小干扰RNA抑制HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒复制与表达

目的了解基于载体的siRNA对HepG2.2.15细胞中HBV的抑制作用,观察特异性siRNA载体对细胞的毒副作用及可能的非靶向效应,探讨新的抗病毒治疗手段。方法根据GenBank收录HepG2.2.15细胞系中HBV基因全序列,设计构建针对HBV的C基因区的3条siRNA的双链复合体,经退火连接入p-Silencer-Cmv4.1载体,连接产物转化JM109细胞,载体经聚丙烯酰胺凝胶电泳及测序鉴定后中量超纯提取质粒,定量后与转染试剂siPort XP-1转染HepG2.2.15细胞。免疫荧光及Western blot检测病毒蛋白HBsAg、HBeAg的表达;RT-PCR检测HBV RNA的表达变化;Real-time PCR定量检测HBV DNA拷贝变化。同时采用MTT法检测细胞的生长曲线与生长率。ELISA法检测IFN-α的表达变化。结果Western Blot结果显示在转染第3天p-C2对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为(81.15±0.69)%、(88.12±0.92)%,免疫荧光显示同样结果。RT-PCR检测结果显示C基因特异的表达性siRNA可以显著抑制HBV的mRNA表达,对C区HBV mRNA的抑制达96.9%。定量PCR检测显示特异性siRNA使HBV DNA拷贝数降低102个数量级。而MTT检测表明该特异性siRNA表达载体不影响细胞的生长曲线与生长率,治疗组与对照组比较无差异。ELISA法检测表明特异性siRNA并不影响细胞干扰素的表达,p-C1、p-C2、p-C3组与未转染组、p-NC组比较表达均无差异。结论基于载体的特异性siRNA在体外可抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达。该抑制作用是特异性的,同时对细胞无明显毒副作用。该作用为基因水平的裂解作用,不会出现耐药现象。

肾局部内皮素、一氧化氮在尿蛋白产生中的作用

目的 :为明确肾局部内皮素 (ET)和一氧化氮 (NO)在蛋白尿产生中的作用 ,作者观察了阿霉素肾病鼠血浆及肾皮质ET、NO含量在蛋白尿发生发展过程中的变化及其与尿蛋白含量的关系。方法 :( 1)一次性注射法复制大鼠阿霉素肾病综合征模型 ,并隔日留 2 4h尿测取尿蛋白含量 ;( 2 )分别于蛋白尿前期、上升期、高峰期及下降期取血浆及肾皮质匀浆 ,用放射免疫法检测ET含量 ,用Griess法检测NO代谢产物NO-2 代表NO水平 ;( 3 )分别研究了血浆及肾皮质中ET、NO与尿蛋白量两两间的相关性。结果 :正常鼠尿蛋白排泌量 4 - 7(mg/d) ,肾病鼠 4个时间点尿蛋白排泌量分别为 5、10、2 4 1和 2 0 1mg/d ,于蛋白尿上升期始有显著意义的增加 ,3 2d为高峰期 ,5 6d有所下降。蛋白尿前期、上升期、高峰期和下降期的血浆ET值分别为 13 4、15 0、5 3 8、4 4 5ng/L ,自上升期始明显高于同期对照组( 12 6- 12 9ng/L) ;肾皮质ET分别为 3 64 6、65 3 3、15 2 6 8、13 93 6pg/g肾皮质 ,自蛋白尿前期始均明显高于对照组( 2 3 5 9- 2 4 6 1pg/g ,P <0 0 5 ) ;4个时点血浆NO-2 值分别为 4 0、3 6、8、11μmol/L ,自上升期始明显低于对照组 ( 4 2 - 4 6μmol/L) ;肾皮质NO-2 值分别为 80、69、8、2 5nmol/g肾皮质 ,自蛋白尿前期始明显低于对?

胰岛素样生长因子Ⅰ对糖尿病大鼠拔牙后牙槽骨改建的影响

目的研究胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对糖尿病大鼠拔牙后牙槽骨改建的影响,为糖尿病性牙周病的治疗提供依据。方法对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠拔牙后进行胰岛素和胰岛素样生长因子Ⅰ治疗,通过X线、组织切片苏木精-伊红染色和四环素双标记的方法观察牙槽骨改建情况。结果与正常组相比,糖尿病大鼠拔牙创骨愈合减慢,骨形成减少,牙槽骨高度和牙槽骨骨形成率显著降低。IGF-Ⅰ的治疗不仅能控制糖尿病大鼠的血糖保持在正常范围内,还可以增加牙槽骨高度和提高骨形成率。结论IGF-Ⅰ的治疗可以促进糖尿病大鼠拔牙创骨愈合和增加骨形成量,且与胰岛素治疗之间没有明显差别。

白细胞介素6对肾小球上皮细胞合成硫化合物的影响

白细胞介素６对肾小球上皮细胞合成硫化合物的影响王丹，杨霁云，王宝琳（北京医科大学第一附属医院儿科北京１０００３４）白细胞介素６（ＩＬ－６）是机体免疫系统中重要的调节因子，参与了机体炎症过程。肾小球疾病时，可见血清ＩＬ－６水平改变。肾小球上皮细胞（ＧＥ...

特布他林和布地奈德气雾剂佐治毛细支气管炎临床观察

目的 :探讨特布他林和布地奈德气雾剂对毛细支气管炎患儿的辅助治疗效果。方法 :5 6例毛细支气管炎患儿随机分为两组 :对照组常规治疗 ,治疗组在对照组的基础上吸入硫酸特布他林和布地奈德气雾剂。结果 :治疗组在喘憋、发绀、肺部哮鸣音等体征改善的时间比对照组明显缩短 ,差异显著 (P <0 0 1) ;两组患儿治疗前后血清IgG、IgE水平无明显改变 (P >0 0 5 ) ;两组患儿血清皮质醇水平治疗前后无明显差异 (P >0 0 1) ,治疗组未出现声音嘶哑、鹅口疮等。结论 :特布他林和布地奈德气雾剂治疗毛细支气管炎可明显缩短病程 ,有效减轻喘憋、紫绀等 ;治疗剂量内未见不良反应。

阿霉素肾病大鼠及急性血清病家兔血清唾液酸含量观察

为了探讨血清唾液酸与肾病类型及症状的关系,本文分别观察了阿霉素性微小病变型肾病综合征大鼠(肾病鼠)和急性血清病肾炎家兔(肾炎兔)。结果显示:①两种动物模型的血清唾液酸(serum sialic acid,SSA)均明显升高。②肾病鼠SSA分别与尿蛋白含量、血清白蛋白、血清胆固醇以及肾小球上皮细胞是突裂隙数分别呈密切直线相关;③肾炎兔SSA与尿蛋白含量呈正相关,与肾小球细胞数的变化相平行。结果提示,SSA升高与肾病类型无关,而与肾脏病变程度有一定联系。

缺氧缺血再灌注新生鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白、神经生长因子对神经元的保护作用

目的探讨神经元的抗凋亡保护机制,评价环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)、神经生长因子(NGF)对神经元损伤后的保护作用。方法7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤(HIBD)未治疗组、小干扰RNA(siRNA)治疗组、siRNA加NGF治疗组。按照改良的Rice法制备HIBD再灌注模型,各治疗组于再灌注后开始予1次siRNA干预治疗(10mg/kg);siRNA加NGF组予NGF(15μg/kg),1次/d。于治疗的不同时间通过免疫组织化学和Western blot法检测磷酸化的CREB、NGF在仔鼠HIBD再灌注后海马、丘脑神经元的表达变化。通过Thionine染色检测神经元凋亡。结果HIBD未治疗组3h仔鼠右侧海马CA1区磷酸化的CREB(p-CREB)表达达高峰,7d后降至假手术对照水平。3hNGF表达开始增加,12h持续达高峰,7d后仍明显高于假手术组(P<0.05)。siRNA治疗组p-CREB与NGF表达随时间逐渐下降。HIBD再灌注未治疗组24h右侧海马CA1区已有明显的凋亡,7d神经元凋亡与假手术组相比无统计意义。siRNA治疗组神经元有大量的丢失;而siRNA加NGF治疗组神经元与假手术组比较无明显丢失。结论CREB经信号转导调节大鼠NGF的表达,从而促进其神经元损伤后修复,减少神经元死亡。

阿霉素肾病大鼠肾小球系膜细胞部分生物活性的改变

本文应用肾小球细胞体外培养方法和双同位素标记技术,观察了阿霉素肾病大鼠肾小球系膜细胞(GMC)对白细胞介素6的反应、肾病大鼠GMC条件培养液(GMC-CM)对正常大鼠GEC掺人^(35)S和~3H-亮氨酸的影响以及GMC-CM对小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞增殖的作用。结果显示:①肾病大鼠GMC对不同浓度IL-6的反应曲线与正常GMC明显不同;②肾病极期GMC-CM明显促进正常大鼠GEC合成含硫化合物;③肾病大鼠GMC-CM中含有骨髓瘤细胞的杀伤物质。以上结果提示,阿霉素肾病大鼠GMC的部分生物活性发生了改变。

高分辨率计算机断层照像术诊断支气管扩张症1例

女,12岁,8个月内两次肺部感染,临床表现发热、咳嗽、咳痰,胸片病变在同一部位,为右下肺中野心缘旁的大片状阴影,非支气管扩张(支扩)的典型改变.病原学检查未发现异常.为排除异物及结核等病变进行胸部常规CT检查,发现右下肺的条索状致密影见图1,进一步行高分辨率CT(HRCT)检查,结果显示支扩的典型征象(印戒征和轨道征),病变呈柱状扩张,确诊支扩症见图2,3.经10～15 d的抗感染治疗,病情好转出院.

新生儿缺氧缺血性脑病的电解质动态观察(附83例分析)

目的：分析新生儿缺氧缺血性脑病患儿1周内血电解质动态改变、方法：选择生后1周新生儿缺氧缺血性脑病患儿和正常健康足月新生儿，取股静脉血，用贝克曼电解质测定仪进行钾、钠、氯、钙、镁离子测定、结果：钠、氯离子在生后1天呈低值的情况下至第3天仍是下降，与对照组比较差异显著（P＜0．001），直至第7天才接近正常值；钙离子则由低值逐渐上升至第7天才接近正常值，但与对照组比较差异仍较明显（P＜0．01）；钾离子、镁离子经统计学分析无明显改变。结论：新生儿缺氧缺血性脑病患儿1周内有低钠、低氯表现，血钙明显下降，而血钾、镁无明显下降。

小儿特发性IgM肾病与微小病变肾病综合征的临床病理研究

对于ＩｇＭ在肾小球系膜区沉积的临床和病理意义争论颇多，我们就２５例ＩｇＭ肾病（ＩｇＭＮ）与１６例微小病变肾病（ＭＣＮＳ）患儿的临床与病理进行对比分析，结果表明ＩｇＭＮ与ＭＣＮＳ临床表现极为相似。但ＩｇＭＮ对肾上腺皮质激素治疗反应不佳，且易反复或复发。这可能与ＩｇＭＮ的病理改变较重有关。另外作者还对ＩｇＭ在系膜区沉积潜在的临床与病理意义进行了初步探讨。

缓解与反复的肾病综合征患儿的病理动态对照分析（29例小儿重复肾活检报告）

本文动态对比分析了２０例长期缓解与９例有反复的小儿肾病综合征病理学改变，结果表明缓解组ｌｇＧ，Ｃ３沉积随病情好转而明显减少（Ｐ＜０．０５）。反复组ＩｇＧ沉积下减少，Ｃ３，Ｆｉｂ因病情反复而明显增多（Ｐ＜０．０５）。缓解组ＩｇＧ，Ｃ３，Ｆｉｂ沉积减少程度明显优于反复组（Ｐ＜０．０５～０．００１）。虽然在首次活检时反复组病理改变比缓解组严重，但是缓解组前后的病理形态改善程度明显优于反复组（Ｐ＜０．００１），肾小球病变的消长与肾间质病变具有同步性，小儿肾病综合征病理类型之间具有可变性。因此作者认为，两组病人肾脏对免疫复合物清除能力不同决定了病理学的改变及临床转归，肾间质病变与肾小球病变在发病机理上可能有一定的联系，另外，小儿肾病综合征病理改变是一动态变化的过程，病理学的变化决定了临床表现。

葡萄糖对成骨细胞体外发育和葡萄糖载体1表达的影响

目的 探讨葡萄糖对成骨细胞体外发育和葡萄糖载体1表达的影响.方法 组织块培养法培养新生大鼠颅骨成骨细胞,再将成骨细胞分两组培养：正常浓度组（含5.5 mmol/L葡萄糖培养液）和高浓度组（含25.5 mmol/L葡萄糖培养液）.四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,茜素红S钙染色法检测骨结节形成,反转录（RT）PCR和Western免疫印迹检测成骨细胞葡萄糖载体1 mRNA和蛋白表达情况.结果 与正常浓度葡萄糖相比,高浓度葡萄糖在第3、4、5天显著促进成骨细胞的增殖[ （0.390 0±0.002 4）比（0.320 0±0.012 7）,（ 0.540 0±0.009 4）比（0.440 0±0.004 6）,（ 0.720 0±0.001 3）比（0.600 0±0.006 1）,均P＜0.05],但抑制其矿化和骨结节形成.正常浓度组形成肉眼可见的钙化结节要早于高浓度组（第9天比第14天）.实验最后ld（第32天）,高浓度组的骨结节数明显少于正常浓度组（P＜0.05）.与正常浓度组相比,高浓度葡萄糖使成骨细胞葡萄糖载体l mRNA和蛋白的表达增加.结论 高浓度葡萄糖刺激成骨细胞增殖但抑制细胞矿化可能直接引起成骨细胞骨形成障碍.高浓度葡萄糖引起成骨细胞葡萄糖载体1表达的改变可能在骨质量变化过程中起重要作用.

乙型肝炎病毒特异性小干扰RNA对转基因小鼠毒副作用的评价

目的探讨基于载体的表达性小干扰RNA(siRNA)对乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠的毒副作用。方法 siRNA表达载体经微静脉注射转染HBV转基因小鼠,设立特异性siRNA组、PBS对照组、阴性质粒对照组及正常Balb/c小鼠对照组。在注射后5 d、12 d、19 d、26 d、33 d、2个月和3个月的不同时间,经其内眦静脉采血检测小鼠ALT水平变化。ELISA方法检测其血清干扰素-α(IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。W estern blot检测其肝脏组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、原癌基因(c-Fos)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达变化。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,HE染色进行组织病理学观察。结果基于聚合酶Ⅲ(PolⅢ)的siRNA表达载体与基于聚合酶Ⅱ(PolⅡ)的siRNA表达载体相比,长期作用机体可使转基因小鼠血清ALT水平显著升高(P<0.05);ELISA分析发现IFN-α水平前者似乎高于后者,但差异无统计学意义(P>0.05)。在治疗26 d,直到治疗3个月,特异性siRNA治疗组与PBS对照组相比,TNF-α表达在PolⅢ组表达明显降低(P<0.05);而PolⅡ组TNF-α表达与PBS对照组比较差异无统计学意义。W estern blot结果表明肝组织Bcl-2、c-Fos表达显著增加,而Bax表达明显降低(P<0.05),且该组凋亡分析表明细胞凋亡被明显抑制。组织形态学可见肝细胞出现二倍体,核仁增大,核膜清晰可见。结论基于PolⅢ的siRNA表达载体与PolⅡ的siRNA表达载体相比对肝细胞有一定的毒副作用,凋亡被抑制,细胞增殖失控。过强表达的HBV特异性siRNA可影响机体的生物网络调控,导致增殖与凋亡的失衡。