5种猪源消化道传播病原体荧光定量PCR检测方法的建立

猪源人兽共患病不仅威胁公共卫生安全,还威胁生猪养殖业的健康发展;其中消化道传播是其主要的传播途径。为及时鉴定出经消化道传播的病原体,本试验建立了猪源大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌和志贺菌的四重荧光定量PCR和戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法,并优化反应体系和条件,实现5种病原体的同时检测;并利用荧光定量PCR与普通PCR对117份猪临床样品(病变组织、粪便和肌肉等)进行对比检测。结果显示,建立的荧光定量PCR能够在1.5 h内完成对大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒5种病原体的特异性检测,与其他常见细菌和病毒无交叉反应,检测极限值可达5个拷贝,标准曲线相关系数均不低于0.997,线性范围涵盖1×10^(1)~1×10^(9),批内和批间变异系数(CV)均低于3.16%。建立的荧光定量PCR与普通PCR方法检测结果的符合率达到95.73%~100%,具有较好的一致性。117份临床样品中大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒各自的阳性率分别为31.62%、17.95%、6.84%、5.13%和11.11%。结果表明,本试验所建立的荧光定量PCR方法灵敏、特异、稳定,能够同时、快速区分检测上述5种猪源消化道传播病原体,可为猪肉制品从产地到餐桌全环节样品的监测提供有力的技术支持。

哺乳期母猪猪瘟抗体变化及仔猪母源抗体水平和免疫效果研究

为了解母猪哺乳期猪瘟抗体变化和母源抗体水平对仔猪免疫效果影响,采用ELISA方法分别对40头母猪哺乳前后猪瘟抗体水平和13窝仔猪28日龄母源抗体水平进行检测,同时选择6窝仔猪跟踪检测了首免和二免后猪瘟抗体变化.结果显示:一个哺乳期母猪猪瘟抗体呈现不同程度下降,但抗体阻断率高于70%的母猪降幅度要小于阻断率低于70%的母猪;仔猪28日龄的母源抗体水平和母猪分娩当天抗体水平呈正相关;当仔猪母源抗体阻断率高于60%时,严重影响猪瘟疫苗免疫效果.研究结果表明,母猪群猪瘟抗体水平对商品猪群免疫效果影响明显,高效价和低离散度的母猪群抗体是商品猪群制定合理免疫程序和确保免疫效果的基础.