氯化镉诱发16HBE细胞恶性转化中hOGG1基因表达和序列变化的研究

目的:探讨氯化镉诱发人支气管上皮(16HBE)细胞系恶性转化过程中hOGG1基因mRNA和蛋白动态变化的规律及其序列变化情况。方法:用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5、15和35代细胞及成瘤细胞)hOGG1基因mRNA和蛋白的表达情况;用直接测序法分析hOGG1基因第7外显子的序列情况。结果:随着转化代数的增加,hOGG1基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,到第15代细胞后表达明显下降(P<0.05);hOGG1基因第7外显子第162位点插入一个腺嘌呤A,为移码突变。结论:hOGG1基因水平的下调和突变可能是氯化镉分子致癌的重要机制。

氯化镉诱发人支气管上皮细胞恶性转化中hMSH2基因mRNA表达变化

目的探讨氯化镉诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化过程中hMSH2基因mRNA动态变化的规律。方法用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)技术检测16HBE、氯化镉恶性转化16HBE系不同阶段(第5、15、32代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因mRNA的表达情况。结果随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA的表达逐渐降低,到第32代细胞后表达明显下降(P<0.01)。结论氯化镉诱发16HBE系恶性转化过程中hMSH2基因表达逐渐下降,hMSH2基因水平的改变可能是氯化镉的致癌机制之一。

错配修复基因在氯化镉致16HBE细胞转化中作用

目的探讨氯化镉诱发人支气管上皮(16HBE)细胞系恶性转化过程中错配修复基因hMSH2和hMLH1的mRNA和蛋白动态变化情况。方法用反转录一聚合酶链反应(PT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5,15,35代细胞及成瘤细胞)hMSH2基因和hMLH1基因的mRNA和蛋白的表达情况。结果随着转化代数的增加,hMSH2基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,至第35代细胞后表达明显下降(P<0.01);而hMLHl基因的mRNA和蛋白表达水平在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中无明显变化差异(P>0.05)。结论错配修复基因hMSH2表达水平的下调可能是镉化物分子致癌的重要机制。

镉恶化转化16HBE细胞中核苷酸切除修复基因的表达

目的探讨氯化镉恶性转化人支气管上皮(16HBE)细胞过程中核苷酸切除修复基因ERCC1和ERCC2基因的mRNA和蛋白动态变化规律。方法用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞不同阶段(第5、15、35代细胞及成瘤细胞)ERCC1和ERCC2基因的mRNA和蛋白的表达情况。结果随着转化代数的增加,ERCC1基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,到第35代细胞后表达明显下降(P<0.01);而ERCC2基因的mRNA和蛋白表达水平在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中差异无统计学意义(P>0.05)。结论镉化物的致癌机制可能与ERCC1基因表达水平下调有关。

氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中DNA损伤的研究

目的探讨氯化镉恶性转化人支气管上皮(16HBE)细胞中DNA断裂损伤情况,进一步揭示氯化镉的致癌机制。方法采用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验)检测氯化镉恶性转化人支气管上皮细胞中非转化16HBE细胞、氯化镉恶性转化第15代、第35代细胞及成瘤细胞的DNA链断裂情况。结果与非转化16HBE对照细胞比较,氯化镉恶性转化16HBE第15代、第35代细胞和氯化镉诱发16HBE恶性转化细胞接种裸鼠成瘤细胞的DNA损伤率分别达22.00%、46.75.00%和49.00%,明显高于非转化16HBE细胞的4.75%损伤率(P<0.001),三种细胞彗星尾长也显著大于非转化16HBE细胞(P<0.001)。结论细胞DNA损伤可能是镉化物分子致癌的重要机制。

脐血CD34^+细胞巨核系定向诱导分化的研究

目的 :研究TPO与SCF、IL - 11协同在体外促进入脐血CD34+ 细胞向巨核系增殖分化的效应。方法 :利用流式细胞仪分离纯化脐血CD34+ 细胞 ,在含血清液体培养体系中、细胞因子诱导下培养 14d。采用流式细胞术测定不同时间点培养体系中CD4 1+ 细胞的比例 ;同时采用甲基纤维素半固体集落培养测定CFU -MK的数量。结果 :经 14d培养 ,TPO +SCF +IL - 11组可使CD4 1+ 细胞和CFU -MK数量分别扩增 4 0 .83± 12 .4 1倍、7.86±2 .6 3倍 ,明显高于TPO组的 2 8.6 9± 8.2 7倍、4 .4 8± 1.2 5倍。结论 :在体外SCF和IL - 11可以协同增强TPO诱导脐血CD34+

In Situ-RT PCR定量检测16例慢性粒细胞白血病仇bcr/abl融合基因

目的 研究原位逆转录多聚酶链反应技术（Ｉｎ Ｓｉｔｕ－ＲＴ ＰＣＲ）在检测慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因中的应用价值及其意义。方法：用 Ｉｎ Ｓｉｔｕ－ＲＴ ＰＣＲ方法测定 ＣＭＬ病人ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因表达量。结果：在不破坏细胞完整性条件下细胞系Ｋ５６２和ＣＭＬ病人检测到ｂｃｒ／ａｂｌＲＮＡ的扩增产物，表现为细胞浆内出现蓝紫色颗粒，计算这种阳性细胞的百分率来相对定量地检测ＣＭＬ病人ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＮＡ的表达水平，这种检测技术的敏感性达１０－４水平以上。结论：Ｉｎ Ｓｉｔｕ－ＲＴ ＰＣＲ可以相对定量地检测ＣＭＬ病人ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＮＡ的表达，直观地评价α－干扰素（α－ＩＦＮ）、骨髓移植（ＢＭＴ）等治疗ＣＭＬ的疗效，本检测方法敏感性高，又可用做微小残留病（ＭＲＤ）的检测。

氯化镉诱发人支气管上皮细胞恶性转化中hMSH2基因表达和序列的变化

目的观察氯化镉（CdCl2）诱发人支气管上皮（16HBE）细胞系恶性转化过程中human MutS homologue 2（hMSH2）基因mRNA和蛋白动态变化的规律及其序列突变情况，进一步探讨CdCl2的致癌机制。方法用反转录-聚合酶链反应（PT-PCR）和免疫组织化学（SP）法检测16HBE细胞、CdCl2恶性转化16HBE细胞系不同阶段（第5、15、35代细胞及成瘤细胞）hMSH2基因mRNA和蛋白的表达情况；并测序分析hMSH2基因第6、7、8、9、12外显子的序列情况。结果随着转化代数的增加，hMSH2基因mRNA和蛋白的表达水平逐渐降低，到第35代细胞后表达明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。hMSH2基因第8外显子在第1、2、7位点上均出现胸腺嘧啶T缺失，第9外显子在第20、182位点出现腺嘌呤A缺失，第12外显子在241位点上出现腺嘌呤A插入，所有的突变均为移码突变。结论CdCl2的分子致癌机制可能与hMSH2基因的下调和突变有关。

氯化镉恶性转化16HBE细胞中ERCC1因表达和序列的变化

目的探讨氯化镉（CdCl2）诱发人支气管上皮16HBE细胞恶性转化过程中，ERCCl基因mRNA和蛋白动态变化的规律及其序列变化情况。方法用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学SP法，检测16HBE细胞及其CdCl2恶性转化细胞不同阶段（第5、15、35代细胞及成瘤细胞）ERCCl基因mRNA和蛋白的表达情况。用直接测序法，分析ERCCl基因第3、4外显子的序列情况。结果随着转化代数的增加，ERCCl基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低，至第35代细胞后表达明显下调，mRNA表达从16HBE的0．7028±0．0170下降到第35代细胞的0．3480±0．0453，蛋白表达强度从16HBE的8．40±1．34下降到第35代细胞的0．20±0.44，差异均有统计学意义（P〈0．01）。ERCCI基因第4外显子在第1位点出现腺嘌呤（A）缺失，为移码突变。结论镉致癌的分子机制可能与ERCC1基因水平的下调和突变有关。