2171例地中海贫血产前基因诊断回顾性分析

目的:对广东省妇女儿童医院产前诊断中心1 506例α地中海贫血和665例β地中海贫血产前基因诊断进行回顾性分析。方法:对α地中海贫血产前基因诊断采取裂隙聚合酶链反应(gap-PCR)以及PCR结合反向点杂交(RDB)方法,β地中海贫血产前基因诊断采取PCR结合RDB方法,若夫妇一方携带少见突变则加用DNA测序方法。结果:1 506例α地中海贫血产前基因诊断病例中共检测出262例水肿胎,72例血红蛋白H病。665例β地中海贫血产前基因诊断病例中共检测出174例重型β地中海贫血。结论:地中海贫血产前基因诊断有效减少了水肿胎和重型β地贫患儿的出生,对于优生优育、减少围生期并发症具有重要意义。

1332例已婚育龄妇女致畸病毒免疫状况研究

目的：了解未经接种致畸病毒（TORCH）疫苗的育龄妇女其免疫球蛋白TORCH—IgG水平。方法：应用酶联免疫法对1332例19—44岁无TORCH疫苗接种史及在广东地区居住5年以上的孕前妇女血清风疹病毒（RUV）IgG、巨细胞病毒（CMV）IgG、弓形虫（TOX）IgG、单纯疱疹Ⅱ病毒（HSVⅡ）IgG及B19微小病毒（B19）IgG检测，并按年龄分组统计阳性率。结果：总体风疹病毒IgG阳性率86．6％、巨细胞病毒IgG阳性率93．2％、弓形虫IgG阳性率25．5％、单纯疱疹Ⅱ病毒IgG阳性率85．3％及B19微小病毒IgG阳性率38．1％，各指标阳性率似随年龄增加而升高，但各年龄组间无显著差异。结论：TORCH—IgG阳性（未经接种疫苗）代表本地的自然感染过程，育龄妇女各年龄组TORCH—IgG阳性率无显著差异，即任一年龄妊娠，其孕期感染TORCH几率及其胎儿获得宫内垂直感染几率相同。

G显带联合Array-CGH技术在产前超声异常胎儿诊断中的应用研究

目的探讨孕中晚期超声异常的胎儿与染色体异常的关系以及微阵列比较基因组杂交技术（ array comparative genome hybridization, array-CGH）在产前诊断中的应用价值。方法收集因各种原因错过孕早期诊断、并在中晚期妊娠发现超声异常并怀疑染色体异常的高风险胎儿122例，同时采用常规核型分析和array—CGH对胎儿进行脐血染色体分析。结果孕妇平均年龄为31岁（22～38岁），其中年龄≥35岁的孕妇17人，诊断时平均孕龄为27“周（18-37周），最常见的B超异常为心脏、中枢神经系统和骨骼方面。B超显示多发畸形的胎儿有49例，单一畸形的胎儿有73例。两种方法联合检测成功率为100％。共检出染色体异常核型24例，异常率为19．7％。其中两种技术均检测到的16例（占13．1％）。核型分析共检出异常17例，其中有3例array-CGH检测到额外的基因拷贝数变异。多态性变异4例。array-CGH分析共检出异常23例，核型分析提示正常、但array-CGH检测到异常有7例。核型分析提示异常染色体低比例嵌合、但array-CGH显示正常有1例。结论胎儿多发畸形与染色体异常明显相关。对于产前超声异常的胎儿，array-CGH技术能在分子细胞遗传的水平上提高染色体病检测的敏感性。

微滴式数字PCR技术用于检测产前诊断标本母体细胞污染的初步研究

目的 探讨微滴式数字PCR（DD-PCR）技术检测产前诊断标本母体细胞污染的临床应用价值.方法 2015年10月至2016年12月间以40例因夫妇双方均为地中海贫血基因βIVS-Ⅱ-654/βN杂合携带者、在广州医科大学附属广东省妇女儿童医院行侵入性产前诊断的孕妇作为观察样本.通过设计特异性引物、探针,建立母体细胞污染程度梯度50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.5625%模型,采用DD-PCR技术及短串联重复序列的荧光定量PCR技术检测产前诊断标本母体细胞污染,分别评估两种检测方法的敏感性;并分别检测40组产前诊断标本,以比较DD-PCR技术与荧光定量PCR技术检测母体细胞污染的准确性.结果 DD-PCR技术可以检测到产前诊断标本中低至1.5625%的母体细胞污染,检测结果与母体细胞污染程度梯度改变基本相符,而荧光定量PCR技术只能在母体细胞污染≥6.25%时才提示产前诊断标本存在400 bp的母源性特有峰.DD-PCR技术共检测到6例（15%,6/40）产前诊断标本存在母体细胞污染,荧光定量PCR技术只检测到3例母体细胞污染的产前诊断标本（7.5%,3/40）,两种检测方法比较,DD-PCR技术的准确性更高（P=0.002）.结论 DD-PCR技术可对产前诊断标本进行母体细胞污染精确定量,并具有较高的敏感性,具有良好的临床应用价值.

荧光原位杂交技术在胎儿染色体异常产前诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术在检测胎儿染色体异常的临床应用。方法选用13、21、18、X、Y特异性探针对1128例孕16～22周有产前诊断指征的妊娠妇女羊水间期细胞进行分析,并与同时进行的羊水细胞培养核型分析结果进行对照。结果被检1128例羊水间期细胞FISH检测均成功,其中检出正常核型1081例,数目异常核型20例,与常规细胞染色体核型分析结果一致,另外27例结构异常FISH技术未能检出。结论 FISH技术检测胎儿染色体数目异常具有快速、简便、准确性高、特异性强等优点,有较大的临床应用价值,并对产前细胞遗传学诊断有重要意义。

RT-PCR技术在产前诊断HCMV宫内活动性感染的研究

目的探讨逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术用于产前诊断人巨细胞病毒(HCMV)宫内活动性感染的临床价值。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、RT-PCR及血浆套式聚合酶链反应(N-PCR)法,检测311例孕妇外周血HCMV mRNA、HCMV IgM及HCMV DNA,其中任意2项阳性为HCMV活动性感染(119例,观察组)、任意2项均阴性为非活动性感染(192例,对照组)。应用RT-PCR和N-PCR技术,检测两组孕妇从宫内采集的孕早期绒毛共108例、孕中期脐血和羊水共203例,并追踪胎儿生长发育及出生后情况。结果 (1)观察组绒毛、脐血HCMV感染率分别为55%(22/40)、48.1%(38/79);对照组分别为10.3%(7/68)、11.3%(14/124),两组比较,差异有极显著性(P<0.001)。观察组绒毛、脐血HCMV活动性感染率分别为32.5%(13/40)和30.4%(24/79);显著高于对照组的5.8%(4/68)和6.45%(8/124),两组比较,差异有极显著性(P<0.001)。(2)HCMV DNA阳性胎儿中,HCMVmRNA阳性胎儿的流(早)产率为42.9%(21/49),显著高于HCMV mRNA阴性胎儿的12.5%(4/32)。HCMV活动性感染胎儿中,有12例因胎儿生长发育异常而行终止妊娠术。结论应用RT-PCR技术产前诊断HCMV宫内活动性感染安全可靠,对于活动性感染孕妇的胎儿取舍具有临床指导价值。

微阵列比较基因组杂交技术在检测智力发育迟缓和先天性多发畸形患儿中的研究进展

基因组拷贝数目变异（copy number variations,CNVs）是一种大小介于lkb～3Mb的DNA片段的变异,在人类基因组中广泛分布.近年来的研究表明,基因组拷贝数目变异与染色体微缺失和微重复综合征密切相关,而染色体微缺失、微重复综合征是导致智力障碍和多发畸形的重要因素,在围产儿和新生儿中发病率较高.虽然传统的细胞核型分析技术已经广泛应用于染色体异常的诊断,但其具有分辨率低、细胞培养的周期长等的局限性.微阵列比较基因组杂交（array comparative genomic hybridization,aCGH）技术是在CGH技术基础上发展起来的新的染色体病诊断技术,分辨率能够达到0.05 Mb,可以检测到一些核型分析检测不到的染色体的微小缺失或重复,是研究整个基因组缺失或重复的非常有应用前途的分子细胞遗传学技术.本综述主要阐述微阵列比较基因组杂交技术在研究智力发育异常和多发性畸形患儿中的应用进展.