目的:观察microRNA-21(miR-21)在缺血再灌注损伤(I/R)早期大鼠心肌的表达及对细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组(冠状动脉注射转染空白对照病毒rAAV9-ZsGreen),miR-21组(冠状动脉注射转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21),Sham组(仅...目的:观察microRNA-21(miR-21)在缺血再灌注损伤(I/R)早期大鼠心肌的表达及对细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组(冠状动脉注射转染空白对照病毒rAAV9-ZsGreen),miR-21组(冠状动脉注射转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21),Sham组(仅开胸挂线),I/R组(进行I/R处理),I/R+miR-21(转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21后再进行I/R处理)。用Realtime-PCR检测大鼠miR-21水平,免疫组织化学及Western印迹方法检测Bcl-2,Bax,caspase-3水平并计算Bcl-2/Bax比值。结果:冠状动脉注射rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21可使miR-21表达增加4.43倍(P<0.001);与Sham组比较,I/R组大鼠缺血区miR-21水平下调(P<0.05),而非缺血区miR-21升高(P<0.05);与Sham组比较,I/R组再灌注1,2,6 h miR-21水平进行性下降(P<0.05),在同一时间点I/R+miR-21组较I/R组miR-21表达升高(P<0.05);与Sham组比较,再灌注6h时I/R及I/R+miR-21组Bcl-2增高、caspase-3增高、Bcl-2/Bax降低(P<0.05),与I/R组比较,I/R+miR-21组Bcl-2下调、caspase-3下调、Bcl-2/Bax增高(P<0.05)。结论:I/R早期大鼠心肌缺血区miR-21表达下降,细胞凋亡增加,过表达miR-21可改善细胞凋亡。展开更多
目的观察不同浓度条件下,细胞接触对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为心肌细胞(CM)的诱导作用。方法利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的转基因大鼠的BMSCs与CM以不同比例(1∶1、1∶10、1∶20、1∶40)共培养1周,分别采用免疫荧光染色及流式细胞...目的观察不同浓度条件下,细胞接触对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为心肌细胞(CM)的诱导作用。方法利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的转基因大鼠的BMSCs与CM以不同比例(1∶1、1∶10、1∶20、1∶40)共培养1周,分别采用免疫荧光染色及流式细胞计数分析检测肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、α-sarcom eric actin in和MEF-2C等心肌特异性蛋白,采用膜片钳技术检测分化细胞的电生理功能。结果在共培养条件下,部分GFP-BMSCs可表达一系列心肌表面标记物,如心肌特异性cTnI蛋白等,且获得心肌分化表型的数量随着CM数量的增加而增加。部分GFP-BMSCs与CM一起同步搏动,并可获得与CM相似的膜电位。结论细胞接触可诱导BMSCs获得有功能的心肌分化表型,其数量与心肌的数量不同浓度有相对的依赖性,随着心肌数量的增加而增加。展开更多
目的研究含荧光标记ZsGreen的9型重组腺相关病毒(rAAV9)转染目的基因microRNA-21前体(pre-miR-21)至大鼠心肌的转染效率、表达时间及安全性。方法用冠脉注射方法转染PBS及rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21 1.0×1010vg/只、1.0×1011...目的研究含荧光标记ZsGreen的9型重组腺相关病毒(rAAV9)转染目的基因microRNA-21前体(pre-miR-21)至大鼠心肌的转染效率、表达时间及安全性。方法用冠脉注射方法转染PBS及rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21 1.0×1010vg/只、1.0×1011vg/只、1.0×1012vg/只至SD大鼠心肌,倒置荧光显微镜观察心肌组织荧光表达并计算转染效率,Realtime PCR方法测定miR-21表达,超声心动图观察大鼠心功能。结果冠脉注射后7 d PBS组未见绿色荧光,余各组大鼠心肌均可观察到少量绿色荧光表达,第14天达高峰,之后呈下降趋势。14 d高病毒量组较其他中、低病毒量组转染效率明显高([73.7±8.4)%vs(39.6±4.8)%,(P<0.001)];([73.7±8.4)%vs(24.1±4.2)%,(P<0.001)]。14 d miR-21表达在低、中、高病毒量组较PBS组分别增加1.51倍、2.89倍及4.43倍。rAAV9转染后对大鼠心功能无影响(P>0.05)。结论 rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21可以有效、持久、安全地在大鼠心肌表达。展开更多
文摘目的:观察microRNA-21(miR-21)在缺血再灌注损伤(I/R)早期大鼠心肌的表达及对细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组(冠状动脉注射转染空白对照病毒rAAV9-ZsGreen),miR-21组(冠状动脉注射转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21),Sham组(仅开胸挂线),I/R组(进行I/R处理),I/R+miR-21(转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21后再进行I/R处理)。用Realtime-PCR检测大鼠miR-21水平,免疫组织化学及Western印迹方法检测Bcl-2,Bax,caspase-3水平并计算Bcl-2/Bax比值。结果:冠状动脉注射rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21可使miR-21表达增加4.43倍(P<0.001);与Sham组比较,I/R组大鼠缺血区miR-21水平下调(P<0.05),而非缺血区miR-21升高(P<0.05);与Sham组比较,I/R组再灌注1,2,6 h miR-21水平进行性下降(P<0.05),在同一时间点I/R+miR-21组较I/R组miR-21表达升高(P<0.05);与Sham组比较,再灌注6h时I/R及I/R+miR-21组Bcl-2增高、caspase-3增高、Bcl-2/Bax降低(P<0.05),与I/R组比较,I/R+miR-21组Bcl-2下调、caspase-3下调、Bcl-2/Bax增高(P<0.05)。结论:I/R早期大鼠心肌缺血区miR-21表达下降,细胞凋亡增加,过表达miR-21可改善细胞凋亡。
文摘目的观察不同浓度条件下,细胞接触对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为心肌细胞(CM)的诱导作用。方法利用表达绿色荧光蛋白(GFP)的转基因大鼠的BMSCs与CM以不同比例(1∶1、1∶10、1∶20、1∶40)共培养1周,分别采用免疫荧光染色及流式细胞计数分析检测肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、α-sarcom eric actin in和MEF-2C等心肌特异性蛋白,采用膜片钳技术检测分化细胞的电生理功能。结果在共培养条件下,部分GFP-BMSCs可表达一系列心肌表面标记物,如心肌特异性cTnI蛋白等,且获得心肌分化表型的数量随着CM数量的增加而增加。部分GFP-BMSCs与CM一起同步搏动,并可获得与CM相似的膜电位。结论细胞接触可诱导BMSCs获得有功能的心肌分化表型,其数量与心肌的数量不同浓度有相对的依赖性,随着心肌数量的增加而增加。
文摘目的研究含荧光标记ZsGreen的9型重组腺相关病毒(rAAV9)转染目的基因microRNA-21前体(pre-miR-21)至大鼠心肌的转染效率、表达时间及安全性。方法用冠脉注射方法转染PBS及rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21 1.0×1010vg/只、1.0×1011vg/只、1.0×1012vg/只至SD大鼠心肌,倒置荧光显微镜观察心肌组织荧光表达并计算转染效率,Realtime PCR方法测定miR-21表达,超声心动图观察大鼠心功能。结果冠脉注射后7 d PBS组未见绿色荧光,余各组大鼠心肌均可观察到少量绿色荧光表达,第14天达高峰,之后呈下降趋势。14 d高病毒量组较其他中、低病毒量组转染效率明显高([73.7±8.4)%vs(39.6±4.8)%,(P<0.001)];([73.7±8.4)%vs(24.1±4.2)%,(P<0.001)]。14 d miR-21表达在低、中、高病毒量组较PBS组分别增加1.51倍、2.89倍及4.43倍。rAAV9转染后对大鼠心功能无影响(P>0.05)。结论 rAAV9-Zs-Green-pre-miR-21可以有效、持久、安全地在大鼠心肌表达。