从中药的不同业态看中药产业的整体发展趋势

本文对几种中药应用形式(传统饮片、配方颗粒、经典名方标准颗粒、中成药、天然药物)的市场表现及相应的技术特点进行简要分析。在一定时期内,几种应用形式在各自发展的情况下相互补充,难以形成一枝独秀的局面。随着饮片代煎服务的进一步完善、经典名方标准颗粒的上市,可能会解决目前中药配方颗粒和中成药面临的问题,进一步提升中药的市场竞争力。而疗效确切的天然药物、中药小复方有望成为中药行业新的增长点。

改进的CTAB法提取32种中药破壁饮片DNA及物种鉴定

中药破壁饮片是由传统中药饮片经过气流破壁技术加工而成,已失去了原药材原有的外观性状特征,传统的鉴别方法已很难鉴别其真伪。本研究选用ITS2序列作为DNA条形码对32个中药破壁饮片品种进行研究,验证DNA条形码技术应用于中药破壁饮片上的可行性。通过提取32个品种的DNA、PCR扩增及双向测序获得ITS2序列,在中药材DNA条形码鉴定系统和NCBI数据库中进行比对。实验结果表明:32个品种通过改良的CTAB法均能成功提取DNA,PCR扩增及测序后均能得到高质量的ITS2序列。因此,基于ITS2序列的DNA条形码技术可有效地鉴定中药破壁饮片,为中药破壁饮片真伪鉴别提供有效手段。

青天葵及其混伪品的rbcL基因序列鉴定研究(英文)

本研究旨在利用植物DNA条形候选片段rbcL基因的序列信息鉴别青天葵及其混伪品。采用试剂盒法提取青天葵及其混伪品的叶片总DNA,一对通用引物应用于PCR扩增和双向测序。采用DNAMAN、CLUSTALX和MEGA4.0等软件进行序列拼接比对、遗传距离分析和聚类分析。获得的青天葵及其混伪品rbcL基因序列长度为502 bp,3个类型的青天葵序列完全一致,它们与毛叶芋兰之间存在5处差异;青天葵种内K2P遗传距离小于其与混伪品的种间K2P遗传距离;NJ聚类树显示,各物种均表现出单系性,并与其它物种相互区别。表明rbcL基因可用于鉴别青天葵及其混伪品。

止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法研究

【目的】建立检测止咳平喘中成药中9种非法添加化学成分的定性定量检验方法。【方法】采用超高效液相色谱—四级杆—飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF)联用技术对止咳平喘类中成药中非法添加的9种化学成分进行定性筛查,经筛查为阳性的样品用高效液相色谱法(HPLC)对止咳平喘中成药中非法添加的9种化学成分进行含量检测。色谱柱采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈及甲酸铵缓冲液(p H 3.65),梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,检测波长为225 nm和280 nm。【结果】通过对5批止咳平喘类中成药进行检测,检出1批样品含有磷酸可待因,含量为0.84 mg/m L。【结论】本法简便准确,灵敏度高,适用于止咳平喘类中成药中9种非法添加化学成分的检测。

凉粉草不同极性部位抗氧化及对α-葡萄糖苷酶抑制作用研究

目的研究凉粉草醇提物不同极性部位抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶抑制作用,并筛选最优部位。方法制备凉粉草醇提液,依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取得到不同极性部位,测定1,1-二苯基-2苦基肼自由基(DPPH自由基)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS自由基)清除能力及铁离子抗氧化能力(FRAP)值,根据清除率计算半数抑制率(IC50值),考察不同部位抗氧化能力。通过比较不同部位对α-葡萄糖苷酶抑制能力,考察不同部位对α-葡萄糖苷酶抑制作用。测定各部位多酚含量。结果凉粉草提取物不同极性部位均有抗氧化活性,其中乙酸乙酯部位抗氧化活性最强,DPPH·清除率IC50为19.13μg·mL^-1,ABTS+清除率IC50为18.20μg·mL^-1,FRAP值平均相当于Fe2+392.07μg·mL^-1。不同部位对α-葡萄糖苷酶抑制作用比较,正丁醇部位最优。结论凉粉草提取物及不同极性部位均具有一定抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。该研究可为凉粉草开发利用提供实验依据。

黄芪破壁饮片的DNA条形码鉴别与黄酮类成分HPLC指纹图谱研究

目的:利用DNA条形码技术对黄芪破壁饮片进行物种鉴定,再建立其黄酮类成分HPLC指纹图谱,为其质量控制和鉴定提供依据。方法:提取15批样品的DNA进行序列分析和物种鉴定。物种鉴定后采用高效液相色谱法,色谱柱:Agilent ZORBAX SB-Aq C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.15%甲酸溶液梯度洗脱;流速0.6 m L/min;检测波长254 nm;柱温25℃;结果:经DNA条形码鉴定,实验所用的15批样品均被鉴定为蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao。在此基础上建立了15批样品的HPLC指纹图谱,标定11个共有峰,15批样品的相似度在0.9-1.0之间。结论:DNA条形码和指纹图谱两种方法可对黄芪破壁饮片进行物种鉴定和全面反映黄芪破壁饮片中的成分信息,可用于黄芪破壁饮片的真伪鉴定和批间一致性评价。

不同粒径黄芪超微粉理化性质的研究

目的:对不同粒径黄芪超微粉理化性质进行研究,为黄芪超微粉生产以及粒径的控制提供实验依据。方法:采用气流粉碎机制备黄芪不同粒径的超微粉体,对其粒径、形貌结构、流动性、吸湿性、有效成分溶出度等进行考察。结果:随着粒径的减小,黄芪粉体的比表面积增加,流动性稍有降低,吸湿性稍有增加,收率降低,有效成分溶出速率、溶出量以及相对累积溶出百分率总体来说有所增加。结论:适度的微粉化能促进黄芪有效成分的溶出,然而粒径太小,收率过低不符合生产实际,实际生产过程中应综合考察优选最佳粉碎粒径。

毛冬青三萜C-28位氧化酶基因的克隆与功能研究

目的对毛冬青三萜C-28位氧化酶基因进行挖掘与功能鉴定。方法在前期获得的毛冬青转录组数据中,筛选出1个可能参与毛冬青三萜C-28位氧化的CYP基因(IpAO1),将IpAO1与毛冬青三萜合酶IpAS1共转化酿酒酵母,验证IpAO1的功能。结果 Western Blot结果表明,重组酵母能够表达与预期大小相符的IpAS1蛋白和IpAO1蛋白。GC-MS分析结果显示,仅表达IpAS1基因的重组酵母产生了α-香树脂醇和β-香树脂醇,而共表达IpAS1和IpAO1基因的重组酵母合成了熊果酸和齐墩果酸。结论来源于毛冬青的IpAO1是编码一个α-香树脂醇/β-香树脂醇的C-28位氧化酶。

HS-GC-MS结合ROAV分析不同品种橘红花挥发性成分

目的:系统研究不同品种橘红花挥发性成分差异和香气特征。方法:利用顶空-气相色谱-质谱法(HSGC-MS)对4个品种(“光青”“假西洋”“密叶正毛”和“黄龙正毛”)共40批橘红花的挥发性成分进行检测,结合相对气味活度值(ROAV)分析其中的关键香气成分。采用多元统计分析筛选不同品种橘红花显著性差异成分和特征香气成分。结果:HS-GC-MS检测结果显示,从4个品种橘红花中共鉴定出40个挥发性成分,主要包括烯烃类、醇类、酯类、酮类和醛类,其中以柠檬烯、β-月桂烯、芳樟醇、反式-橙花叔醇等为共有且含量较高的成分。通过ROAV确定了4个品种橘红花共有关键香气成分8个。挥发性成分差异分析结果显示,21个差异标志物可用于品种判别,其中β-蒎烯是“假西洋”的特征香气成分,芳樟醇是“密叶正毛”的特征香气成分,苯乙醛、反式-橙花叔醇和邻氨基苯甲酸甲酯是“黄龙正毛”的特征香气成分。结论:HS-GC-MS结合ROAV系统分析可区分不同品种橘红花并鉴定差异性的特征香气成分,该方法可为橘红花的品种判别和资源综合开发利用提供参考。

三叉苦本草源流考证

通过对古代本草著作、全国性本草、地方性本草、辞典、药典的文献溯源,考证了南药三叉苦的品名源流及产地、分布、药用部位、性味、归经、功用、临床应用等方面的文献记载情况。认为民国胡真著的《山草药指南》为三叉苦的最早记载文献;正名为芸香科蜜茱萸属植物三叉苦Melicope pteleifolia(champ.ex Benth).T.G.Hartley;明确了三叉苦性味为苦、寒,功效为清热解毒、祛风除湿、消肿止痛,归肺、肝经;并对其生境、产区、临床应用有更明确的认识。可为开展三叉苦的进一步研究提供参考。

黄芪破壁饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后5种有效成分溶出含量比较

目的:比较黄芪破壁饮片煎煮、冲泡与传统饮片煎煮后有效成分溶出含量的差异,为黄芪破壁饮片临床应用提供参考。方法:通过正交试验确定黄芪破壁饮片和传统饮片最优的煎煮工艺[液料比(m L/g)、煎煮次数、煎煮前浸泡时间(min)]以及破壁饮片最优冲泡工艺[水温(℃)、液料比、冲泡次数],在各自的最优工艺下比较5种成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素)在不同煎煮/冲泡时间点的溶出含量差异。结果:黄芪破壁饮片按最优煎煮工艺(液料比50∶1,煎煮前不浸泡,煎煮2次)煎煮5~10 min时其有效成分溶出含量已达到传统饮片煎煮(煎煮前浸泡30 min,液料比50∶1,煎煮3次)30 min的溶出含量;其在最优冲泡工艺(液料比75∶1,水温100℃,冲泡3次)下有效成分可以达到传统饮片煎煮时溶出含量的80%~90%。结论:黄芪饮片经过破壁后有效成分溶出速率更快,可以免去煎煮前浸泡时间,并减少煎煮时间、次数,煎煮效率显著提高;临床使用时可采用冲泡方式。

新胃乃安片中4种异黄酮成分的含量测定及一测多评法的建立

目的:建立同时测定新胃乃安片中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素等4种异黄酮成分的含量测定方法。方法:采用HPLC外标法测定上述4种异黄酮成分的含量,以毛蕊异黄酮苷为内参物,建立毛蕊异黄酮苷与芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的相对校正因子,通过相对校正因子计算出芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的量,计算结果与外标法实测值进行比较。结果:建立了一测多评同时测定新胃乃安片中4种异黄酮成分的含量测定方法,该方法与外标法测定结果没有明显差异。结论:该研究建立的一测多评法简单方便,可同时测定新胃乃安片中4种异黄酮类成分含量,为建立完善的新胃乃安片质量标准提供参考依据。

仙草总黄酮提取纯化工艺优化及其抗氧化活性

目的优化仙草总黄酮提取纯化工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、料液比、提取时间为影响因素,总黄酮提取量为评价指标,正交试验优化提取工艺;以总黄酮吸附率、解吸附率为指标,考察不同型号大孔树脂对纯化效果的影响。然后,通过测定总黄酮DPPH清除能力考察纯化产物抗氧化活性。结果最佳提取条件为乙醇体积分数50%,料液比1∶50,提取时间1.5 h,总黄酮提取量1 335 mg。X-5型大孔树脂最适合纯化总黄酮,吸附量为12.73 mg/g,解吸率为58.84%,最佳纯化条件为0.3 mg/m L、p H 2~4的粗提物静态吸附24 h,以2 BV/h速率用10%、20%、30%、40%乙醇进行梯度洗脱。纯化后总黄酮对DPPH自由基的清除能力增强,IC50为21μg/m L。结论该工艺稳定可靠,仙草总黄酮纯化后抗氧化活性显著提高。

鸡血藤醇提物对高脂血症大鼠血脂及抗脂质过氧化作用的影响

【目的】观察鸡血藤醇提物对高脂血症大鼠血脂及抗脂质过氧化作用的影响。【方法】将36只SPF级SD雄性大鼠,随机分为6组:正常组,模型组,辛伐他汀组(剂量为8 mg·kg-1·d-1),鸡血藤低、中、高剂量组(剂量分别为2、4、8 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组6只,采用喂饲高脂饲料复制高血脂症大鼠模型,预防性给药12周后采血取肝脏,测定各组大鼠血脂水平、肝脏酶活力及肝组织病理变化。【结果】与模型组比较,鸡血藤醇提物可显著降低大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和肝脏TG含量,显著提高大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力(P<0.05或P<0.01)。鸡血藤醇提物中、高剂量组大鼠的肝细胞脂肪变性程度均较模型组有明显改善。【结论】鸡血藤醇提物有较好的降低血脂和抗氧化保肝作用。

广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析

对广藿香的法尼基焦磷酸酶(PatFPPS)进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21(DE3)表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白。利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白。

基于rbcL基因的阳春砂及其5种同属混淆品的鉴别

目的采用基于rbcL基因的DNA条形码鉴别阳春砂及其5种同属混淆品。方法从Gen Bank数据库获取阳春砂与5种同属混淆品的rbcL基因序列。采用Clustal X软件进行序列比对分析,用MEGA软件构建聚类树。结果 rbcL序列比对后有效序列为491bp,GC平均含量为42. 2%,阳春砂及其同属混淆品白豆蔻、云南豆蔻、长柄豆蔻、九翅豆蔻的rbcL序列共存在10处碱基差异,与草果的rbcL序列存在55处碱基差异,基于rbcL基因的聚类树能较好地区分阳春砂及其5种同属混淆品。结论 rbcL基因能有效地鉴别阳春砂及其5种同属混淆品。

三桠苦ISSR反应体系的优化与引物筛选

目的构建三桠苦ISSR反应体系,为三桠苦种质资源遗传多样性分析及分子鉴定奠定基础。方法通过设定影响三桠苦ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测不同反应体系的扩增效果,对条件进行优化,并筛选引物及退火温度,建立三桠苦ISSR-PCR最适反应体系,并用23个不同三桠苦样品验证体系稳定性。结果首次建立了三桠苦ISSR最佳反应体系(25μl):Master Mix 12.5μl(Mg2+浓度4 mmol/L,d NTP浓度0.4mmol/L)、引物0.6μmol/L、模板DNA 20ng。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的12条引物。结论所建立的三桠苦ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,这一体系的建立及引物筛选可应用于三桠苦种质资源评估及遗传多样性分析的研究。

响应面法优化三叉苦黄酮提取工艺及抗氧化活性分析

目的采用星点设计-响应面法优化三叉苦总黄酮提取工艺,并考察抗氧化活性。方法在单因素考察结果的基础上,对三叉苦总黄酮提取工艺中乙醇体积分数(%)、液料比(ml/g)、加热回流提取时间(min)3个因素进行优化,得到较优的总黄酮提取工艺。通过测定三叉苦总黄酮DPPH和ABTS自由基清除能力评价其抗氧化活性。结果三叉苦总黄酮最佳提取工艺:乙醇体积分数90%,液料比10 ml/g,提取时间30 min,该条件下实际的提取率2.99%,与预测值3.25%偏差较小,清除DPPH和ABTS自由基能力较强。结论运用响应面设计得到的方法稳定可靠,可用于三叉苦总黄酮的提取。三叉苦有显著的抗氧化能力,为其进一步开发和应用提供一定依据,在功能食品和药品开发方面具有较好前景。

顶空-气相质谱联用技术分析凉粉草挥发性成分

【目的】分析不同加工方式和不同栽培品种凉粉草挥发性成分差异。【方法】采用顶空-气相色谱质谱联用(HS-GC-MS)技术测定分析不同凉粉草样品挥发性成分,分析结果通过质谱标准库检索,并采用面积归一化法计算相对质量分数,比较不同样品挥发性成分差异。【结果】从台湾凉粉草和本地凉粉草中共鉴别出24种挥发性成分,主要为烯类成分。2种凉粉草中均含有较大比例的石竹烯,台湾凉粉草中含12.9%,本地凉粉草中含34.2%。台湾凉粉草中特有成分α-芹子烯、β-芹子烯和α-红没药醇等共占25.5%。微发汗处理对凉粉草中石竹烯类成分的影响较大。【结论】建立的HS-GC-MS联用技术可对凉粉草的挥发性成分进行快速、有效的定性分析,且本地凉粉草与台湾引种的凉粉草挥发油特征成分差异较大,可为其鉴别提供参考。

顶空-气质联用法比较不同品种橘红胎挥发性成分差异

目的 建立快速分析橘红胎中挥发性成分的方法,比较不同品种橘红胎挥发性成分的差异。方法 采用静态顶空-气质联用(HS-GC-MS)技术分析橘红胎样品。采用质谱标准库(NIST17、WILEY275)检索,确定不同品种橘红胎中挥发性成分并比较差异,通过主成分分析、聚类分析对不同品种橘红胎进行归类。结果 共鉴定出橘红胎中49个挥发性成分,包括有烯类、醛类、醇类等,其中以烯类成分含量最高,超过总挥发性成分50%。副毛橘红胎中含有较高的乙酸龙脑酯,此成分在以柚类作为砧木的密叶红肉正毛、密叶黄龙正毛橘红胎中亦有检出,但含量较低。主成分分析和聚类分析均可将橘红胎按品种区分,两者的结果相一致。结论 不同品种的橘红胎挥发性成分有较大差异。所建立的HS-GC-MS分析方法稳定可靠,可用于橘红胎中挥发性成分的测定。