识别肝癌抗原的TCRVβ7亚家族克隆转基因后的生物学作用

目的 :研究将TCRVβ7基因转化到淋巴细胞后对肝癌细胞的生物学作用。 方法 :用RT PCR的方法扩增出TCRVβ7基因 ,克隆到表达载体pLXSN上 ,用脂质体转染的方法 ,将重组载体导入淋巴细胞 ,然后将淋巴细胞作用于肝癌细胞 ,淋巴细胞用流式细胞仪测表型 ,肝癌细胞作超微结构分析。结果 :具有TCRVβ7基因表达的淋巴细胞显著增多 ,肝癌细胞出现凋亡。结论

T细胞免疫调节膜分子表达与抗肝癌作用的研究

目的 :研究McAb共刺激PBLs前后的表型变化及与肝癌细胞凋亡的相关性。方法 :采用流式细胞仪分析PBLs被刺激前后的表型 ,用电镜超微结构和DNA梯子电泳观察肝癌细胞凋亡。结果 :CD3、CD4分子表达高于刺激前约 10 % ,肝癌细胞出现凋亡 ,细胞核固缩、边聚、裂解。同时也出现典型的DNA梯子。而肝癌患者用共刺激PBLs后 ,CD3和CD8增高 (P <0 .0 5 )。结论 :共刺激使共刺激信号分子增加 ,抗原呈递能力增强 ,也使细胞因子分泌增加 ,这些因素促使肝癌细胞凋亡 ,而肿瘤患者T细胞增加时向CD8+ 分化 。

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因１～２０亚家族表达水平与特征，健康人ＰＢＬｓ分别加入ＩＬ２、ＰＨＡ、抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８、ＣＤ２８＋ＣＤ８０、ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约为５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约为１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高，这提示在癌抗原的参与下ＭｃＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用，这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。

抗CD28+B7.1单抗共刺激T细胞诱导肝癌细胞凋亡的第二信使系统研究

目的 :探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法 :用CD2 8+B7 1(CD80 )单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞 (BLE 740 2 )凋亡 ,测定不同诱导时间T细胞内cAMP、cGMP和Ca2 + 的浓度改变及肝癌细胞凋亡情况。结果 :活化的T淋巴细胞中 ,cAMP浓度在初期短暂升高 ,继而快速下降 ,作用于肝癌细胞后逐步回升至 1～ 2倍 ,而细胞内cGMP的浓度急剧升高 6～ 7倍 ,Ca2 + 浓度也显著增加 2～ 3倍 ,且均在第 4天达最高值 ,与癌细胞的凋亡呈正相关。结论 :T淋巴细胞内第二信使系统cAMP、cGMP和Ca2 + 的水平与细胞的活化增殖、杀伤效应密切相关。

抗CD3或B7.1与CD28共刺激PBLs膜表面分子表达与肝癌细胞凋亡的相关性

共刺激信号是激发有效的细胞免疫应答所必需的.B7分子家族及CD28/CTLA-4等刺激分子在共刺激信号的传递过程中起着重要的作用.T细胞表面CD28与APC细胞表面B7分子结合似乎提供了T细胞激活所需的主要共刺激信号.T细胞表面有多种膜表面分子,这是T细胞识别抗原,与其它免疫细胞相互作用,接受信号刺激等的物质基础,也是鉴别和分离T细胞和T细胞亚群的重要依据.由于共刺激信号的产生和传导,介导靶细胞凋亡可人为调节免疫应答使之增强或抑制.本研究将分析McAb诱导PBLs细胞膜分子表达及肝癌细胞凋亡的相关性.这可能为肿瘤免疫治疗提供新的线索.1 材料与方法1.1 淋巴细胞的分离培养正常人外周血(PBLs)100ml(广州血液中心)。

共刺激信号在抗肝脏肿瘤免疫中作用的研究

目的 :研究共刺激信号在抗肝脏肿瘤免疫中作用。方法 :分析经anti CD3McAb和anti CD2 8McAb协同共刺激 ,并与肝脏肿瘤细胞 (HepG2 -2 2 15细胞株 )共同孵育的人外周血淋巴细胞 (PBLs)。结果 :发现其TCRVβ基因表达呈限制性 ,初步筛选出识别肝脏肿瘤抗原的TCRVβ基因亚家族。结论 :有针对性地在体外大量扩增表达Vβ3、Vβ14的T细胞并回输给该肝脏肿瘤患者 。

McAb共刺激PBLs膜表面分子表达与肝癌细胞凋亡的相关性

目的 :研究McAb共刺激PBLs前后的表型变化及与肝癌细胞凋亡的相关性。方法 :采用流式细胞仪分析PBLs被刺激前后的表型 ,用电镜超微结构和DNA梯子电泳观察肝癌细胞凋亡。结果 :CD3、CD4分子表达高于刺激前约 10 % ,肝癌细胞出现凋亡 ,细胞核固缩、边聚、裂解。同时也出现典型的DNA梯子。而肝癌患者用共刺激PBLs后 ,CD3和CD8增高 (P <0 0 5 )。结论 :共刺激使共刺激信号分子增加 ,抗原呈递能力增强 ,也使细胞因子分泌增加 ,这些因素促使肝癌细胞凋亡 ,而肿瘤患者T细胞增加时向CD8+ 分化 ,结果提示膜分子的表达与凋亡密切相关。

外源基因导入蚕体的研究进展

家蚕(Bombyx mori.L.)是以中国为发祥地(田村俊树,1994;吕鸿声,1992)向世界传播的昆虫。长期以来家蚕既是一种重要的经济昆虫,又是生物科学研究的模式昆虫之一。随着分子生物学与基因工程的发展,生物技术开始渗透到各个学科,蚕业科学这一领域也不例外。

McAb共刺激PBLs淋巴细胞在培养体系中的状态及超微结构的研究

通过用抗CD3,CD2 8+CD80McAb激活健康人的PBLs,并以PHA ,IL 2 ,PBLs为对照组 ;对各组不同时间段的淋巴细胞超微结构进行观察。结果提示 :CD3及CD2 8+CD80除刺激淋巴细胞增殖外 ,也能使淋巴细胞活化 ;细胞表现为胞体增大 ,细胞器增多 ,具有粗大的绒毛和突出伪足 ,并可见单核细胞吞噬活跃。

TCRVβ基因亚家族的优势取用和PTK信号传导途径的激活及体外对肝癌细胞凋亡的诱导

目的 :研究特异识别肝癌细胞株肿瘤相关抗原的TCRVβ基因亚家族的优势取用及对肝癌细胞凋亡的诱导。 方法 :流式细胞术检测淋巴细胞表型 ,RT PCR和Southern印迹分析TCRVβ基因亚家族表达水平 ,Westernblot检测PTK含量。透射电镜观察凋亡细胞超微结构。结果 :McAb共刺激T细胞与肝癌细胞混合培养后 ,T细胞表面CD3和CD8分子表达量明显升高 ,而CD4无明显变化。TCRVβ7选择性扩增 ,表达水平由 5 %升高至 13 %～ 2 5 % ,且在第 4天达到高峰。同时相应的PTK信号传导途径被激活 ,其含量由 11%升至 5 8% ,亦在第 4,5天达到高峰。以抗CD3+CD2 8,抗CD2 8+CD80 ,抗CD2 +CD5 8共刺激的淋巴细胞均在体外诱导了肝癌细胞的凋亡。结论 :TCRVβ7为特异的肿瘤抗原识别受体 ,TCR CD4复合物与抗原结合后激活PTK信号传导途径 。

McAb共刺激PBLs介导肝癌细胞凋亡

用ＭｃＡｂ，抗ＣＤ３，ＣＤ３＋ＣＤ２８和ＣＤ２８＋ＣＤ８０激活健康人ＰＢＬｓ，作用于肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２），透射电镜观察其超微结构，发现除抗ＣＤ３可引起部分淋巴细胞诱导性凋亡外，其他组都可介导肝癌细胞凋亡。结果提示ＭｃＡｂ共刺激能促进肿瘤免疫治疗的研究。

HBsAg HBeAg作用PBLs对TCR Vβ基因表达的影响

目的探讨乙肝病毒（ＨＢＶ）与肝癌的相关性．方法取用乙肝疫苗注射３次前后外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）；ＨＢＶＤＮＡ转染的ＨｅｐＧ２２２１５株培养上清（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ阳性）感染健康人ＰＢＬ后进行ＴＣＲＶβ基因１－２０亚家族表达水平的分析．结果乙肝疫苗注射后及ＨｅｐＧ２２２１５株培养上清感染健康人ＰＢＬ后ＴＣＲＶβ６，１４；Ｖβ６，１５特异性扩增而表达水平显著增高．结论Ｖβ６可能为识别ＨＢＶ抗原或引发免疫应答的基因片段，但Ｖβ１４，１５各自在限制和杀伤功能方面起着重要的作用。

CD28与B7.1共刺激PBLs受肝癌细胞诱导后的TCR Vβ基因表达

目的研究T细胞受体(TCR)Vβ在外周血淋巴细胞(PBLs)中的表达。方法用单克隆抗体CD28+B7.1(CD80)共刺激正常人外周血淋巴细胞后作用于肝癌细胞(BEL-7402)。结果发现PBLsTCRVβ7基因在体外选择性扩增,表达水平为15%～25%,对照组为4%～8%。结论Vβ7基因对识别肿瘤抗原具有特异性,为肿瘤基因治疗和研究提供新的线索和实验依据。

IL－6与TGF_βmRNA不同时间表达水平的关系

本文主要报道单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）刺激Ｕ９３７细胞系（单核—巨噬细胞系），分析ＩＬ－６与ＴＧＦβｍＲＮＡ在不同时间表达水平的变化，结果显示ＩＬ－６８ｈｒ表达量升高，１２ｈｒ降低，２４ｈｒ又开始上升，ＴＧＦβ１２ｈｒ升高，２４ｈｒ下降，这提示ＩＬ－６与ＴＧＦβ具有较强的生物调节活性及其拮抗关系。

抗CD28+B7.1单抗共刺激PBLs诱导肝癌细胞凋亡的蛋白激酶信号转导

目的研究 T淋巴细胞活化、增殖、介导肝癌细胞凋亡过程中其蛋白激酶 C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶 (TPK)的活性变化。方法用抗 CD2 8+ B7.1(CD80 )单克隆抗体共刺激正常人外周血淋巴细胞 (PBL s)后作用于肝癌细胞 (BEL -740 2 )。结果激活的 T细胞中 PKC、TPK活性明显增强 ,并与肝癌细胞凋亡程度呈正相关。结论 PKC、TPK在 T细胞活化。

共刺激PBLs作用肝癌细胞TCR Vβ基因表达与PTK活性

目的探讨在Ｔ细胞活化信号传递中特异性识别和杀伤肝癌抗原的Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ基因亚家族的表达特征，及与蛋白质酪氨酸激酶（ＰＴＫ）活性的关系．方法用单克隆抗体ＣＤ２８＋Ｂ７１（ＣＤ８０）共刺激正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）后作用于肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２），用ＲＴＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因表达特征及ＰＴＫ含量．结果ＴＣＲＶβ７基因在体外选择性扩增，ｄ４表达水平最高，为２４％，对照组为６％，相应地ＰＴＫ的含量也较高，为５８％，对照组为１１％．结论Ｖβ７基因特异性识别肝癌抗原。

SLE患者TCR V_β基因亚家族的表达特征及其克隆性

目的：探讨ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞中ＴＣＲＶβ基因亚家族的表达及其克隆性。方法：采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析ＴＣＲＶβ１～２０ 基因亚家族的表达水平，进而用ＲＴＰＣＲ扩增ＴＣＲＶβ２４ 个亚家族的ＣＤＲ３ ，并经基因扫描分析确定Ｔ细胞的克隆性。结果：６ 例ＳＬＥ患者Ｖβ８ 和Ｖβ１６ 的表达明显增高，２ 例患者的Ｖβ２ 和Ｖβ９ 产物来源于寡克隆Ｔ细胞。结论：在自身抗原刺激下，ＴＣＲＶβ基因存在着优势取用；Ｔ细胞的克隆性增殖则可能是由特定的自身抗原所引起的应答。

McAb共刺激PBLs细胞超微结构的变化和作用肝癌细胞时间的选择

目的 根据ＭｃＡｂ共刺激 ＰＢＬｓ在不同抗体和不同时间里淋巴细胞的形态变化，找出免疫治疗的最佳时间。方法 用ＭｃＡｂ抗ＣＤ３，ＣＤ２８＋ＣＤ８０激活健康人的ＰＢＬｓ，对各组不同时间段的淋巴细胞超微结构进行观察，并将淋巴细胞作用于肝癌细胞后ＢＥＬ－７４０２，结果 ＣＤ３及 ＣＤ２８＋ＣＤ８０除刺激淋巴细胞增殖外，也能使淋巴细胞活化，细胞表现为胞体增大，细胞器增多，具有粗大的绒毛和突出伪足，并可见单核细胞吞噬活跃；ＣＤ２８＋ＣＤ８０ ＭｃＡｂ组ＰＢＬｓ ７２ｈ后作用 ＢＥＬ－７４０２肝癌细胞出现典型的凋亡现象。结论 本研究对肿瘤的Ｔ细胞治疗有重要意义，为肿瘤生物治疗用药时机提供依据。

TCR Vβ基因表达水平用于疾病临床发生阶段评价

ＴＣＲＶβ基因表达水平用于疾病临床发生阶段评价肖兰凤１罗利琼１黄树林１ＴＣＲ的主要功能是识别和结合ＭＨＣ抗原和外来抗原复合物，在Ｔ细胞成熟过程中，ＴＣＲ／ＣＤ３复合体中任何一个亚单位缺陷，都可能导致细胞功能低下，甚至引起临床症状。本文通过研究患者不同...

抗原诱导T细胞受体(TCR)Vβ基因表达特征(之三)McAb共刺激PBLs在肿瘤免疫治疗中的应用

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，本研究采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ...