药学专业的人体解剖学教学改革的探索与实践

为适应药学专业特色,对我校药学专业本科人体解剖学的教学进行改革。对教学内容进行整合和精选,丰富理论教学手段,采用以互动式教学和人体科学教育中心开放相结合的实验教学组织形式,提高了学生的学习积极性,取得了较好的教学效果。

浅议人体解剖学实验教学与学生的能力培养

本文旨在改进传统性人体解剖学的实验教学,提倡课堂应以学生为主体的教学原则,强调学生学习的主动性、积极性,变"被动型学习"为"主动型学习",从而获得较好的教学和学习的双重效果。

与人体解剖学相融合的医学人文教育实践与体会

人文教育是当今医学生全面发展不可或缺的内容。而传统的基础医学教育多重视学生专业知识的掌握,忽视学生的人文素质教育。若能在解剖教学中融入人文教育,也许能使学生学会从社会和道德等角度去看待医学,有利于提高教学效果,提升医学生综合素质。

基于临床需要的局部解剖学教学实践与思考

局部解剖学教学和临床应用相结合,对提高局部解剖学教学质量有重要意义。本文探讨如何结合临床实际对教学内容,教学方法和考核模式等方面加以优化,使局部解剖学真正成为基础医学和临床医学的桥梁学科。实践证明,将临床应用融入到教学实践中,可使学生更好的掌握局部解剖学知识,为后续的临床课程学习打下坚实基础。

“拆分-组合”法在解剖实验教学中的应用研究

"拆分-组合"教学法将每次实验课的内容拆分成几个任务,分别由各学习小组的成员完成,然后各成员将自己负责任务的信息知识传授给小组的其他成员,以组合成完整的实验内容。这种方法(模式)将主动学习的理念引入教学过程,与传统教学法相比,它能够提高教学效率,简单易行,更能在学习知识的同时,培养学生的团队协作精神、责任意识和表达能力。

石菖蒲不同药效部位改善阿尔茨海默病模型小鼠的认知功能

目的:探讨石菖蒲不同药效部位改善阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型小鼠认知功能的机制。方法:雄性NIH小鼠,采用双侧海马CA1内注射淀粉样β蛋白(Aβ1-42,2 g/L,每侧2μL)制备AD小鼠动物模型,并以生理盐水模拟注射和不注射的正常组小鼠为对照。通过水迷宫测试,筛选出与两对照组均有显著差异的认知障碍小鼠,留作AD动物模型。AD动物模型又随机分为生理盐水灌胃组、石菖蒲水煎液灌胃组、石菖蒲去油水煎液灌胃组和石菖蒲挥发油灌胃组。每组6只,共4组。以生理盐水灌胃组为对照,石菖蒲不同药效部位灌胃组每天对应灌胃1次(0.2 g石菖蒲/10 g体重),连续3周。灌胃结束,Morris水迷宫检测小鼠的空间学习记忆能力,测定小鼠大脑和海马中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性,免疫组织化学方法检测脑中NOS的表达。结果:水迷宫测试结果表明,石菖蒲不同药效部位(水煎液和挥发油)灌胃2组模型小鼠与生理盐水灌胃组小鼠相比,60 s内跨越平台的次数和在目标象限的探索时间均明显增加(P<0.05);大脑和海马内NOS活性检测显示,石菖蒲不同药效部位灌胃3组AD模型小鼠和其对照组相比,大脑和海马内NOS活性下降,NOS阳性神经元数量明显减少(P<0.05)。结论:石菖蒲不同药效部位能显著改善Aβ1-42致AD模型小鼠的学习记忆能力,其疗效可能与降低大脑和海马中的NOS活性有关。

石菖蒲不同提取部位对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的影响

目的:探讨石菖蒲不同提取部位灌服对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的学习记忆能力和Aβ沉积的影响。方法:雄性NIH小鼠分为AD模型组、生理盐水模型组和正常对照组。AD模型组又分为生理盐水灌胃组、水提液灌胃组、去油水煎液灌胃组和挥发油灌胃组。共6组,每组6只。AD模型组小鼠双侧海马CA1区内注射Aβ1-42(2μg/μl,2μl/侧)。模型制备后,进行第1次水迷宫测试,检测并比较各组小鼠的学习记忆能力。然后,每天1次的石菖蒲不同提取部位分别进行灌胃(0.2 g石菖蒲/10 g体重),连续3周,以生理盐水灌胃组为对照。灌胃结束后,进行第2次水迷宫测试,免疫组织化学检测Aβ在小鼠海马的沉积情况。结果:第1次水迷宫检测显示,与生理盐水模型组和正常对照组模型小鼠比较,AD模型组逃避潜伏期明显延长,差异具有显著性(P<0.05)。第2次水迷宫检测表明,与生理盐水灌胃组相比,石菖蒲灌胃三组模型小鼠其逃避潜伏期均明显缩短(P<0.05)。其中挥发油灌胃组逃避潜伏期最短,但与其它两组相比差异无显著性(P>0.05)。免疫组化染色结果显示,AD模型小鼠灌服后Aβ沉积明显减少(P<0.01)。但石菖蒲不同部位灌服组与生理盐水灌服组Aβ沉积相比,差异无显著性(P>0.05);石菖蒲三组之间比较,差异也无显著性(P>0.05)。结论:石菖蒲水溶性部位与挥发油部位一样含有改善学习记忆功能的药效成分,应引起研究者的重视;但这种改善功效是否与减少Aβ沉积有关,尚待进一步研究。

β-淀粉样蛋白的代谢机制

β-淀粉样蛋白（amyloid-β,Aβ）是由淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,APP）经β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有39-43个氨基酸的多肽（4.5 kD）,它是构成阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）患者脑内的特征性沉积物,老年斑（senile plaques,SP）的核心成分。

Aβ和tau蛋白从独立学说到联合学说-老年性痴呆的研究进展

阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease，AD），又称为老年性痴呆，是一种最为常见的中枢神经系统退行性疾病，其主要病理特征是淀粉样斑块（即老年斑，Senileplaques，SP）沉积，神经原纤维缠结（Neurofibrillarytangles，NFT）和神经元丢失；并主要发生于大脑内与学习和记忆功能相关的区域一海马区和大脑皮质区，所以患者多表现出进行性记忆衰退和认知障碍等主要临床症状。

白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5～150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5～5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5～150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5～150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5～5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15～150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。

白藜芦醇对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响及变化规律。方法:通过不同浓度(0.128～500000nmol/L)Res作用于增殖期的Capan-1,检测5d各组细胞增殖率和细胞生长状态;通过增殖率曲线获得其半数生长抑制浓度(IC50)和杀伤浓度(killing concentration),并以此浓度再次作用细胞5d,检测并分析其细胞周期和细胞凋亡情况。结果:Res在16nmol/L时增殖率显著升高,而在15000nmol/L开始呈现抑制增长表现。Res对Capan-1的IC50为48.33μmol/L,细胞杀伤浓度为87.40μmol/L。流式细胞检测结果表明,Res浓度为48.33μmol/L时,G0/G1期细胞比例显著增高于空白对照组(P<0.01)。当Res浓度为87.40μmol/L时,G2/M期细胞比例显著低于空白对照组和48.33μmol/L组(P<0.01),且细胞凋亡率显著高于其他两组(P<0.01)。结论:Res对Capan-1的增殖影响存在浓度依赖性,分别表现为促进增殖、抑制增殖、促进凋亡3个阶段浓度,其中Res抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用与其对细胞周期的阻断作用有关。

白藜芦醇对小鼠胚胎成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇(Res)对小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)增殖和细胞周期的影响及变化规律。方法:通过不同浓度(1～150μmol/L)Res作用于增殖期的MEF,用MTT法检测72h后各组细胞增殖变化,用流式细胞术检测并分析其细胞周期。结果:Res1μmo/L组A值明显高于对照组(P<0.05),Res50μmol/L和150μmol/L组A值分别为0.196±0.055和0.185±0.034,均明显低于对照组(分别P<0.05,P<0.01),其细胞生长抑制率分别为14.0%和18.9%。细胞周期检测结果表明,Res1μmol/L组中G2/M期细胞占(14.82±0.49)%显著高于对照组(P<0.01)。50μmol/L和150μmol/L组G0/G1期细胞所占比例分别为(59.61±6.03)%和(65.31±0.27)%均显著高于对照组(P<0.01)。结论:Res对MEF增殖的影响,具有双向浓度依赖性,增殖和抑制增殖均与细胞周期调控有关,其中阻断G1期细胞进入S期是其抑制MEF增殖主要因素。

hTERT基因转染对人胚胎大脑皮质神经元生长的影响

目的观察hTERT基因转染后对人胚胎大脑皮质神经元生长活力的影响。方法制备pSU-CMV-hTERT腺病毒,以MOI感染人胚胎大脑皮质神经元。免疫细胞化学荧光染色观察神经元内hTERT表达。MTT法测量接种病毒后24h、72h、1周、2周、3周的神经元活力。结果经鉴定正确的重组质粒pSU-CMV-hTERT与骨架质粒正确重组,经包装扩增后得到含hTERT基因的腺病毒。病毒转染24h时荧光染色可见神经元内有hTERT表达,第3周末表达减弱。hTERT基因转染后的神经元平均活力较对照组高,转染病毒后24h、72h、1周、2周、3周,hTERT基因转染对神经元的保护率分别为27.4%、42.4%、17.3%、7.4%和15.9%。结论hTERT基因转染对人胚胎大脑皮质神经元有一定的保护作用。

褪黑素对丙烯酰胺致大鼠睾丸氧化损伤和Bax/Bcl-2表达的影响

目的探讨褪黑素(MT)对丙烯酰胺(AA)诱发大鼠睾丸氧化损伤和细胞凋亡的作用。方法雄性大鼠随机分为对照组、AA染毒组和MT治疗组,每组各8只动物。实验结束后,取材各组大鼠的睾丸和血清,检测MDA和SOD指标,并利用免疫组织化学法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2表达情况。结果与对照组相比,AA染毒组大鼠睾丸组织和血清中MDA含量明显增加(P<0.05);SOD活力显著下降(P<0.01),然而,经MT治疗后,大鼠睾丸和血清中MDA含量明显减少(P<0.05);SOD活力明显升高(P<0.05,P<0.01)。免疫组织化学的结果表明,与对照组相比,AA染毒组大鼠睾丸组织中Bax表达为强阳性,而Bcl-2表达呈弱阳性。经MT治疗后,可下调Bax的表达以及上调Bcl-2在睾丸组织中的表达。结论 MT能够有效缓解AA所致的大鼠睾丸毒性,且MT可能通过线粒体功能相关的抗氧化损伤和抗凋亡特性从而发挥调节作用。

白藜芦醇对神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖变化规律和生长状况的影响。方法:通过不同浓度(0.15～500)μmol/LRes作用于SH-SY5Y,检测药物作用5d后各组细胞增殖率和细胞生长状态,同时通过增殖率曲线获得其半数生长抑制浓度(IC50)和杀伤浓度,并对各组细胞进行Hochest染色,检测其细胞凋亡情况。结果:Res5μmol/L组细胞增殖率为(117.00±15.30)%显著高于空白对照组(P<0.05),15μmol/L组细胞增殖率为(31.33±2.89)%,50、150、500μmol/L组,细胞出现负增长。Res对SH-SY5Y的IC50为12.78μmol/L,细胞杀伤浓度(即增殖率为0%)为19.88μmol/L。Res50～500μmol/L各组内,部分细胞皱缩,突起减少或消失,并出现凋亡细胞。结论:Res在0.15～500μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y的增殖影响存在浓度依赖性,并依次表现为促进增殖、抑制增殖和杀伤细胞三个方面效应。其中杀伤细胞效应与促进SH-SY5Y的凋亡启动相关。

褪黑素对6-OHDA诱导大鼠模型黑质神经元和胶质细胞的影响

目的探察褪黑素(melatonin,MT)对6-羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)模型大鼠黑质神经元和胶质细胞的影响。方法选取35只成年雄性SD大鼠,随机分成正常对照组、6-OHDA处理组和6-OHDA+MT处理组,采用免疫组化染色检测各组大鼠黑质Iba1、GFAP阳性胶质细胞及多巴胺(Dopamine,DA)能神经元的形态结构变化,并进行细胞计数,蛋白印迹技术(Western blotting)检测TH、GFAP、OX42蛋白表达水平的变化。实验数据用统计学软件进行分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 6-OHDA处理组黑质胶质细胞呈激活状态,且数量明显多于对照组和6-OHDA+MT处理组(P<0.05),TH阳性多巴胺能神经元数量明显少于对照组和6-OHDA+MT处理组(P<0.05),对照组和6-OHDA+MT处理组无明显差异(P>0.05);6-OHDA处理组TH蛋白的表达水平明显下调(P<0.05),OX42、GFAP蛋白的表达水平明显上调(P<0.05),对照组和6-OHDA+MT处理组无明显差异(P>0.05)。结论MT能够抑制6-OHDA帕金森病大鼠模型黑质胶质细胞的增殖和活化,并推测MT可能通过这一抑制作用保护DA能神经元。

丙烯酰胺对雄性生殖系统毒性影响的研究进展

近年来在淀粉质食品经高温处理时检出有丙烯酰胺的存在,其毒性再次受到广泛关注。已有资料显示:丙烯酰胺可能具有多种毒性。众多科研人员纷纷投入到丙烯酰胺的毒性研究中,并取得了一定的进展,但其毒性机制仍不完善;关于丙烯酰胺对于人类的影响,除了已明确有神经毒性外,其它毒性均有待于进一步的研究和探讨。本综述将重点关注丙烯酰胺对雄性生殖系统的毒性影响。

4价Aβ1-15基因工程肽疫苗接种恒河猴的安全性评价

目的评价4价Aβ1-15基因工程肽疫苗(4×Aβ1-15)接种成年恒河猴的安全性。方法4只雄性成年恒河猴均免疫接种4次,每次间隔2周,以肌肉注射法接受4×Aβ1-15接种,检查免疫前后恒河猴的血常规和肝肾功能指标;观察疫苗接种后恒河猴的脑、肝、脾、肾的组织结构。在整个实验过程中,常规检测恒河猴有无局部和全身反应。结果4价Aβ1-15接种后,恒河猴无局部和全身不良反应,血常规和肝肾功能指标无明显变化(P>0.05),肝、脾、肾未见组织结构的病理改变;脑内无出血表现。结论4价Aβ1-15基因工程肽疫苗(4×Aβ1-15)具有良好的安全性。

诱导性多能干细胞的诱导培养和鉴定

诱导性多能干细胞(iPS细胞)与胚胎干细胞在形态和生长特征上有许多相同之处,但iPS细胞的应用前景更为广阔。它为再生医学提供了有价值的细胞资源,使得运用病人自身细胞来治疗自己成为可能。iPS细胞诱导有许多方法 ,培养和鉴定也有其特点,本文就近年iPS的诱导培养和鉴定方面的研究进展作一综述。

体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达

背景：尽管目前研究将骨髓间充质干细胞的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白高表达作为细胞向某一方向分化的重要标志,但未分化的骨髓间充质干细胞是否表达该类蛋白目前尚无定论。目的：观察分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达情况。设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2007-10/2008-05在广东药学院完成。材料：ICR小鼠3只,1d龄ICR乳鼠1只,由广东省医学实验动物中心提供。方法：利用差速贴壁法体外分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞,待细胞至70%-80%融合时传代。取1d龄ICR乳鼠皮肤组织,自行分离传代并冻存,经复苏后获得乳鼠皮肤成纤维细胞。实验组将稳定传代3次的小鼠骨髓间充质干细胞接种到6孔培养板中,按109L-1密度接种,1mL/孔;对照组同法接种乳鼠皮肤成纤维细胞,培养72h。主要观察指标：骨髓间充质干细胞的形态及生长情况,RT-PCR法检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达。结果：原代培养的小鼠骨髓间充质干细胞集落形成初期,细胞核较大,胞浆较少,细胞呈三角形、多角形和长梭形等多种形态;传代后细胞生长旺盛,多数呈长梭型,细胞表面有大量微绒毛。培养48h时,实验组无Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达,对照组表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原;培养72h时,实验组Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达量显著低于对照组（t=42.692,85.349,P〈0.01）。结论：传代培养48h时,骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因尚未启动,至72h后Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因出现低表达,其并非像成纤维细胞那样在生长过程中持续的表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因。