科学构建和谐药学院校重点实验室

药学院校内的省属重点实验室不仅在实验教学、科学研究、技术开发和学术交流等方面具有重要作用,同时为推动制药产业的发展提供各种支持。因此,科学构建和谐的药学院校重点实验具有十分重要的意义。

复合抑制剂对酪氨酸酶活性的相互作用研究

研究苯甲酸、肉桂酸和曲酸复合使用对酪氨酸酶活性的抑制以及抑制剂间的相互作用。采用酪氨酸酶L-多巴速率氧化法,观测不同比例的复合抑制剂对酪氨酸酶二酚酶的活性影响,以研究药物相互作用的等效线分析法和相互作用指数评价复合抑制剂的相互作用效应。结果显示在等效于酶活性抑制50%的条件下,苯甲酸与曲酸质量比为7.5∶1,相互作用指数为0.42;肉桂酸与曲酸质量比为3.8∶1,相互作用指数为0.56;苯甲酸、肉桂酸和曲酸质量比为7.5∶3.8∶1,相互作用指数为0.18。说明苯甲酸、肉桂酸和曲酸复合使用对酪氨酸酶二酚酶活性抑制的相互作用主要表现为协同效应,协同程度与复合抑制剂质量浓度和比例有关。

基础与临床结合协同培养基础医学研究生的探索

随着我国社会经济的发展,对基础医学研究生的培养提出了新的要求,基础研究与临床实践相结合是医学发展的必然趋势。通过基础与临床相结合协同培养基础医学研究生的探索和实践,在师资建设、课程设置、学科建设、学术交流等方面进行了调整和改革,加强了基础医学与临床医学在科研和教学中的交叉和融合,提高了基础医学研究生的培养质量,培养了一批符合社会经济发展需要的复合型人才。

鱼腥草总黄酮对人肿瘤细胞的抗肿瘤活性作用

目的探究鱼腥草黄酮类提取物对人子宫颈癌细胞株SiHa增殖和凋亡的影响。方法①采用20倍60%乙醇进行回流提取,大孔树脂分离提取纯化鱼腥草中黄酮类化合物;②应用四甲基偶氮唑蓝法检测黄酮类化合物对SiHa的细胞抑制率;③采用流式细胞术检测其对SiHa细胞凋亡的影响。结果①鱼腥草黄酮提取物有抑制SiHa细胞生长的作用,半数抑制浓度值为0.825 g/L;②鱼腥草黄酮提取物能以浓度依赖性诱导SiHa细胞的凋亡。结论鱼腥草黄酮提取物能抑制SiHa肿瘤细胞生长,诱导凋亡的作用,为鱼腥草的抗子宫颈癌的药效学效应提供了实验依据。

家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至摇瓶,28℃条件下0.5%甲醇诱导表达,连续诱导培养4 d后,上清液进行Tricine-SDS-PAGE检测表达效果,并采用琼脂糖孔穴扩散法检测表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的抑制作用。结果显示,家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中得到了成功表达,表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的生长有抑制作用。说明酵母系统适合抗菌肽的表达。

抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用

目的研究人抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜的相关作用,为MRSA的预防治疗以及新药物开发应用提供新策略。方法运用微量肉汤稀释法测定LL-37对临床MRSA菌株的最小抑菌浓度;建立96孔板及6孔板生物膜体外模型;通过结晶紫定量法以及激光共聚焦荧光染色法检测LL-37对MRSA生物膜形成的影响。结果微量肉汤稀释法测得LL-37对临床MRSA菌株的MIC为12.5μmol/L。不同浓度LL-37作用后,结晶紫定量法结果表明1/20 MIC亚抑菌浓度的LL-37即可抑制生物膜形成(P<0.01),且抑制率随用药浓度增加也随之提高,在1/4 MIC条件下生物膜形成抑制率可达到63%。与生理盐水对照组相比,激光共聚焦扫描显微镜下可见,用药组生物膜排列稀疏,厚度变薄,组成菌量明显减少。结论低浓度的LL-37能够抑制MRSA生物膜的形成,并且对成熟生物膜结构也具有一定的破坏作用。

酵母葡聚糖硫酸酯的制备及抗凝血活性

利用浓硫酸-正丁醇法对酵母葡聚糖进行硫酸酯化修饰,制得多种酵母葡聚糖硫酸酯,其取代度在0.2320.418之间。选择取代度为0.418的产物进行结构和抗凝血活性分析,该产物相对分子量为1.68×105,IR和1H NMR图谱显示该产物引入了硫酸基团;抗凝血活性测试结构表明。

蜂蜜对急性酒精中毒大鼠的解酒作用研究

目的:研究蜂蜜对急性酒精中毒SD大鼠的解酒作用及其对酒精代谢关键酶的影响。方法:用75%食用级无水乙醇按10m L/kg一次性灌胃法构建急性酒精中毒大鼠模型,以解酒护肝鼎久口服液为阳性药物对照,采用蜂蜜高、中、低3个浓度进行灌胃干预。以大鼠血清乙醇浓度、肝脏乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)和乙醛脱氢酶(Acetaldehyde Dehydrogenase,ALDH)、胃ADH和ALDH为考察指标。结果:与模型组比较,蜂蜜低、中浓度组大鼠血清乙醇浓度均显著降低(P<0.05),蜂蜜高浓度组大鼠血清乙醇浓度极显著降低(P<0.01),蜂蜜中、高浓度组极显著提高大鼠肝ADH和胃ALDH活性(P<0.01),蜂蜜各浓度组可显著提高胃ADH和肝ALDH活性(P<0.05或P<0.01)。结论:蜂蜜能够通过提高肝脏和胃的ADH和ALDH活性从而显著降低大鼠血清乙醇浓度,具有明显的解酒作用。

家蝇抗菌肽diptericin基因的组织表达研究

目的运用原位杂交方法检测家蝇抗菌肽基因dipericin组织表达模式。方法基于前期实时荧光定量PCR的结果 ,选取病原诱导12 h后的家蝇三龄幼虫,提取其RNA,克隆出dipericin保守序列,应用地高辛标记的diptericin基因反义RNA探针,对经多重耐药的大肠杆菌和耐甲氧西林葡萄球菌混合液刺激前后的家蝇幼虫组织切片进行组织原位杂交。结果 diptericin基因在诱导和未诱导家蝇幼虫的体壁和肌肉均未表达,在诱导后的脂肪体及中肠有高表达,在未诱导的家蝇幼虫部分组织内也有检测到阳性信号,如气管有很弱的表达,而马氏管则诱导与未诱导均有表达。结论家蝇抗菌肽基因diptericin在家蝇抵御外界微生物感染免疫防御中,有着极其重要的作用。

中药罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位氨基酸HPLC指纹图谱分析

目的：构建中药罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位氨基酸指纹图谱,为明确其氨基酸组成及建立其质量控制方法提供实验依据。方法用2,4-硝基氟苯柱前衍生法建立罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位水解氨基酸的HPLC指纹图谱,优化衍生条件。结果衍生剂量为1%（体积分数）2,4-二硝基氟苯（2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB ）乙腈溶液1.0 mL、衍生温度为60℃、衍生时间为60 min时,衍生化完全；样品水解氨基酸中谷氨酸和精氨酸的质量分数较高,均大于5%；HPLC指纹谱图共确定24个共有峰,10批样品相似度在0．99-1．00之间。结论本方法稳定、可靠,重复性好,明确了罗仙子抗动脉粥样硬化活性部位的氨基酸组成,并初步建立了该部位的质量控制方法。

蟛蜞菊乙醇提取物促进黑色素生成及其机理的初步研究

目的观察中药蟛蜞菊乙醇提取物促进黑色素生成的作用,并初步探讨其作用机理。方法 MTT法、L-Dopa氧化法、NaOH裂解法探讨不同浓度蟛蜞菊乙醇提取物作用于小鼠恶性黑色素瘤细胞(B16)72 h后,对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。RT-PCR检测药物作用前后酪氨酸酶、小眼相关转录因子(MITF)等基因表达的影响。结果与对照组比较,蟛蜞菊乙醇提取物能促进B16细胞的增殖,促进酪氨酸酶活性增加和黑色素生成增多;可剂量依赖性上调酪氨酸酶和MITF的mRNA表达。结论蟛蜞菊乙醇提取物可促进B16细胞黑色素生成,其机制可能是通过促进B16细胞增殖、增强酪氨酸酶和MITF的基因表达来实现。

不同提取方法对家蝇幼虫体外抗炎活性的影响

为比较水提法、碱提法、盐提法及醇提法对家蝇幼虫体外抗炎活性的影响,以脂多糖诱导的巨噬细胞为研究对象,结合不同方法所获产物的产率、蛋白含量等,探明4种方法所获提取物对细胞形态及TNFα、MCP-1分泌的影响。结果表明,碱提法所获产物的产率最高,其次是水提法、盐提法和醇提法;水提法所获产物的蛋白含量最高,其次是盐提法、碱提法和醇提法;水提法所获产物的体外抗炎活性最优,其次是醇提法、盐提法和碱提法。

CBZ-AAN-Dox新前药的计算机辅助设计及合成与活性检测

目的探究一种以多柔比星为母药的低毒新型抗肿瘤前药。方法采用Sybyl 8.0的Sketch模块进行前药的计算机辅助设计,通过多种短肽共价偶联多柔比星形成前药库。虚拟筛选后用化学方法合成前药,通过硅胶柱和凝胶柱进行纯化,HPLC法检测与鉴定,体外特异性酶解试验及细胞毒性试验进行活性检测。结果计算机辅助药物设计所得到的新型前药N-苄氧羰基-丙氨酰-丙氨酰-天冬酰胺-多柔比星物理及化学参数较好,其化学合成产物纯度为94%,其天冬酰胺内肽酶酶解Km和Vmax分别为(68±7)μmol/L,(3.9±0.6)μmol/(L·s),对2种体外培养肿瘤细胞株的毒性作用约降低了约90%。结论计算机辅助药物设计在指导多柔比星前药合成过程中具有参考意义;前药合成与分离纯化方法简单可靠,分离效果好;新合成前药细胞毒性降低,可被天冬酰胺内肽酶酶解。

广州地区贝类中人类杯状病毒感染调查研究

从2007年10月-2009年9月，在广州市水产品市场收集127个牡蛎、94个毛蚶、342个花蛤、265个带子，采用荧光定量PCR方法检测人类杯状病毒HuCV的感染，旨在为贝类的安全监控提供基础研究资料。研究结果表明：牡蛎的HuCV阳性检出率最高，为24.4l％（31／127）；毛蚶和带子样品中HuCV，4-阳性率分别为11．70％（11／94）和1．89％（5／265）；而花蛤中未检出HuCV。牡蛎中存在着人类杯状病毒不同基因型的混合感染。结果还显示贝类中的HuCV感染一般在秋冬季节流行：在2007年10月～2008年2月和2008年10月-2009年2月期间，牡蛎中HuCV总检出率分别为23．08％（12／52）和35．85％（19／53）；而在2008、2009年的3月～9月间，牡蛎中均未发现HuCV感染。

胡芦巴多糖提取工艺的研究

目的优化胡芦巴多糖提取的最佳工艺。方法采用正交试验设计,以胡芦巴提取物出膏率及总多糖含量为评价指标,以苯酚-硫酸比色法测定胡芦巴中多糖的质量分数,考察提取时间、提取次数、固液比对胡芦巴中多糖提取效果的影响。结果影响胡芦巴多糖提取的因素大小依次为:提取次数>固液比>提取时间。优化得到最佳提取工艺为:加20倍体积的水,提取3次,每次1.5 h。结论本工艺合理、可行,适用于胡芦巴中多糖的提取。

半边莲配方颗粒的薄层鉴别研究

目的:建立半边莲配方颗粒的薄层鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对半边莲配方颗粒进行定性鉴别。结果:薄层色谱法可以鉴别半边莲配方颗粒中的特征性斑点。结论:方法可行,重复性好,能有效地控制半边莲配方颗粒的质量。

抗风湿类健康产品中双氯芬酸钠的快速筛查方法研究及产品化设计

目的:建立抗风湿类健康产品中双氯芬酸钠的快速筛查方法并对方法进行产品化设计。方法:采用颜色反应对双氯芬酸钠成分,优选提取溶剂,并对方法进行专属性研究。结果:颜色反应可以准确快速的检测出抗风湿类健康产品中双氯芬酸钠成分的存在,可以在3分钟内进行快速检测,并进行了产品化设计。结论:方法准确简单,可快速筛查抗风湿类健康产品中双氯芬酸钠的存在,同时产品化设计可操作性强,易于量产。

家蝇抗菌肽Attacin在毕赤酵母中的异源表达

目的构建家蝇抗菌肽(攻击素,attacin)成熟肽的重组表达质粒并转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,诱导attacin表达。方法 PCR扩增家蝇抗菌肽attacin基因成熟肽编码区,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-attacin用SacⅠ酶切线性化后,采用电转化法将其转入毕赤酵母GS115中,通过抗性、表型和PCR筛选多拷贝整合株。甲醇诱导毕赤酵母GS115/pPIC9K-attacin的表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物,采用琼脂糖孔穴扩散法检测其对大肠埃希菌K12D31的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-attacin构建成功,电转化获得多拷贝整合转化子毕赤酵母GS115/pPIC9 K-attacin,表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,在约Mr22000处有蛋白条带,表达产物可抑制E.coli K12D31的生长。结论家蝇抗菌肽attacin在巴斯德毕赤酵母中成功进行了表达。

家蝇抗菌肽Cecropin对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及其机制

目的探讨家蝇抗菌肽Cecropin对人肝癌BEL-7402细胞周期的影响及其机制。方法人肝癌细胞BEL-7402经家蝇抗菌肽Cecropin作用后,光学显微镜观察细胞生长情况,PI单染流式细胞术检测各组细胞周期分布情况,并采用间接免疫荧光标记技术通过流式细胞仪检测细胞周期检测点激酶1(CHK1)和细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)。结果光学显微镜下,对照组细胞形态规则,呈梭形贴壁生长,抗菌肽组细胞部分变圆,贴壁不佳,数量减少;细胞增殖周期发生改变,G0/G1与G2/M期细胞比例降低,S期细胞比例增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),并且细胞周期调控关键蛋白分子CHK1和CDK2的表达增高。结论家蝇抗菌肽Cecropin可通过调节CHK1和CDK2的表达影响BEL-7402细胞增殖周期。

融合基因Mdc-hly的构建及原核表达

构建家蝇天蚕素-人溶菌酶(Mdc-hly)融合基因,实现Mdc-hly基因在大肠杆菌中的表达。通过RT-PCR分别扩增出家蝇天蚕素和人溶菌酶的成熟肽基因序列,再利用Gene-SOEing技术构建融合基因,将融合基因克隆至pET32a表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达,融合蛋白分子量约为38kD。Western blotting杂交证实了表达蛋白的抗原活性。成功构建了融合其因并进行了原核表达,为进一步的生物活性研究打下基础。