物,初步探讨参与病程的差异代谢物并分析代谢通路。结果成功建立了各分析组的多维统计分析模型,选取VIP>1.0的分散点为潜在差异物质,同时结合单维统计分析(test)中P<0.05为标准加以验证,从鉴定出的305个代谢物中共筛选出84个差异代谢产物,被认为是病程相关代谢物;通过对差异代谢物进行通路富集分析,共有34个差异代谢物参与了代谢途径,且获得的正常-感病代谢通路具有显著意义。结论基于GC-MS技术对铁皮石斛不同处理组(正常/感病)样本进行了代谢组学分析,并找出与铁皮石斛炭疽病病程相关的代谢物,可为从分子水平研究铁皮石斛病害及培育抗病品种奠定基础。