中医院校病理学实验教学改革思路探讨

分析了目前高等中医药院校病理学实验课的教学现状及其所存在的弊端 ,并对今后病理实验课改革方向及措施进行了初步的探讨。

肠道流体推进的生理、病理生理及药理研究

肠道流体推进的生理、病理生理及药理研究连至诚，梁雪芬（广州中医药大学脾胃研究所电生理及病理生理研究室）吴晓斌（广州市药检所药理室）钏廷机（广州中医药大学病理学教研室）林启成（中山大学天然物研究室）应用“肠道流体推进及相关生物电检测分析系统”的离体肠道...

山奈酚对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的:探讨山奈酚(kaempferol)对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法:采用MTT法检测细胞存活率;DAPI染色法观察细胞的凋亡形态;彗星电泳技术和FCM检测不同浓度山奈酚对细胞中DNA的影响。结果:山奈酚体外能明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖。用不同浓度(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)的山奈酚处理MGC-803细胞72h后,细胞的生长抑制率分别为10.32%、13.95%、21.58%、35.18%和58.13%,各药物处理组与对照组比较,P值均<0.01,呈剂量效应关系。50和100μmol/L山奈酚分别作用细胞24、48、72和96h后,结果显示药物作用的时间越长,对细胞的抑制作用越强,呈时间效应关系。DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征。30、60和120μmol/L山奈酚作用于细胞72h后,彗星电泳检测结果显示细胞后面均呈现拖尾现象,细胞头部平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,各药物组与对照组比较,P值均<0.01,且与药物浓度呈相关性。FCM检测结果显示,浓度为30、60和120μmol/L的山奈酚作用于细胞72h后,出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期被阻滞于S期和G2/M期,各药物组凋亡率较阴性对照组均明显升高。结论:山奈酚能抑制人胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡。

枸杞多糖对荷瘤小鼠肿瘤微环境T淋巴细胞亚群及树突状细胞的影响

目的:研究枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide,LBP)对荷瘤小鼠体内肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群和树突状细胞(dendriticcells,DCs)的影响,探讨LBP对荷瘤机体免疫逃逸的干预作用。方法:用LBP给H22荷瘤小鼠灌胃,连续2周后,测定肿瘤重量,采用流式细胞术检查肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltratinglymphocyte,T1L)中T淋巴细胞亚群和DCs的数量,以及协同刺激分子CD80(B7-1)表达的变化。结果:LBP可明显抑制肿瘤细胞的生长,增加肿瘤浸润CD4+、CD8+。细胞的数量。LBP高剂量组CD4+和CD8+细胞数量的百分比高于模型组(P<0.05)。LBP低剂量和高剂量组肿瘤浸润DCs数量及B7-1表达均较模型组升高,但差异无统计学意义。结论:LBP的抗肿瘤作用可能与恢复荷瘤小鼠TIL中CD4+、CD8+的细胞数量、解除机体的免疫抑制状态及增强机体的抗肿瘤免疫功能有关。LBP能否恢复荷瘤机体DCs的表型及功能尚待进一步研究。

吴茱萸碱对人肝癌细胞HepG2的生长抑制及诱导凋亡作用

目的探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞HepG2的生长抑制、诱导凋亡和对细胞周期的影响。方法体外试验MIT法测存活率,DAPI染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术、彗星电泳技术分析药物对DNA作用。结果吴茱萸碱能抑制人肝癌细胞HepG2的生长。用64、16、4、1、0.25μmol.L-1浓度的吴茱萸碱处理HepG2细胞72 h的抑制率分别为74.0%、69.0%、60.5%、44.0%、16.4%。DAPI染色后吴茱萸碱组癌细胞均表现出较为典型的细胞凋亡特征。流式细胞仪检测1μmol.L-1吴茱萸碱作用24和36 h出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期阻滞于G2/M期。凋亡率对照组为4%,1μmol.L-1吴茱萸碱作用12、24、36 h的凋亡率分别为4.4%、18.0%、30.3%。彗星电泳显示1μmol.L-1吴茱萸碱作用24和48 h后,细胞后面形成长的拖尾,平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,且二者的改变与作用时间相关。结论吴茱萸碱能抑制人肝癌细胞HepG2的生长及诱导其凋亡。

丹参注射液对自杀基因tk/GCV系统的协同增效作用

目的 探讨丹参注射液联合自杀基因系统对大鼠肝癌细胞和小鼠移植瘤的作用。方法 ①丹参注射液以不同浓度与GCV分别或共同作用于大鼠肝癌CBRH7919的tk^-细胞，以及含5％tk^＋的tk^＋、tk^-混合细胞，MTT法检测各组存活率，用Q值（实测药效与理论药效的比值）分析中药与自杀基因系统联合的相互作用是否有协同性，0．85≤Q〈1．15为相加；Q≥1．15为协同。②把小鼠肝癌细胞H22／tk（tk^＋）与H22（tk^-）细胞按1：4混合，再按2×10^6细胞/只接种到Balb／c纯系小鼠腋下皮下组织内，随机分为模型组、丹参（注射液）组、tk／GCV组、tk／GCV联合丹参注射液治疗的联合组，n=9～11；中药治疗从d2起共15d，自杀基因系统治疗从长出肿瘤后开始共10d，进行疗效观察。结果 ①各组存活率tk／GCV组为63．10％±2．17％，GCV组为67．03％±2．81％，5ml·L^-1丹参联合tk／GCV组为26．67％±4．23％（Q=1．22），5ml·L^-1丹参＋GCV组为42．17％±5．36％（Q=1．04）；10ml·L^-1丹参联合tk／GCV组为18．10％±5．56％（Q=1．26），10ml·L^-1丹参＋GCV组为33．84％±9．84％（Q=1．06）。②接种后各组均在d7触摸到肿瘤，成瘤率100％。联合组在治疗后肿瘤生长呈现明显抑制，最终肿瘤体积（1．53±0．88）cm^3，比模型组（3．19±1．76）cm^3减少52．01％（P〈0．05）；肿留质量（1．32±0．80）g，比模型组（2．28±1．20）g减少42．11％（P〈0．05），差异有统计学意义。丹参组、tk／GCV组肿瘤体积、瘤块质量与模型组比较差异均无统计学意义。结论 丹参注射液能提高自杀基因系统对大鼠肝癌细胞的杀伤力和对小鼠肝癌细胞移植瘤的抑制作用，两者联合作用的协同性提示丹参注射液能增强自杀基因旁观者效应。

升麻甘草汤解毒作用的实验研究

升麻甘草汤（由升麻、甘草组成）为临床治疗感染性疾病的经验方。为探讨其解毒作用机制，观察了其对内毒素合Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ＧＡＬＮ）攻击的保护作用。结果表明：升麻甘草汤可降低该模型小鼠的死亡率，并有效改善症状及减少肝脏损伤。

盐酸小檗碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的 :探讨小檗碱诱导人胃癌细胞株MGC 80 3的细胞凋亡。方法 :用 4μg/ml盐酸小檗碱在体外作用于人胃癌MGC 80 3细胞 48小时后进行吖啶橙染色、荧光照相 ,同时用原位末端标记 ,检测给药 48小时后MGC 80 3细胞的凋亡情况。结果 :荧光照相发现MGC 80 3细胞呈典型的凋亡细胞形态 ,细胞核和细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色 ,甚至可见黄绿色碎片 ;而原位末端标记法 (insituend labelling ,ISEL)检测结果显示盐酸小檗碱组细胞凋亡指数显著高于空白对照组 (P <0 .0 5 )。 结论 :盐酸小檗碱诱导了人胃癌MGC 80 3细胞的凋亡。

HSV1-tk自杀基因系统对小鼠黑色素瘤的杀伤和抑制效应

【目的】检测自杀基因系统单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV1-tk/GCV)对小鼠黑色素瘤的杀伤和抑制效应。【方法】将B16/tk(tk+)细胞和未经修饰的B16(tk-)细胞按tk+细胞占总细胞数的0%、10%、20%、40%、80%比例分别进行混合,各组细胞于96孔板中培养,加入丙氧鸟苷(GCV)至15.7μmol/L,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同tk+细胞比例的HSV1-tk/GCV系统在体外对肿瘤细胞的杀伤率。各组混合细胞分别接种于小鼠腋下,以GCV注射液按100 mg.kg-1.d-1进行治疗,检测瘤体体积、湿质量,测定抑瘤效应。【结果】tk+比例10%以上治疗组,HSV1-tk/GCV系统对黑色素瘤B16细胞均有明显杀伤效应,但旁杀伤作用不明显;从移植瘤体积看,20%以上tk/GCV治疗组肿瘤呈现明显生长抑制状态(P<0.05),以80%tk/GCV治疗组作用最显著(P<0.01);从移植瘤质量看,80%tk/GCV治疗组肿瘤呈现明显生长抑制状态(P<0.01),其他组虽随着tk+细胞比例的增高瘤体平均质量下降,但差异无显著性意义。【结论】HSV1-tk/GCV系统对小鼠黑色素瘤的杀伤和抑制效应均随着B16/tk细胞比例的增高而增强,已建立显示出体外杀伤效应和体内抑瘤活性的小鼠黑色素瘤自杀基因系统。

荧光原位杂交检测慢性粒细胞白血病衍生9号染色体缺失的研究

目的:运用特殊位点(LSI)9q34探针荧光原位杂交技术(FISH)研究慢性粒细胞白血病(CML)患者衍生9号染色体部分序列缺失的情况,并探讨临床意义。方法:对42例CML患者进行常规染色体核型分析,采用BCR/ABL双色双融合或ES探针对骨髓间期细胞进行FISH检测,同时运用9q34探针检测有无衍生9号染色体部分序列缺失。结果:42例染色体核型分析中,35例为典型的t(9;22)染色体易位,4例为复杂易位。42例患者均行FISH检测证实为BCR/ABL融合基因阳性。运用9q34探针检测所有42例患者中发现有6例伴有衍生der(9)部分序列缺失,发生率为14%,发生复杂易位的4例患者均未发现der(9)部分缺失。6例发生缺失的患者仅有1例处于慢性期,其中3例患者病程仅为1-2个月,初诊就已诊断为CML加速期或急变期。结论:在CML患者中der(9)部分缺失的发生率为14%,伴有der(9)部分缺失的患者多表现为慢性期短,建议所有BCR/ABL融合基因阳性的CML患者应常规使用9q34探针检测der(9)有无缺失。

自体移植法复制大鼠子宫内膜异位症模型

目的 :研究自体移植法所造大鼠子宫内膜异位症模型性周期的改变 ,观察模型大鼠子宫内膜的病理特征 ,分析该模型是否能代表子宫内膜异位症患者所表现的月经失调、不孕等病理状态。方法 :参照文献报道方法 ,取大鼠子宫内膜自体移植制造子宫内膜异位症动物模型 ,并剖腹验证造模成功。以阴道细胞涂片法研究大鼠造模前后性周期的变化 ,并剥取模型大鼠在位与异位子宫内膜组织 ,及正常大鼠同时期子宫内膜 ,石蜡包埋切片 ,研究其病理差异。结果 :造模 8周后部分大鼠出现性周期紊乱。在位子宫内膜发育延迟 ,而异位子宫内膜发育更迟。结论 :以自体移植法造大鼠子宫内膜异位症模型 ,部分模型大鼠表现性周期紊乱、在位子宫内膜发育延迟导致胚胎种植环境不良及异位内膜的旁分泌干扰 ,可代表子宫内膜异位症患者月经失调。

Her2和Met蛋白在肺腺癌中的表达及意义

目的探讨表皮生长因子受体2(Her2)和间质表皮转化因子(Met)在肺腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化法检测Her2与Met在肺腺癌(40例)、癌旁组织(36例)及正常肺组织(20例)中的表达,分析表达情况与肺腺癌临床病理特征间的关系。结果 Her2与Met在正常肺组织表达低或无表达;Met在癌旁组织阳性表达率高于正常肺组织(P<0.05);两者在肺腺癌表达增高,以阳性及强阳性表达为主(P<0.05);两者表达与年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、TNM分级、分化程度无相关,但与淋巴结转移相关。两者在肺腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.83,P<0.05)。结论 Her2与Met的表达水平可反映肺腺癌的淋巴结转移倾向,在靶向治疗前检测肺腺癌Her2和Met的表达,将对耐药和淋巴结转移的预测有指导作用。

RO3306对人结肠癌细胞HT29增殖及凋亡的影响

目的观察RO3306对人结肠癌细胞HT29增殖及凋亡的影响。方法选用苔盼蓝染色细胞计数法、细胞集落形成法检测RO3306对人结肠癌细胞HT29细胞增殖影响;采用流式细胞术检测RO3306对HT29细胞周期及凋亡指数的影响。结果苔盼蓝染色和集落形成法结果均显示,RO3306作用HT29细胞后,细胞的生长抑制率随着药物浓度的增加、作用时间的延长而逐渐增高;流式细胞仪检测结果显示,RO3306在0.2mg/L,2mg/L浓度下作用48h对HT2凋亡指数呈现随浓度的提高而逐步上升的趋势,当药物浓度增加到20mg/L,HT29的凋亡指数显著上升,其细胞周期有明显阻滞,随着作用时间的推移出现了更明显的S期阻滞。结论 RO3306具有时间和浓度依赖性地抑制大肠癌HT29细胞的增殖,阻滞其细胞周期、诱导其凋亡。

靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响

目的探讨靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞增值和凋亡的影响。方法分别用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24、48、72h,采用MTT法检测细胞抑制率;用0、10、20、40μmol/L靛玉红甲肟作用于HepG2细胞24h后收集样品,采用流式细胞术法检测细胞周期及其凋亡率。结果 MTT法测定靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞的增殖具有抑制作用,且表现出剂量和时间的依赖性,随着浓度升高时间加长,抑制明显(P<0.01)。流式细胞术测定也表明靛玉红甲肟对肝癌HepG2细胞有诱导凋亡的作用,凋亡随着靛玉红甲肟浓度的增大不断地增加。细胞形态学方面也可观察出细胞随着靛玉红甲肟剂量和时间的增大而逐渐出现越来越多的凋亡,细胞核染色质深染,聚集于核膜下呈新月形,细胞膜突起呈小泡样,小泡脱落形成含核小体片段的凋亡小体。结论靛玉红甲肟确实可以诱导HepG2细胞凋亡,但靛玉红甲肟对肝癌细胞作用机制还不明确,需要作进一步的深入研究。